受种植体周围疾病影响的牙周牙齿和种植体周围的微生物群。

通过无菌纸尖收集，用于牙髓治疗，受牙周炎影响的牙体周围存在的沟液，以及在同一患者中，存在于种植体周围沟内的液体影响种植体周围炎。 如果更多的种植体被认为受到种植体周围炎的影响，参与者将选择最差的作为样本部位。 对于受牙周病影响的牙齿，将遵循相同的原则。 必须对样品进行细菌基因组荟萃分析，以精确鉴定细菌。 为了更好地比较菌群，即使是来自同一患者的健康牙齿也会被选为测试部位，并在其上采集牙龈沟液。

研究人员认为，对病原体种类的全面了解是制定正确治疗策略的起点。 但真正重要的是要牢记口腔微生物群落的个体特征。

一开始要注意的数据是：

牙周病的体征和症状，在 Armitage 1999 分类中有精确的框架，以及种植体周围疾病。 就种植体周围炎的研究定义而言，种植体的最小探诊深度为 4 mm，伴有探诊出血和/或化脓（BOP 和 Supp）和影像学骨丢失 (BL)。

按照第 8 届欧洲牙周病学共识会议第 4 工作组的定义顺序记录的 BL 证据：如果没有初步处方，BL > 2 mm 距预期骨水平； Rx 2-3 倍于测量记录的 SD（1-1.5 毫米），以防存在初步 rx。

1. 使用平行技术（CBCT 可选）进行检测诊断射线照相和预干预。
2. 术前、术中和术后照片（如果有）
3. 随访 6 个月/1 年（可选） 该研究提供了在招募进行微生物学调查的患者的牙周和种植体周围沟周围采集的 GCF。 样品的分析是“盲”进行的。 使用的探头是 UNC15，只有一名经过校准的临床医生执行探测。 病原微生物群将与同一患者健康牙齿周围采集的健康牙齿微生物群进行比较。

为了避免龈上菌斑污染样本，样本点的预处理将按如下方式进行：

- 采样前 2 天，患者接受专业清洁杯和刷子的唯一目的是消除龈下菌斑。 我们还将获得适当的口腔卫生指导，每天刷牙两次，并在需要时使用其他工具。

取样程序：收获物将通过无菌纸尖至尖头 30 的范围和 ISO 锥度 4% 进行。 采样技术将如图所示并标有字母 c（缝内深方法），直到感觉到最小阻力。 每个纸点将在原地停留 5 秒，然后将其存放在一个特殊的无菌容器中，冷藏并在 60 分钟内交付给将进行检查的研究所环境。 任何显示血液污染的收获物都将被排除在检查之外。

微生物协议

1. 样本采集和 DNA 分离 对于宏基因组分析，研究中包括的患者的纸条/纸点样本将在 4°C 的 PBS（磷酸盐缓冲盐水）中洗脱过夜。随后，样本将在 10,000 下离心4°C rpm 15 分钟。 去除纸尖后，上清液将用于使用 QIAamp DNA Mini 试剂盒提取 DNA。 使用 QUBIT Kit dsDNA HS ASSAY KIT (Life Technologies)，使用 Qubit® 2.0 荧光计（Thermo Fisher）对 DNA 进行定量。
2. 16S rRNA 分析——宏基因组学 宏基因组分析将在 MiSeq 平台 Illumina 上进行。 基因文库将通过 MiSeq v3 试剂盒进行测序。 16S rRNA 高变区将使用 5 ng/l 的 DNA 浓度和引物 V5-V7 进行扩增。

文库将通过磁珠（AgencourtAmpure XP，Beckman）纯化，文库片段的浓度和分布将在微量分析仪 2100（Agilent Technologies）中的 DNA Chip 1000 上进行评估。 序列（扩增子数据集）的分析和 OTU（OperationalTaxonomicUnits）的确定将通过 QIIME 管道使用 16S rRNA 基因数据库 Green genes 进行。

纳入标准：

• 在没有任何技术 GBR 的情况下使用至少一年的资产（因此在提取后也排除在研究之外）
• 进入 Works on native bone
• 填写一份病史表和一个专门用于该活动的牙周板，以及一张临床医生的卡片，该卡片基于 J ClinPeriodontol 2012 发表的工作； 39（增刊 12）：224-244
• 报告系统板的类型（可选手术技术）

排除标准：

• 患有禁忌植入植入物的亚内分泌系统疾病的患者
• 患者在过去三个月内，在手术后服用抗生素或接受任何治疗以解决急性事件。 同样可能有资格参加以后的研究。
• 怀孕或哺乳或接受激素治疗的妇女