Microbiota rond parodontale tanden en implantaten aangetast door peri-implantaire ziekte.

Geoogst via steriele papieren punten, voor endodontisch gebruik, de sulculaire vloeistof die aanwezig is rond een tandheelkundig element dat is aangetast door parodontitis, en, bij dezelfde patiënt, de vloeistof die aanwezig is in een peri-implantaire sulcus van een door een implantaat aangetaste peri-implantitis. Als wordt aangenomen dat meer implantaten zijn aangetast door perimplantitis, kiest de deelnemer de slechtste als monsterplaats. Hetzelfde principe zal worden gevolgd in het geval van de tand die is aangetast door parodontitis. De monsters moeten worden onderworpen aan bacteriële genomische meta-analyse voor de precieze identificatie van bacteriën. Voor een betere vergelijking van de flora zal zelfs een gezonde tand van dezelfde patiënt als testplaats worden gekozen en zal er een gingivale creviculaire vloeistof op worden geoogst.

De onderzoekers denken dat de perfecte kennis van de ziekteverwekkersoort het startpunt is van een correcte therapeutische strategie. Maar het is echt belangrijk om rekening te houden met de individuele kenmerken van orale microflora.

De gegevens die in het begin moeten worden genoteerd, zijn:

Tekenen en symptomen van parodontitis, met nauwkeurige framing binnen de Armitage 1999-classificatie, en peri-implantaire ziekte. Voor het doel van de onderzoeksdefinitie van perimplantitis gaat het om een ​​implantaat met een minimale sonderingsdiepte van 4 mm met bloeding bij sondering en/of ettering (BOP en Supp) en radiografisch botverlies (BL).

Bewijs van BL geregistreerd in volgorde van definitie van 8th European Consensus Conference of Parodontology Working group 4: BL > 2 mm van het verwachte botniveau als een voorlopige rx afwezig was; Rx 2-3 maal de SD van het meetrecord (1-1,5 mm) indien een voorlopige rx aanwezig was.

1. Detecties diagnostisch radiografisch en pre-interventie uitgevoerd met parallelle techniek (CBCT optioneel).
2. Foto's pre, intra en post op (indien aanwezig)
3. Follow-up tot 6 maanden / 1 jaar (optioneel) De studie biedt een GCF geoogst rond parodontale en peri-implantaire sulcus bij patiënten die zijn aangeworven voor microbiologisch onderzoek. De analyses van de monsters worden "blind" uitgevoerd. De gebruikte sonde is een UNC15 en slechts één gekalibreerde clinicus voert het sonderen uit. De pathogene microflora wordt vergeleken met een gezonde tandmicroflora geoogst rond een gezonde tand bij dezelfde patiënt.

Voorbehandeling van de monsterplaatsen om besmetting van de monsters door de supragingivale bacteriële plaque te voorkomen, gaat als volgt te werk:

- 2 dagen voor het afnemen ondergaat de patiënt professionele reinigingsbekers en -borstels met als enig doel subgingivale tandplak te verwijderen. ook krijgen we passende instructies voor mondhygiëne met twee keer per dag poetsen en gebruik van de andere instrumenten waar nodig.

Bemonsteringsprocedure: De geoogste zal worden uitgevoerd door middel van steriel papierpunt tot punt 30 en ISO-conus 4%. De bemonsteringstechniek is de techniek die wordt weergegeven in de afbeelding en is gemarkeerd met de letter c (intracreviculaire diepe methode) totdat de minimale weerstand wordt gevoeld. Elk papierpunt blijft 5 seconden op zijn plaats, daarna wordt het gemakkelijk opgeslagen in een speciale steriele container, gekoeld bewaard en binnen 60 minuten afgeleverd bij het Instituut dat het onderzoek zal uitvoeren. Elke oogst die bloedverontreiniging vertoont, wordt uitgesloten van het onderzoek.

Microbiologisch protocol

1. Monsterafname en DNA-isolatie Voor de metagenomische analyse worden monsters van paper strip/paper point van patiënten opgenomen in het onderzoek, een nacht geëlueerd in PBS (fosfaatgebufferde zoutoplossing) bij 4 °C. Vervolgens worden de monsters gecentrifugeerd bij 10.000 °C. rpm gedurende 15 min bij 4°C. Na verwijdering van de paperpoint wordt het supernatant gebruikt voor de extractie van DNA met behulp van de QIAamp DNA Mini-kit . Het DNA wordt gekwantificeerd met Qubit® 2.0 Fluorometer (Thermo Fisher) met behulp van QUBIT Kit dsDNA HS ASSAY KIT (Life Technologies).
2. Analyse van 16S rRNA - Metagenomics De metagenomics-analyses zullen worden uitgevoerd op het MiSeq-platform Illumina. De genbibliotheken zullen worden gesequenced via de MiSeq v3-reagenskits. De 16S rRNA hypervariabele regio's zullen worden geamplificeerd met behulp van een DNA-concentratie van 5 ng/l met de primers V5-V7.

De bibliotheken zullen worden gezuiverd door magnetische korrels (AgencourtAmpure XP, Beckman), en de concentratie en distributie van de fragmenten van de bibliotheken zal worden geëvalueerd op DNA Chip 1000 in de microanalyzer 2100 (Agilent Technologies). De analyse van de sequenties (amplicon-datasets) en de bepaling van OTU (OperationalTaxonomicUnits) zal worden uitgevoerd door de QIIME-pijplijn met behulp van de 16S rRNA-genendatabase Groene genen.

Inclusiecriteria:

• Activa in dienst voor ten minste één jaar zonder enige technische GBR (daarom uitgesloten van de studie ook na extractie)
• ingevoerde werken op inheems bot
• Vul een anamneseformulier in en een parodontaal bord gewijd aan het evenement, evenals een kaart voor de clinicus die voortbouwt op het werk gepubliceerd in J ClinPeriodontol 2012; 39 (suppletie 12): 224-244
• Rapportage in het type systeembord (optionele chirurgische techniek)

Uitsluitingscriteria:

• Patiënten met subintrante systemische aandoeningen die een contra-indicatie vormen voor het inbrengen van implantaten
• Patiënten die in de afgelopen drie maanden na een operatie antibiotica hebben gebruikt of een therapie hebben gevolgd om acute gebeurtenissen op te lossen. Hetzelfde kan in aanmerking komen voor de studie later.
• Vrouwen die zwanger zijn of borstvoeding geven of hormoontherapieën ondergaan