Microbiota alrededor de dientes periodontales e implantes afectados por enfermedad periimplantaria.

Cosechado a través de puntas de papel estériles, para uso endodóntico, el fluido sulcular presente alrededor de un elemento dental afectado por periodontitis, y, en el mismo paciente, el fluido presente dentro de un surco periimplantario de un implante afectado por periimplantitis. Si se consideran más implantes afectados por periimplantitis, el participante elegirá el peor como sitio de muestra. El mismo principio se seguirá en el caso del diente afectado por enfermedad periodontal. Las muestras deben someterse a metanálisis genómico bacteriano para la identificación precisa de bacterias. Para una mejor comparación de la flora, se elegirá como sitio de prueba incluso un diente sano del mismo paciente y se recolectará en él un fluido crevicular gingival.

Los investigadores piensan que el perfecto conocimiento de la especie patógena es el punto de partida de una correcta estrategia terapéutica. Pero es muy importante tener en cuenta las características individuales de la microflora bucal.

Los datos a tener en cuenta de entrada son:

Signos y síntomas de enfermedad periodontal, con un encuadre preciso dentro de la Clasificación de Armitage 1999, y enfermedad periimplantaria. Para el objetivo del estudio, la definición de periimplantitis se refiere a un implante con una profundidad de sondaje mínima de 4 mm con sangrado al sondaje o supuración (BOP y Supp) y pérdida ósea radiográfica (BL).

Evidencia de LB registrada en el orden de definición de la 8.ª Conferencia Europea de Consenso de Periodoncia Grupo de trabajo 4: BL > 2 mm del nivel óseo esperado si no hubo una prescripción preliminar; Rx 2-3 veces la SD del registro de medición (1-1,5 mm) en caso de haber una rx preliminar.

1. Detecciones diagnósticas radiográficas y preintervención realizadas con técnica paralela (CBCT opcional).
2. Fotografías pre, intra y post operatorias (si las hay)
3. Seguimiento de hasta 6 meses/1 año (opcional) El estudio proporciona un GCF recolectado alrededor del surco periodontal y periimplantario en pacientes reclutados para investigación microbiológica. Los análisis de las muestras se realizan "a ciegas". La sonda utilizada es una UNC15 y solo un médico calibrado realiza el sondeo. La microflora del patógeno se comparará con la microflora de un diente sano recolectada alrededor de un diente sano en el mismo paciente.

El pretratamiento de los sitios de muestra para evitar la contaminación de las muestras por la placa bacteriana supragingival procederá de la siguiente manera:

- 2 días antes de la toma de muestra, el paciente se somete a una limpieza profesional de copas y cepillos con el único fin de eliminar la placa subgingival. también se nos proporcionará una instrucción adecuada de higiene bucal con cepillado dos veces al día y el uso de los demás instrumentos cuando sea necesario.

Procedimiento de muestreo: La cosecha se realizará a través de papel estéril de punta a punta 30 y conicidad ISO 4%. La técnica de muestreo será la que se muestra en la figura y está marcada con la letra c (método profundo intracrucicular) hasta sentir la mínima resistencia. Cada punto de papel permanecerá en su lugar durante 5 segundos, luego se almacenará fácilmente en un recipiente estéril especial, se almacenará en un ambiente refrigerado y se entregará dentro de los 60 minutos del Instituto que llevará a cabo el examen. Cualquier cosecha que muestre contaminación con sangre será excluida del examen.

Protocolo microbiológico

1. Recogida de muestras y aislamiento de ADN Para el análisis metagenómico, las muestras de tira de papel/punta de papel de los pacientes incluidos en el estudio, se eluirán durante la noche en PBS (solución salina tamponada con fosfato) a 4 °C. Posteriormente, las muestras se centrifugarán a 10.000 rpm durante 15 min a 4 °C. Tras retirar la punta de papel, el sobrenadante se utilizará para la extracción de ADN mediante el kit QIAamp DNA Mini. El ADN se cuantificará con el fluorómetro Qubit® 2.0 (Thermo Fisher) utilizando el kit QUBIT dsDNA HS ASSAY KIT (Life Technologies).
2. Análisis de 16S rRNA - Metagenómica Los análisis metagenómicos se realizarán en la plataforma MiSeq Illumina. Las bibliotecas de genes se secuenciarán a través de los kits de reactivos MiSeq v3. Las regiones hipervariables del ARNr 16S se amplificarán utilizando una concentración de ADN de 5 ng/l con los cebadores V5-V7.

Las bibliotecas se purificarán mediante perlas magnéticas (AgencourtAmpure XP, Beckman), y se evaluará la concentración y distribución de los fragmentos de las bibliotecas en DNA Chip 1000 en el microanalizador 2100 (Agilent Technologies). El análisis de las secuencias (conjuntos de datos de amplicón) y la determinación de OTU (Unidades taxonómicas operativas) se realizarán mediante la tubería QIIME utilizando como base de datos de genes 16S rRNA Genes verdes.

Criterios de inclusión:

• Activos en servicio durante al menos un año sin GBR técnico (por lo tanto, excluidos del estudio también después de la extracción)
• ingresó Obras sobre hueso nativo
• Complete un formulario de historial médico y un tablero periodontal dedicado al evento, así como una tarjeta para el médico que se basa en el trabajo publicado en J ClinPeriodontol 2012; 39 (Suplemento 12): 224-244
• Informes en el tipo de placa del sistema (técnica quirúrgica opcional)

Criterio de exclusión:

• Pacientes en condiciones sistémicas subintrantes que contraindiquen la inserción de implantes
• Los pacientes en los últimos tres meses, después de la cirugía han tomado antibióticos o siguen alguna terapia para la resolución de eventos agudos. El mismo podrá calificar para el estudio posterior.
• Mujeres que están embarazadas o amamantando o que se someten a terapias hormonales