Mikrobióta a periodontális fogak és az implantátumok körüli betegség által érintett implantátumok körül.

Steril papírhézagokon keresztül, endodontiai felhasználásra gyűjtötték be, a parodontitis által érintett fogászati ​​elem körül található fekélyfolyadék, és ugyanabban a páciensben az implantátum periimplantitisben lévő barázdájában lévő folyadék is érintett periimplantitist. Ha több implantátumot érint perimplantitis, a résztvevő a legrosszabb helyet választja mintavételi helynek. Ugyanezt az elvet követjük a fogágybetegségben érintett fog esetében is. A mintákat bakteriális genomikai metaanalízisnek kell alávetni a baktériumok pontos azonosítása érdekében. A flóra jobb összehasonlítása érdekében, még egy egészséges fogat is kiválasztunk vizsgálati helyszínnek, amelyen íny résfolyadékot gyűjtünk.

A kutatók szerint a kórokozó fajok tökéletes ismerete a kiindulópont a helyes terápiás stratégiához. De nagyon fontos figyelembe venni a száj mikroflórájának egyéni jellemzőit.

Az elején megjegyzendő adatok a következők:

A parodontális betegség jelei és tünetei, az Armitage 1999-es osztályozáson belüli pontos keretezéssel, valamint a implantátum körüli betegség. A vizsgálat céljaira a periimplantitis definíciója egy 4 mm-es minimális szondázási mélységű implantátumra vonatkozik, vérzéssel szondázáskor és/vagy gennyedéssel (BOP és Supp), valamint radiográfiai csontvesztéssel (BL).

A BL-re vonatkozó bizonyítékok a 8. Európai Konszenzus Parodontológiai Konferencia meghatározásának sorrendjében, 4. munkacsoport: BL > 2 mm-rel a várt csontszinttől, ha egy előzetes rx hiányzik; Rx a mérési rekord SD 2-3-szorosa (1-1,5 mm), ha előzetes rx volt jelen.

1. Párhuzamos technikával (CBCT opcionális) végzett diagnosztikai radiográfiai és pre-intervenciós kimutatások.
2. Fényképek a művelet előtt, intra és után (ha vannak)
3. Nyomon követés legfeljebb 6 hónapig / 1 évig (opcionális) A vizsgálat a periodontális és az implantátum körüli barázdák körül gyűjtött GCF-et biztosít a mikrobiológiai vizsgálatra toborzott betegeknél. A minták elemzése „vakon” történik. A használt szonda UNC15, és csak egy kalibrált klinikus végzi a szondázást. A kórokozó mikroflórát összehasonlítják egy egészséges fog mikroflórájával, amelyet ugyanazon páciens egészséges foga körül gyűjtenek.

A mintavételi helyek előkezelése a minták supragingivális bakteriális plakk általi szennyeződésének elkerülése érdekében a következőképpen történik:

- A mintavétel előtt 2 nappal a páciens professzionális tisztítópoharakon és keféken megy keresztül, melynek egyetlen célja a szubgingivális plakk eltávolítása. Megfelelő szájhigiénés oktatást is biztosítunk napi kétszeri fogmosással és szükség esetén a többi eszköz használatával.

Mintavételi eljárás: A betakarított anyagot steril papírheggyel végzik, 30-as csúcsig és 4%-os ISO-kúposodásig. A mintavételi technika az ábrán látható és c betűvel jelölt (intracrevicularis mély módszer) lesz, amíg minimális ellenállást nem érez. Minden papírpont 5 mp-ig a helyén marad, majd egy speciális steril edényben könnyen tárolható, hűtve tárolva és 60 percen belül leszállítva a vizsgálatot végző intézeti környezetbe. Minden olyan betakarítást, amelyen vérszennyezettség mutatkozik, kizárják a vizsgából.

Mikrobiológiai Protokoll

1. Mintavétel és DNS izolálás A metagenomikus elemzéshez a vizsgálatban részt vevő betegek papírcsíkjaiból/papírhegyeiből vett mintákat éjszakán át PBS-ben (foszfáttal pufferolt sóoldat) 4 °C-on eluálják. Ezt követően a mintákat 10 000-en centrifugálják. fordulatszámon 15 percig 4 °C-on. A papírcsúcs eltávolítása után a felülúszót a DNS extrakciójához használjuk fel a QIAamp DNA Mini kit segítségével. A DNS mennyiségi meghatározása Qubit® 2.0 Fluorometer (Thermo Fisher) segítségével történik, a QUBIT Kit dsDNA HS ASSAY KIT (Life Technologies) segítségével.
2. A 16S rRNS elemzése – Metagenomika A metagenomikai elemzéseket a MiSeq Illumina platformon végezzük. A génkönyvtárakat a MiSeq v3 reagenskészleteken keresztül szekvenálják. A 16S rRNS hipervariábilis régióit 5 ng/l DNS-koncentrációval amplifikáljuk a V5-V7 primerekkel.

A könyvtárakat mágneses gyöngyökkel (AgencourtAmpure XP, Beckman) tisztítjuk, és a könyvtárak fragmenseinek koncentrációját és eloszlását a 2100 mikroanalizátorban (Agilent Technologies) a DNA Chip 1000-en értékeljük. A szekvenciák (amplikon adatkészletek) elemzése és az OTU (OperationalTaxonomicUnits) meghatározása a QIIME pipeline segítségével történik, 16S rRNS génadatbázisként Green genes használatával.

Bevételi kritériumok:

• Legalább egy évig üzemben lévő eszközök műszaki GBR nélkül (tehát a kitermelést követően is kizárták a vizsgálatból)
• belépett Művek a natív csonton
• Töltse ki az eseménynek szentelt kórtörténeti űrlapot és parodontológiai táblát, valamint egy kártyát a klinikus számára, amely a J ClinPeriodontol 2012-ben megjelent munkára épít; 39 (12. melléklet): 224-244
• Jelentés az alaplap típusáról (opcionális sebészeti technika)

Kizárási kritériumok:

• Olyan betegek, akiknél olyan szubintáns szisztémás állapotok állnak fenn, amelyek ellenjavallják az implantátumok behelyezését
• A műtétet követő elmúlt három hónapban a betegek antibiotikumot szedtek, vagy bármilyen terápiát követtek az akut események rendezésére. Ugyanezek alkalmasak lehetnek a későbbi vizsgálatra.
• Terhes, szoptató vagy hormonterápiában részesülő nők