Biomarkers voorspellend voor ontwikkeling van cervicale intra-epitheliale neoplasie graad 2 (CIN2)

Inleiding Aanhoudende infectie met hoog-risico humaan papillomavirus (hrHPV) is een oorzakelijke bron van baarmoederhalskanker [1]. Cervicale intra-epitheliale neoplasie CIN1 (laag), CIN2 (matig), CIN3 (ernstig) definieert cervicale precancer-laesies die zijn ontstaan ​​uit de plaveiselepitheelcellijn [3]. CIN1- en CIN2-laesies zijn geassocieerd met lagere progressiepercentages voor baarmoederhalskanker dan CIN3 [4]. CIN2 vormt een grote klinische uitdaging vanwege de heterogene expressie van zowel CIN1-achtige als CIN3-achtige zich ontwikkelende laesies, die met de huidige diagnostische hulpmiddelen niet in staat zijn om het risico op progressie te stratificeren [5]. Risicostratificatie van CIN2 is van groot belang voor de klinische behandeling van CIN2 en om het risico van over- of onderbehandeling te voorkomen. Historisch gezien was CIN2 de drempel voor chirurgisch beheer (kegel-excisiebiopsie). Aangezien regressiepercentages van CIN2-laesies echter hoog zijn en conus-excisiebiopsie geassocieerd is met reproductieve schade, zoals vroeggeboorte, hebben veel landen, zoals Denemarken, een meer conservatieve benadering aangenomen bij de behandeling van jonge vrouwen met CIN2 (d.w.z. actieve bewaking: colposcopie, cervicale ponsbiopten om de 4-6 maanden tot twee jaar follow-up zonder enige chirurgische ingreep) [6,7]. In de centrale regio van Denemarken wordt sinds 1995 actief toezicht aanbevolen voor jonge vrouwen.

Het p16-eiwit speelt een belangrijke rol als remmer in cellulaire regulatie en differentiatie. p16 is een gebruikelijke surrogaatmarker voor hrHPV E6/E7 oncogene activiteit en cellulaire transformatie geassocieerd met de ontwikkeling van kanker. Het intrapetheliale expressieniveau van p16 is positief geassocieerd met de graad van CIN-laesie en kan worden gedetecteerd door de p16INK4a immunohistochemische biomarker [7, 8]. Hoewel de p16INK4a-biomarker toegevoegde waarde heeft voor de diagnostiek en beoordeling van cervicale prekankerlaesies, is de biomarker niet robuust voor risicostratificatie van CIN2 [9].

Recente studies tonen aan dat de nieuwe biomarker HPV E4 mogelijk CIN2 kan onderscheiden in CIN1-achtige versus CIN3-achtige gelijkende laesies. Dit suggereert dat HPV E4 een potentiële biomarker zou kunnen zijn voor risicostratificatie van CIN2 [10-12].

Er ontbreekt echter kennis over HPV E4 als voorspeller voor de ontwikkeling van CIN2.

Doel Onderzoeken of de HPV E4-biomarker het risico op CIN2-ontwikkeling kan voorspellen.

Materialen en methoden Onderzoeksopzet: Historisch cohortonderzoek. Studiepopulatie: N=500 vrouwen van 23-40 jaar oud, met een record van CIN2 in de Deense Patologische Databank [2000-2010], bij de afdeling Pathologie, Aarhus Universitair Ziekenhuis. Alle vrouwen worden gedefinieerd als beheerd door actief toezicht (d.w.z. colposcopie en cervicale ponsbiopten voor elke 4-6 maanden tot twee jaar follow-up).

Selectie: Geschikte vrouwen met een record van incidentele CIN2-diagnose zullen worden geïdentificeerd in de Deense Pathologiedatabank onder alle vrouwen met een record van CIN2-diagnose in de periode 2000-2010.

Laboratoriumanalyse: Formaline-gefixeerde paraffine-ingebedde (FFPE) weefselmonsters zullen worden samengesteld uit de archieven, op de afdeling Pathologie, Aarhus University Hospital.

FFPE-blokken zullen worden doorgesneden voor morfologieanalyse (hematoxyline & eosine (H&E) en voor immunohistochemie-analyse (IHC). We zullen de sandwichtechniek toepassen voor de p16INK4a- en HPV E4 IHC-analyse, met behulp van de CINtec® Histology Kit (Roche) en de SILgrade E4-assay (LBP). Vervolgens worden de gekleurde objectglaasjes beoordeeld door een expertpanel binnen de gynaecologische pathologie (respectievelijk 2 uit Denemarken, 1 uit het VK en 1 uit de VS).

Blootstelling wordt gedefinieerd als het uiten van een HPV E4-positieve (CIN1-achtige) versus HPV E4-negatieve (CIN3-achtige) intra-epitheliale reactie.

Statistische analyse: Lineair regressiemodel, effectmeting; relatief risico (RR) (95% BI).

Powerberekeningen: Bij een steekproefomvang van N=500 vrouwen wordt een statistische power van 89% verwacht, bij significantieniveau 0,05 (alfa). Bij vrouwen die progressie vertonen of aanhouden tijdens de surveillance, wordt een prevalentie van 50% CIN2 HPV E4-positieve laesies en 70% p16INK4a-positieve CIN2-laesies verwacht.

Instellingen en medewerkers Het project zal worden uitgevoerd op de afdeling Gynaecologie en Verloskunde van het Gødstrup-ziekenhuis in nauwe samenwerking met de afdeling Pathologie van het Universitair Ziekenhuis van Aarhus, inclusief het DDL-diagnostisch laboratorium; Universiteit van Virginia; Universiteit van Cambridge en Universiteit van Maryland School of Medicine.

Hoofdonderzoeksgroep in Denemarken

1. Universitair hoofddocent, MD, Anne Hammer Lauridsen, Afdeling Gynaecologie en Verloskunde, Gødstrup Ziekenhuis, Centrale regio van Denemarken & Afdeling Klinische geneeskunde, Universiteit van Aarhus
2. Professor, MD, Lone Kjeld Pedersen, Afdeling Gynaecologie en Verloskunde, Odense Universitair Ziekenhuis & OPEN, Universiteit van Zuid-Denemarken.
3. Professor, MD, Torben Steiniche, Professor, Afdeling Pathologie, Universitair Ziekenhuis van Aarhus & Afdeling Klinische geneeskunde, Universiteit van Aarhus.
4. Ph.d-student, Msch Gezondheidswetenschappen, Rikke Damgaard, Afdeling Gynaecologie en Verloskunde, Gødstrup Ziekenhuis, Centrale regio van Denemarken & Afdeling Klinische geneeskunde, Universiteit van Aarhus.

Ethische verklaring De studie is goedgekeurd door de Regionale Commissie voor Gezondheidsonderzoeksethiek, Centrale Regio van Denemarken en geregistreerd bij de Juridische Afdeling, Faculteit der Gezondheid, Universiteit van Aarhus, zoals vereist door de Deense wet.

Perspectieven Biomarkers die betrouwbaar zijn voor risicostratificatie van CIN2-laesies zijn belangrijk voor de klinische begeleiding van vrouwen, dit zal een meer specifieke en gepersonaliseerde follow-upstrategie mogelijk maken om het risico van over- of onderbehandeling te voorkomen. Terwijl andere landen evolueren naar een meer conservatieve benadering (actieve surveillance) met betrekking tot de behandeling van jonge vrouwen met CIN2, kunnen onze resultaten ook waardevol zijn in een internationaal perspectief.