Mikrobiota kolem parodontálních zubů a implantátů postižených onemocněním periimplantátu.

Sbírá se prostřednictvím sterilních papírových hrotů pro endodontické použití sulkulární tekutina přítomná kolem zubního prvku postiženého parodontitidou a u stejného pacienta tekutina přítomná uvnitř periimplantátového sulku periimplantitidy postižené implantátem. Pokud se má za to, že perimplantitidou je postiženo více implantátů, vybere si účastník jako místo odběru to nejhorší. Stejný princip bude dodržován v případě zubu postiženého parodontózou. Vzorky musí být podrobeny bakteriální genomové metaanalýze pro přesnou identifikaci bakterií. Pro lepší srovnání flóry bude jako testovací místo vybrán i zdravý zub od stejného pacienta a bude na něm odebrána gingivální štěrbinová tekutina.

Vyšetřovatelé se domnívají, že dokonalá znalost druhu patogenu je výchozím bodem správné terapeutické strategie. Je ale opravdu důležité mít na paměti individuální vlastnosti ústní mikroflóry.

Údaje, které je třeba poznamenat na začátku, jsou:

Známky a příznaky onemocnění parodontu, s přesným rámcem v rámci klasifikace Armitage 1999, a onemocnění periimplantátu. Pro účely studie se definice perimplantitidy týká implantátu s minimální hloubkou sondy 4 mm s krvácením při sondování a/nebo hnisáním (BOP a Supp) a radiografickým úbytkem kostní hmoty (BL).

Důkazy o BL zaznamenané v pořadí podle definice 8. Evropské konsensuální konference parodontologie Pracovní skupina 4: BL > 2 mm od očekávané úrovně kosti, pokud chyběla předběžná rx; Rx 2-3 násobek SD záznamu měření (1-1,5 mm) v případě, že byl přítomen předběžný rx.

1. Diagnostické rentgenové detekce a předintervence prováděné paralelní technikou (volitelné CBCT).
2. Fotografie před, uvnitř a po operaci (pokud jsou k dispozici)
3. Sledování až 6 měsíců / 1 rok (volitelně) Studie poskytuje GCF odebraný kolem periodontálního a periimplantátového sulku u pacientů rekrutovaných pro mikrobiologické vyšetření. Rozbory vzorků se provádějí „naslepo“. Použitá sonda je UNC15 a sondování provádí pouze jeden kalibrovaný lékař. Patogenní mikroflóra bude porovnána se zdravou zubní mikroflórou získanou kolem zdravého zubu u stejného pacienta.

Předúprava míst odběru vzorků, aby se zabránilo kontaminaci vzorků supragingiválním bakteriálním plakem, bude probíhat následovně:

- 2 dny před odběrem absolvuje pacient profesionální čistící kalíšky a kartáčky s jediným cílem eliminovat subgingivální plak. také nám bude poskytnuta vhodná instruktáž o ústní hygieně s čištěním kartáčkem dvakrát denně a používáním dalších nástrojů tam, kde je to nutné.

Postup odběru vzorků: Odběr bude proveden přes sterilní papírový bod v rozsahu ke špičce 30 a zúžení ISO 4 %. Technika odběru vzorků bude ta, která je znázorněna na obrázku a označena písmenem c (intracrevicular deep method), dokud neucítíte minimální odpor. Každý papírový bod zůstane na svém místě po dobu 5 sekund, poté bude snadno uložen ve speciální sterilní nádobě, uložen v chladničce a do 60 minut doručen do prostředí ústavu, který provede vyšetření. Všechny odebrané vzorky, které vykazují kontaminaci krve, budou z vyšetření vyloučeny.

Mikrobiologický protokol

1. Odběr vzorků a izolace DNA Pro metagenomickou analýzu budou vzorky papírových proužků / papírových bodů pacienty zařazenými do studie eluovány přes noc v PBS (fyziologický roztok pufrovaný fosfátem) při 4 °C. Následně budou vzorky centrifugovány při 10 000 ot./min po dobu 15 minut při 4 °C. Po odstranění papírového hrotu bude supernatant použit pro extrakci DNA pomocí soupravy QIAamp DNA Mini kit. DNA bude kvantifikována pomocí Qubit® 2.0 Fluorometer (Thermo Fisher) za použití QUBIT Kit dsDNA HS ASSAY KIT (Life Technologies).
2. Analýza 16S rRNA - Metagenomika Metagenomické analýzy budou prováděny na platformě MiSeq Illumina. Genové knihovny budou sekvenovány pomocí reagenčních souprav MiSeq v3. Hypervariabilní oblasti 16S rRNA budou amplifikovány s použitím DNA koncentrace 5 ng/l s primery V5-V7.

Knihovny budou purifikovány magnetickými kuličkami (AgencourtAmpure XP, Beckman) a koncentrace a distribuce fragmentů knihoven bude vyhodnocena na DNA Chip 1000 v mikroanalyzátoru 2100 (Agilent Technologies). Analýza sekvencí (soubory amplikonových dat) a stanovení OTU (Operational TaxonomicUnits) bude provedeno pomocí QIIME pipeline s využitím 16S rRNA genové databáze Green genes .

Kritéria pro zařazení:

• Majetek v provozu po dobu alespoň jednoho roku bez jakýchkoli technických GBR (proto vyloučeno ze studie i po extrakci)
• vstoupil do Works on native bone
• Vyplňte formulář o anamnéze a periodontální tabuli věnovanou této události a také kartu pro lékaře, která staví na práci publikované v J ClinPeriodontol 2012; 39 (Suppl 12): 224-244
• Hlášení v typu systémové desky (volitelná chirurgická technika)

Kritéria vyloučení:

• Pacienti v subintrantních systémových stavech, které kontraindikují zavedení implantátů
• Pacienti v posledních třech měsících po operaci užívali antibiotika nebo dodržovali jakoukoli terapii k vyřešení akutních příhod. Stejný se může kvalifikovat ke studiu později.
• Ženy, které jsou těhotné nebo kojící nebo podstupují hormonální terapii