Biomarqueurs prédictifs de l'évolution de la néoplasie cervicale intraépithéliale de grade 2 (CIN2)

Introduction L'infection persistante par le virus du papillome humain à haut risque (hrHPV) est une source causale du cancer du col de l'utérus [1]. La néoplasie cervicale intraépithéliale CIN1 (faible), CIN2 (modérée), CIN3 (sévère) définit les lésions précancéreuses du col de l'utérus évoluées à partir de la lignée cellulaire de l'épithélium squameux [3]. Les lésions CIN1 et CIN2 sont associées à des taux de progression du cancer du col de l'utérus inférieurs à ceux de CIN3 [4]. CIN2 pose un défi majeur sur le plan clinique, du fait de l'expression hétérogène de lésions évolutives à la fois CIN1-like et CIN3-like, que les outils diagnostiques actuels ne permettent pas de stratifier en risque de progression [5]. La stratification du risque de CIN2 est très importante pour la gestion clinique de CIN2 et pour éviter le risque de sur- ou de sous-traitement. Historiquement, CIN2 a été le seuil de prise en charge chirurgicale (biopsie excisionnelle au cône). Cependant, étant donné que les taux de régression des lésions CIN2 sont élevés et que la biopie par excision du cône est associée à des troubles de la reproduction, tels que l'accouchement prématuré, de nombreux pays comme le Danemark ont ​​adopté une approche plus conservatrice dans la prise en charge des jeunes femmes atteintes de CIN2 (c. surveillance active : colposcopie, biopsies cervicales à l'emporte-pièce tous les 4 à 6 mois jusqu'à un suivi de deux ans sans intervention chirurgicale) [6,7]. Dans la région centrale du Danemark, la surveillance active est recommandée pour les jeunes femmes depuis 1995.

La protéine p16 joue un rôle important en tant qu'inhibiteur de la régulation et de la différenciation cellulaire. p16 est un marqueur de substitution commun pour l'activité oncogène hrHPV E6/E7 et la transformation cellulaire associée à l'évolution du cancer. Le niveau d'expression intra-épithéliale de p16 est positivement associé au grade de la lésion CIN et peut être détecté par le biomarqueur immuno-histochimique p16INK4a [7, 8]. Bien que le biomarqueur p16INK4a ait ajouté de la valeur au diagnostic et au classement des lésions précancéreuses du col de l'utérus, le biomarqueur n'est pas robuste pour la stratification du risque de CIN2 [9].

Des études récentes montrent que le nouveau biomarqueur HPV E4 peut potentiellement distinguer CIN2 dans les lésions ressemblant à CIN1 vs CIN3. Suggérant que le VPH E4 pourrait être un biomarqueur potentiel pour la stratification du risque de CIN2 [10-12].

Cependant, les connaissances manquent sur le HPV E4 en tant que facteur prédictif de l'évolution des CIN2.

Objectif Explorer si le biomarqueur HPV E4 peut prédire le risque d'évolution de CIN2.

Matériels et méthodes Conception de l'étude : étude de cohorte historique. Population étudiée : N = 500 femmes âgées de 23 à 40 ans, avec un enregistrement de CIN2 dans la banque de données patologiques danoise [2000-2010], au département de pathologie de l'hôpital universitaire d'Aarhus. Toutes les femmes sont définies comme prises en charge par une surveillance active (c.-à-d. colposcopie et biopsies cervicales à l'emporte-pièce tous les 4 à 6 mois jusqu'à un suivi de deux ans).

Sélection : les femmes éligibles ayant un dossier de diagnostic accidentel de CIN2 seront identifiées dans la banque de données danoise sur les pathologies parmi toutes les femmes ayant un dossier de diagnostic de CIN2 au cours de la période 2000-2010.

Analyse en laboratoire : des échantillons de tissus fixés au formol et inclus en paraffine (FFPE) seront compilés à partir des archives du département de pathologie de l'hôpital universitaire d'Aarhus.

Les blocs FFPE seront sectionnés pour l'analyse morphologique (hématoxyline et éosine (H&E) et pour l'analyse immuno-histochimique (IHC). Nous appliquerons la technique sandwich pour l'analyse IHC p16INK4a et HPV E4, en utilisant le kit d'histologie CINtec® (Roche) et le test SILgrade E4 (LBP). Par la suite, les lames colorées seront évaluées par un panel d'experts en pathologie gynécologique (respectivement 2 du Danemark, 1 du Royaume-Uni et 1 des États-Unis).

L'exposition sera définie comme l'expression d'une réaction intraépithéliale HPV E4 positive (CIN1-like) vs HPV E4 négative (CIN3-like).

Analyse statistique : modèle de régression linéaire, mesure de l'effet ; risque relatif (RR) (IC à 95 %).

Calculs de puissance : Pour une taille d'échantillon de N=500 femmes, une puissance statistique de 89 % est attendue, au niveau de signification 0,05 (alpha). Parmi les femmes qui progressent ou persistent pendant la surveillance, une prévalence de 50 % de lésions CIN2 HPV E4 positives et de 70 % de lésions CIN2 positives p16INK4a est attendue.

Cadres et collaborateurs Le projet sera réalisé au département de gynécologie et d'obstétrique de l'hôpital Gødstrup en étroite collaboration avec le département de pathologie de l'hôpital universitaire d'Aarhus, y compris le laboratoire de diagnostic DDL ; Université de Virginie; Université de Cambridge et École de médecine de l'Université du Maryland.

Groupe de recherche principal au Danemark

1. Professeur agrégé, MD, Anne Hammer Lauridsen, Département de gynécologie et d'obstétrique, Hôpital Gødstrup, Région centrale du Danemark et Département de médecine clinique, Université d'Aarhus
2. Professeur, MD, Lone Kjeld Pedersen, Département de gynécologie et d'obstétrique, Hôpital universitaire d'Odense et OPEN, Université du Danemark du Sud.
3. Professeur, MD, Torben Steiniche, Professeur, Département de pathologie, Hôpital universitaire d'Aarhus et Département de médecine clinique, Université d'Aarhus.
4. Étudiante au doctorat, Msch Health Science, Rikke Damgaard, Département de gynécologie et d'obstétrique, Hôpital Gødstrup, Région centrale du Danemark et Département de médecine clinique, Université d'Aarhus.

Déclaration éthique L'étude est approuvée par le Comité régional d'éthique de la recherche en santé, Région centrale du Danemark et enregistrée au Département juridique, Faculté de santé, Université d'Aarhus, comme l'exige la loi danoise.

Perspectives Des biomarqueurs fiables pour la stratification du risque des lésions CIN2 sont importants pour le conseil clinique des femmes, cela permettra une stratégie de suivi plus spécifique et personnalisée pour éviter le risque de sur ou de sous-traitement. Alors que d'autres pays évoluent vers une approche plus conservatrice (surveillance active) en ce qui concerne la prise en charge des jeunes femmes atteintes de CIN2, nos résultats peuvent également être utiles dans une perspective internationale.