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肌萎缩侧索硬化和先天免疫系统

2017年10月4日更新者：Anne-Lene Kjældgaard、Rigshospitalet, Denmark

肌萎缩性侧索硬化症 (ALS) 是一种侵袭性的致命疾病。 ALS 导致控制肌肉有意识运动的神经通路的破坏。这种破坏导致肌肉萎缩症，伴随着移动、呼吸、吞咽和说话的困难增加。在 ALS 患者生命的最后阶段，必须进行呼吸治疗才能呼吸。平均而言，ALS 患者从他或她得到诊断时起还能活 3 年。

该病的病因尚不清楚，目前还没有可以阻止疾病进展的治疗方法。以往的临床研究表明，先天免疫系统，尤其是补体系统在 ALS 的进展中起着重要作用。以级联激活的补体系统是先天系统的一部分，但参与先天免疫系统和获得性免疫系统。以前的临床试验的特点是对补体系统及其测量方式的了解有限。

今天，可以直接测量补体系统的不同成分并了解其对整体免疫反应的贡献。今天也可以检测补体系统的缺陷。所有这些进展都是该项目的基础，该项目是与世界领先的补体系统研究人员之一、来自 Rigshospitalet 的 Peter Garred 教授密切合作开展的。

目的是制定一项关于 ALS 的国家研究项目，以研究先天免疫系统，尤其是补体系统在 ALS 患者中的作用。

从长远来看，希望这将为受这种严重疾病影响的人们提供有针对性和有效的医疗方法。

研究概览

地位

招聘中

条件

详细说明

肌萎缩侧索硬化症 (ALS) 是一种进行性、致命的神经退行性疾病，会影响上下运动神经元。这会导致严重的肌营养不良、反射亢进、肌束震颤和延髓麻痹以及骨骼肌组织。 ALS引起身体疲劳加重，患者很快卧床不起，呼吸不足。ALS的诊断依据埃斯科里亚尔重访。通常必须重复临床和神经生理学测试 (1-4)。

在丹麦，ALS 的发病率为 1-2/100.000 患病率为 4-6/100.000。从诊断时算起的平均生存时间为 3 年，但差异很大。 (5+6)

今天发病机制仍然未知，没有治疗可以阻止肌萎缩侧索硬化的进展。用利鲁唑治疗似乎延长了 2 或 3 个月的中位生存时间 (7)。

未来的医学治疗很可能需要更好地了解 ALS 的发病机制和病理生理学。本研究的目的是基于 ALS 部分或完全由补体激活引起的假设。

补体系统是一个复杂的系统，由血浆中的蛋白质和膜结合蛋白组成，它们共同补充了基于抗体的免疫系统。补体系统是一个自我延续的级联系统，它通过不同的途径被激活。它通过调理作用起作用，其中补体蛋白与微生物结合以激活和靶向粒细胞、单核细胞和巨噬细胞。补体系统还通过激活肥大细胞通过 MAC（膜攻击复合物）引起微生物细胞溶解。它还可以灭活和消除烧毁的免疫复合物以及进行细胞凋亡修复。

最近一项关于视神经脊髓炎的初步研究表明，补体系统如何在一种疾病的发病机制中发挥核心作用，这种疾病以前被错误地认为是弥散性硬化症的早期阶段。这些发现导致采用抗补体药物 (equlizumab) 进行药物治疗，取得了令人鼓舞的结果 (8)。类似的发病机制可能是 ALS 的分子基础。

不同的研究小组试图阐明免疫系统如何参与 ALS 的进展 (9-35)。一些研究支持补体系统对 ALS 的发生和发展至关重要的假设。 (9-28)

在使用 ALS 血浆的几项临床试验中得出的结论是，当与健康的红细胞或健康的神经组织一起孵育时，ALS 血浆具有细胞毒性。一些研究表明细胞毒性是由补体系统引起的。然而，结果不能因此在所有临床试验中重现。这些试验是在几十年前进行的，当时检测补体活性的方法有限。 (9-14)

几项动物试验表明，ALS 始于神经肌肉接头 (NMJ)，因此应被视为远端轴索病变，而不是中枢神经系统疾病，后者是当今对 ALS 的普遍认识。 (27-31)

该项目的目的目的是增加对疾病 ALS 的病理生理学的了解，因为这可能会使我们更接近有针对性的医疗。

该项目组想要研究是否可以恢复先前在 ALS 血浆中发现的独特细胞毒性 (9-14)。如果是这种情况，那么当今的现代方法就可以检测一般免疫系统，尤其是补体系统是否引起了这种细胞毒性。

通过系统收集来自全国各地的 ALS 患者的血液和脊髓液建立一个研究生物库，建立一个关于 ALS 和补体系统的国家研究项目，将确保有机会发现补体系统是否在发病中发挥作用和 ALS 的进展。

此外，将进行一项初步研究，目的是调查 ALS 患者的 NMJ 中是否存在补体活性，正如在 ALS 小鼠研究中所显示的那样。 (28)

假设

ALS 的特征是具有细胞毒性的异常免疫反应和血浆中补体活性增加，其表现如下：
1. 当与健康受试者的红细胞孵育时，ALS 患者的血浆显示溶血活性增加。
2. 与神经健康受试者和患有其他神经系统疾病的受试者的血浆相比，ALS 患者血浆中的补体活性增加。
3. ALS 患者血浆中的溶血活性与补体活性相关。
与来自神经健康受试者和患有其他神经系统疾病的受试者的脊髓液相比，来自 ALS 患者的脊髓液含有增加的补体活性。

患者、材料和方法：

临床试验 1(CT1)：ALS 血浆中的溶血活性和补体系统

受试者人数：25名ALS患者，25名其他神经系统疾病患者，25名健康志愿者

CT1 的过程：从每位患者身上采集血液样本。红细胞和血液的液体部分，即血浆，是分离的。来自不同受试者的红细胞在另一受试者血浆中孵育。在通过加热和抗补体使本补体系统失活后重复相同的试验过程。

临床试验 2(CT2)：旨在绘制补体系统的病例对照研究

受试者人数：100 名 ALS 患者、100 名其他神经系统疾病患者和 100 名神经系统健康患者

CT2的过程：血液样本和脑脊液被准备好，然后冷冻在研究生物库中。然后对来自 3 组受试者的样本进行分析和比较，重点是补体系统：在生物材料中测量补体激活电位。制作细胞因子概况并通过多重测定绘制急性期反应物图。此外，随后在用 RNA 稳定的细胞沉淀上制作 RNA 表达谱。

临床试验 3(CT3)：随着时间的推移，ALS 患者的补体系统 - 一项队列研究受试者人数：20 名 ALS 患者（来自 CT2 的子集）

CT3 的课程：每六个月重复一次 CT2 的课程。随着疾病的进展，分析每位 ALS 患者的补体系统活性。

临床试验 4(CT4)：寻找 ALS 患者 NMJ 中的补体活性

受试者人数：10 名 ALS 患者

CT4 的过程：进行肌肉活检并立即送交部门。 Rigshospitalet 的病理学博士。然后对薄层组织进行染色，以分析肌纤维和 NMJ 以及检测补体活性的存在。

开展研究该项目包括四项临床试验。受试者的纳入是与全国各地医院 ALS 门诊诊所的工作人员一起完成的，对照组的受试者根据下面的纳入地点列表包括在内。

收录网站：

ALS 门诊、神经科诊所、Rigshospitalet Glostrup (CT1+2+3+4) 联系人：首席医师 Elisabeth Elmo 神经科诊所、Rigshospitalet Glostrup（神经控制组，CT1+2）联系人：教授、主任医师、dr.med. Rigmor Højland Jensen 神经外科诊所，Rigshospitalet（神经控制组，CT2）联系人：教授，主任医师，医学博士。 Marianne Juhler ALS 门诊诊所，神经科，Bispebjerg 医院 (CT2) 联系人：Merete Karlsborg ALS 门诊诊所，神经科，Roskilde 医院 (CT2 + 3) 联系人：主任医师 Helle Thagesen ALS 门诊诊所，神经科，欧登塞大学医院 (CT2) 联系人：主任医师，医学博士。 Nørrebrogade 奥尔胡斯医院神经科 Matthias Bode ALS 门诊诊所（临床试验 2）联系人：主任医师，博士 Anette Torvin Gildhøj 私立医院，Brøndby（神经健康对照组，临床试验 2）联系人：麻醉师 Niels Anker Pedersen

功率计算 CT1：ALS 血浆中的溶血活性和补体系统 Overgaard 等人的研究。 (18) 发现 ALS 患者和健康生物分析师之间的吸光度（415 nm 和 5 小时孵育）的平均差异约为 0.20（ALS 组的 SE 0.052，N=20，SD 0.22）。 α=0,05 og beta=0,20 对应于幂 0,80，我们需要包括 21 个受试者。由于可能的辍学和技术上失败被认为是测试，研究人员选择在每组中包括 25 名受试者。 (36)

CT2：绘制补体系统的病例对照研究该病例对照研究中每组受试者的数量按 α=0,05 计算研究人员比较了 3 组的补体激活潜力，每组受试者数量相同。在健康受试者中，补体激活潜能为 100%，正常区域范围为 50-150%，低补体激活潜能（低于 50%）的发生率低于 10%。当功效 =0.80 时，计算出每组中需要包括 100 名受试者。因此，有可能发现与 2,3 的比值比相对应的组之间的统计学显着差异，这将对应于 20% 的 ALS 患者具有由增加的补体活性引起的低补体激活潜能。 (36)

CT3：随着时间的推移，ALS 患者的补体系统 - 队列研究这是一项假设生成研究。预计该队列中包括的 20 名 ALS 患者将是临床试验 2 的子集。将使用来自临床试验 2 的神经健康对照组作为基线时的对照组。

CT4：寻找 ALS 患者 NMJ 中的补体活性之前没有研究描述活人 NMJ 中的补体活性。因此，进行功率计算无关紧要。

数据处理 CT1：ALS 血浆中的溶血活性和补体系统比较 ALS 患者和对照组之间的溶血程度，使用 t 检验和单方差分析。为了计算截止值，研究人员使用接受者操作特征 (ROC) 曲线。

CT2：绘制补体系统的病例对照研究比较 ALS 患者和对照组之间的补体浓度和补体激活潜能，使用 t 检验和一种方差分析方法。为了计算 ALS 组与对照组相比低补体激活潜能的几率，研究人员使用逻辑回归。为了计算截止值，使用了接受者操作特征 (ROC) 曲线。

CT3：随着时间的推移，ALS 患者的补体系统 - 一项队列研究，如临床试验 2。此外，补体活性作为自 ALS 发作以来时间、性别、年龄、疾病亚型和疾病进展的函数的回归分析是实施。

CT4：在 ALS 患者的 NMJ 中寻找补体活性与 CT2 相同。定性描述补体沉积和肌肉病理的程度，并进行“正常”、“轻度”和“重度”变化的盲法评分。这将与 2 x K 表和非参数统计进行定量比较。

结果传播该项目的结果将发表在国际同行评议的期刊上。正面和负面的调查结果都将公布。

展望随着大型国家 ALS 研究生物库的建立，将有可能开展许多未来的研究项目。 ALS 的持续研究对于国内和国际的 ALS 患者来说至关重要，以便在未来找到针对这种侵袭性疾病的有效药物治疗的希望。

研究类型

观察性的

注册 (预期的)

375

联系人和位置

本节提供了进行研究的人员的详细联系信息，以及有关进行该研究的地点的信息。

学习联系方式

姓名：Anne-Lene Kjældgaard, MD
邮箱：akja004@regionh.dk

学习地点

丹麦
- - Aarhus、丹麦、8000
    - 招聘中
    - Dept. of Neurology Aarhus Hospital, Nørrebrogade
    - 接触：
      
      Anette Torvin Møller, MD, PhD
  - Brøndby、丹麦、2605
    - 完全的
    - Gildhøj Private Hospital
  - Copenhagen、丹麦、2600
    - 招聘中
    - Clinic of neuroanestesiology, Rigshospitalet Glostrup
    - 接触：
      
      Anne-Lene Kjældgaard, MD
  - Copenhagen NV、丹麦、2400
    - 招聘中
    - Dept. of Neurology, Bisbebjerg Hospital
    - 接触：
      
      Merete Karlsborg, MD
  - Copenhagen Ø、丹麦、2100
    - 尚未招聘
    - Clinic of Neurosurgery, Rigshospitalet
    - 接触：
      
      Marianne Juhler, dr.med, prof
  - Glostrup、丹麦、2600
    - 招聘中
    - The Dept. og Neurology, Rigshospitalet Glostrup
    - 接触：
      
      Elisabeth Elmo, MD
  - Odense C、丹麦、5000
    - 招聘中
    - Dept. of Neurology, Odense Hospital
    - 接触：
      
      Matthias Bode, MD
  - Roskilde、丹麦、4000
    - 招聘中
    - The dept. of Neurology, Roskilde Hospital
    - 接触：
      
      Helle Thagesen, MD

参与标准

研究人员寻找符合特定描述的人，称为资格标准。这些标准的一些例子是一个人的一般健康状况或先前的治疗。

资格标准

适合学习的年龄

18年及以上 (成人、OLDER_ADULT)

接受健康志愿者

是的

有资格学习的性别

全部

取样方法

非概率样本

研究人群

ALS 组：被诊断患有某种或疑似 ALS 的患者

神经对照组：

接受慢性头痛检查或转诊至医院进行腰椎灌注检查的患者。

神经健康对照组：

临床研究 1：来自 Rigshospitalet 的健康员工临床研究 2：计划在脊髓麻醉下进行骨科手术的神经健康患者。

描述

纳入标准：

对于 ALS 组：根据 El Escorial rev. 诊断为“某些 ALS”或“可能是 ALS”的诊断类别。诊断标准
对于神经科对照组：转诊至神经科进行急性或慢性头痛检查或转诊进行腰椎灌注试验。

排除标准：

对于所有组（临床研究 2-3）：进行腰椎穿刺的永久禁忌症
对于神经对照组：已知患有慢性炎症性疾病或自身免疫性疾病。
对于健康对照组（临床研究 1）：已知患有任何疾病
健康对照组（临床研究1）：每日服药
对于神经系统健康的对照组（临床研究 2）：已知患有神经系统疾病
对于神经健康对照组（临床研究 2）：已知患有慢性炎症性疾病或自身免疫性疾病。

学习计划

本节提供研究计划的详细信息，包括研究的设计方式和研究的衡量标准。

研究是如何设计的？

设计细节

团体/队列数

队列和干预

团体/队列
肌萎缩侧索硬化症患者诊断患有 ALS 的患者将被包括在该组中。血液和脊髓液样本将储存在生物库中，稍后进行分析。该组的一个子集（20 名 ALS 患者）将在疾病进展期间每 6 个月提供一次血液和脊髓液。 10 人的子集将捐献肌肉活检。
对照组与其他神经系统疾病患者因急性或慢性头痛症状转诊至医院的患者。
神经健康对照组在脊髓麻醉下进行骨科手术的患者。

研究衡量的是什么？

主要结果指标

结果测量	措施说明	大体时间
补体活动大体时间：0-10岁	ALS 患者的补体活性（通过溶血能力、补体激活潜能和特异性介质测量）并与 2 个对照组进行比较。	0-10岁

次要结果测量

结果测量	措施说明	大体时间
补体级联的子成分大体时间：0-10岁	如果发现补体活性增加，则测量补体级联的不同亚组分的量并与 2 个对照组进行比较。	0-10岁
补体系统失活大体时间：0-2岁	通过将孵育后的溶血程度与未被热灭活或添加抗补体的血浆的测试结果进行比较，分析热灭活或血浆中抗补体抑制补体系统的影响。	0-2岁
血液中存在的炎症蛋白的间接分析大体时间：0-10岁	与 2 个对照组相比，ALS 患者的 RNA 表达谱	0-10岁
血液中存在的细胞因子大体时间：0-10岁	在 ALS 患者中测量细胞因子，并与 2 个对照组进行比较。	0-10岁
急性相反应物大体时间：0-10岁	在 ALS 患者中测量急性期反应物，并与 2 个对照组进行比较。	0-10岁
ALS 患者神经肌肉接头的补体活性。 (临床试验4) 大体时间：0-3岁	补体沉积量以及神经肌肉接头中的补体活性在数量和质量上都有描述	0-3岁
ALS 肌肉纤维的定量和定性描述。大体时间：0-3岁	对肌肉纤维进行了定量和定性描述，并比较了历史上收集的健康肌肉纤维材料。	0-3岁
回归分析大体时间：0-10岁	将 ALS 患者的免疫反应分析为性别、年龄、疾病亚型、疾病阶段、疾病严重程度、疾病持续时间、目前吸烟、饮酒、目前使用药物（包括利鲁唑）的函数。回归分析将尽可能与 2 个对照组（性别、年龄、吸烟、饮酒、药物使用）进行比较。	0-10岁

合作者和调查者

在这里您可以找到参与这项研究的人员和组织。

赞助

Rigshospitalet, Denmark

合作者

Odense University Hospital

Zealand University Hospital

Aarhus University Hospital

Bispebjerg Hospital

调查人员

学习椅：Kirsten Møller, Prof., MD、Clinic of Neuroanestesiology, Rigshospitalet, Denmark
学习椅：Peter Garred, Prof., MD、Department of Clinical Immunology
学习椅：Stephen Wørlich Pedersen, dr.med、Dept. of Neurology, Rigshospitalet Glostrup
学习椅：Karsten Skovgaard Olsen, Dr.med.、Clinic of Neuroanaestesiology, Rigshospitalet Glostrup
学习椅：Anne Øberg Lauritsen, MD、Clinic of Neuroanaestesiology, Rigshospitalet Glostrup
学习椅：Eva Løbner Lund, MD, PhD、Dept. of Pathology, Rigshospitalet
首席研究员：Anne-Lene Kjældgaard, MD、Clinic of Neuroanaestesiology, Rigshospitalet Glostrup

出版物和有用的链接

负责输入研究信息的人员自愿提供这些出版物。这些可能与研究有关。

一般刊物

研究记录日期

这些日期跟踪向 ClinicalTrials.gov 提交研究记录和摘要结果的进度。研究记录和报告的结果由国家医学图书馆 (NLM) 审查，以确保它们在发布到公共网站之前符合特定的质量控制标准。

研究主要日期

学习开始

2016年6月1日

初级完成 (预期的)

2026年6月1日

研究完成 (预期的)

2026年6月1日

研究注册日期

首次提交

2016年6月28日

首先提交符合 QC 标准的

2016年8月11日

首次发布 (估计)

2016年8月16日

研究记录更新

最后更新发布 (实际的)

2017年10月6日

上次提交的符合 QC 标准的更新

2017年10月4日

最后验证

2017年10月1日