Microbiota ao redor de dentes e implantes periodontais afetados pela doença peri-implantar.

Colhido através de pontas de papel estéreis, para uso endodôntico, o fluido sulcular presente ao redor de um elemento dentário acometido por periodontite e, no mesmo paciente, o fluido presente no interior de um sulco peri-implantar de um implante acometido por peri-implantite. Se mais implantes forem considerados afetados pela perimplantite, o participante escolherá o pior como local de amostragem. O mesmo princípio será seguido no caso do dente afetado pela doença periodontal. As amostras devem ser submetidas à meta-análise genômica bacteriana para a identificação precisa da bactéria. Para uma melhor comparação da flora, até mesmo um dente saudável do mesmo paciente será escolhido como local de teste e um fluido crevicular gengival será colhido nele.

Os investigadores pensam que o perfeito conhecimento da espécie patogénica é o ponto de partida para uma correta estratégia terapêutica. Mas é muito importante ter em mente as características individuais da microflora oral.

Os dados a serem observados inicialmente são:

Sinais e sintomas de doença periodontal, com enquadramento preciso dentro da Classificação Armitage 1999, e doença peri-implantar. Para o objetivo do estudo, a definição de perimplantite refere-se a um implante com profundidade mínima de sondagem de 4 mm com sangramento à sondagem e/ou supuração (BOP e Supp) e perda óssea radiográfica (BL).

Evidência de BL registrada na ordem de definição do Grupo de Trabalho 4 da 8ª Conferência de Consenso Europeu de Periodontologia: BL > 2 mm do nível ósseo esperado se um rx preliminar estiver ausente; Rx 2-3 vezes o SD do registro de medição (1-1,5 mm) no caso de um rx preliminar estar presente.

1. Detecções radiográficas diagnósticas e pré-intervenção realizadas com técnica paralela (CBCT opcional).
2. Fotografias pré, intra e pós-operatório (se presente)
3. Acompanhamento até 6 meses / 1 ano (opcional) O estudo fornece um GCF coletado ao redor do sulco periodontal e peri-implantar em pacientes recrutados para investigação microbiológica. As análises das amostras são realizadas "cegas". A sonda utilizada é uma UNC15 e apenas um clínico calibrado realiza a sondagem. A microflora do patógeno será comparada com a microflora de um dente saudável coletada ao redor de um dente saudável no mesmo paciente.

O pré-tratamento dos locais de amostra para evitar a contaminação das amostras pela placa bacteriana supragengival procederá da seguinte forma:

- 2 dias antes da coleta, o paciente é submetido a copos e escovas de limpeza profissional com o único objetivo de eliminar a placa subgengival. também receberemos instruções adequadas de higiene oral com escovação duas vezes / dia e uso de outros instrumentos quando necessário.

Procedimento de amostragem: A colheita será realizada através de ponta de papel estéril na medida para ponta 30 e cone ISO 4%. A técnica de amostragem será a mostrada na figura e marcada com a letra c (método intracrevicular profundo) até sentir resistência mínima. Cada ponto de papel permanecerá no local por 5 segundos, então será prontamente armazenado em um recipiente estéril especial, armazenado em local refrigerado e entregue em até 60 minutos no ambiente do Instituto que realizará o exame. Qualquer coleta que apresente contaminação sanguínea será excluída do exame.

Protocolo Microbiológico

1. Coleta de amostra e isolamento de DNA Para a análise metagenômica, as amostras de tira de papel/ponta de papel dos pacientes incluídos no estudo, serão eluídas overnight em PBS (solução salina tamponada com fosfato) a 4°C. Posteriormente, as amostras serão centrifugadas a 10.000 rpm por 15 min a 4°C. Após a retirada da ponta de papel, o sobrenadante será utilizado para a extração do DNA utilizando o kit QIAamp DNA Mini. O DNA será quantificado com Fluorômetro Qubit® 2.0 (Thermo Fisher) utilizando QUBIT Kit dsDNA HS ASSAY KIT (Life Technologies).
2. Análise de 16S rRNA - Metagenômica As análises metagenômicas serão realizadas na plataforma MiSeq Illumina. As bibliotecas de genes serão sequenciadas através dos kits de reagentes MiSeq v3. As regiões hipervariáveis ​​do rRNA 16S serão amplificadas utilizando uma concentração de DNA de 5 ng/l com os primers V5-V7.

As bibliotecas serão purificadas por esferas magnéticas (AgencourtAmpure XP, Beckman), e a concentração e distribuição dos fragmentos das bibliotecas serão avaliadas em DNA Chip 1000 no microanalisador 2100 (Agilent Technologies). A análise das sequências (conjuntos de dados de amplicon) e a determinação de OTU (OperationalTaxonomicUnits) serão realizadas pelo pipeline QIIME usando como banco de dados de genes 16S rRNA os genes Green.

Critério de inclusão:

• Ativos em serviço por pelo menos um ano sem qualquer GBR técnico (portanto, excluídos do estudo também pós-extração)
• entrou Trabalhos em osso nativo
• Preencher um formulário de histórico médico e um conselho periodontal dedicado ao evento, bem como um cartão para o clínico que se baseia no trabalho publicado no J ClinPeriodontol 2012; 39 (Supl 12): 224-244
• Relatório no tipo de placa do sistema (técnica cirúrgica opcional)

Critério de exclusão:

• Pacientes em condições sistêmicas subintrantes que contraindicam a inserção de implantes
• Pacientes nos últimos três meses, após a cirurgia, tomaram antibióticos ou seguiram qualquer terapia para resolução de eventos agudos. O mesmo pode qualificar para o estudo mais tarde.
• Mulheres grávidas, amamentando ou fazendo terapia hormonal