预测宫颈上皮内瘤变 2 级 (CIN2) 演变的生物标志物

引言 持续感染高危型人乳头瘤病毒 (hrHPV) 是宫颈癌的致病源 [1]。 宫颈上皮内瘤变CIN1（低度）、CIN2（中度）、CIN3（重度）定义了由鳞状上皮细胞系演变而来的宫颈癌前病变[3]。 与 CIN3 相比，CIN1 和 CIN2 病变的宫颈癌进展率较低 [4]。 由于 CIN1 样和 CIN3 样进化病变的异质性表达，CIN2 在临床上构成了重大挑战，目前的诊断工具无法对进展风险进行分层 [5]。 CIN2 的风险分层对于 CIN2 的临床管理和避免过度治疗或治疗不足的风险非常重要。 从历史上看，CIN2 一直是外科手术（锥形切除活检）的门槛。 然而，由于 CIN2 病变的消退率很高，并且锥形切除活检与早产等生殖危害有关，因此丹麦等许多国家在 CIN2 年轻女性的管理上采取了更保守的方法（即 主动监测：阴道镜检查，每 4-6 个月进行一次宫颈穿刺活检，最长两年随访，无需任何外科手术）[6,7]。 在丹麦中部地区，自 1995 年以来一直建议对年轻女性进行主动监测。

p16 蛋白作为抑制剂在细胞调节和分化中起着重要作用。 p16 是 hrHPV E6/E7 致癌活性和与癌症演变相关的细胞转化的常见替代标记。 p16 的上皮内表达水平与 CIN 病变的等级呈正相关，并且可以通过 p16INK4a 免疫组织化学生物标志物检测到 [7, 8]。 尽管 p16INK4a 生物标志物为宫颈癌前病变的诊断和分级增加了价值，但该生物标志物对于 CIN2 的风险分层并不稳健 [9]。

最近的研究表明，新型生物标志物 HPV E4 可能会区分 CIN1 样病变和 CIN3 样病变中的 CIN2。 这表明 HPV E4 可能是 CIN2 风险分层的潜在生物标志物 [10-12]。

然而，缺乏关于 HPV E4 作为 CIN2 演变预测因子的知识。

目的 探讨 HPV E4 生物标志物是否可以预测 CIN2 演变的风险。

材料和方法 研究设计：历史队列研究。 研究人群：N=500 名 23-40 岁的女性，在丹麦病理数据库 [2000-2010] 中有 CIN2 记录，在奥胡斯大学医院病理学系。 所有女性都被定义为接受主动监测（即 每 4-6 个月进行一次阴道镜检查和宫颈穿孔活检，最多两年的随访）。

选择：在丹麦病理学数据库中，将在 2000-2010 年期间在所有具有 CIN2 诊断记录的女性中确定具有偶然 CIN2 诊断记录的合格女性。

实验室分析：福尔马林固定石蜡包埋 (FFPE) 组织样本将从奥尔胡斯大学医院病理科的档案中收集。

FFPE 块将被切片用于形态学分析（苏木精和伊红 (H&E) 和免疫组织化学分析 (IHC)）。 我们将使用 CINtec® Histology Kit (Roche) 和 SILgrade E4 检测 (LBP) 将夹心技术应用于 p16INK4a 和 HPV E4 IHC 分析。 随后，染色的载玻片将由妇科病理学专家小组（分别来自丹麦 2 人、英国 1 人和美国 1 人）进行评估。

暴露将被定义为表达 HPV E4 阳性（CIN1 样）与 HPV E4 阴性（CIN3 样）上皮内反应。

统计分析：线性回归模型、效应量度；相对风险 (RR)（95% CI）。

功效计算：在 N=500 名女性的样本量下，预计统计功效为 89%，显着性水平为 0.05 (alpha)。 在监测期间进展或持续存在的女性中，预计 50% CIN2 HPV E4 阳性病变和 70% p16INK4a 阳性 CIN2 病变的患病率。

设置和合作者 该项目将在 Gødstrup 医院妇产科与奥胡斯大学医院病理科密切合作进行，包括 DDL 诊断实验室；弗吉尼亚大学；剑桥大学和马里兰大学医学院。

丹麦主要研究组

1. 副教授，医学博士，Anne Hammer Lauridsen，丹麦中部地区 Gødstrup 医院妇产科和奥胡斯大学临床医学系
2. 教授，医学博士，Lone Kjeld Pedersen，欧登塞大学医院和南丹麦大学 OPEN 妇产科。
3. Professor, MD, Torben Steiniche，奥胡斯大学医院病理学系和奥胡斯大学临床医学系教授。
4. 博士生，Msch 健康科学，Rikke Damgaard，丹麦中部地区 Gødstrup 医院妇产科和奥胡斯大学临床医学系。

伦理声明 该研究得到丹麦中部地区卫生研究伦理区域委员会的批准，并根据丹麦法律的要求在奥胡斯大学卫生学院法律部注册。

观点 可靠的 CIN2 病变风险分层生物标志物对于女性的临床咨询很重要，这将使更具体和个性化的随访策略能够避免过度治疗或治疗不足的风险。 由于其他国家在管理患有 CIN2 的年轻女性方面正在转向更保守的方法（主动监测），我们的结果在国际视野中也可能是有价值的。