Biomarkkerit ennustavat kohdunkaulan intraepiteliaalisen neoplasian 2. asteen (CIN2) kehitystä

Johdanto Korkean riskin ihmisen papilloomaviruksen (hrHPV) jatkuva infektio on kohdunkaulan syövän aiheuttaja [1]. Kohdunkaulan intraepiteeliaalinen neoplasia CIN1 (matala), CIN2 (kohtalainen), CIN3 (vakava) määrittelee kohdunkaulan syövän esivauriot, jotka ovat kehittyneet levyepiteelisolulinjasta [3]. CIN1- ja CIN2-leesiot liittyvät kohdunkaulansyövän alhaisempaan etenemisasteeseen kuin CIN3 [4]. CIN2 on kliinisesti suuri haaste johtuen sekä CIN1:n kaltaisten että CIN3:n kaltaisten kehittyvien leesioiden heterogeenisestä ilmentymisestä, joita nykyiset diagnostiset työkalut eivät mahdollista etenemisriskin kerrostamista [5]. CIN2:n riskien jakaminen on erittäin tärkeää CIN2:n kliinisen hoidon kannalta ja yli- tai alihoidon riskin välttämiseksi. Historiallisesti CIN2 on ollut kynnys kirurgiselle hoidolle (kartioleikkausbiopsia). Koska CIN2-vaurioiden regressioaste on kuitenkin korkea ja kartioleikkausbioopia liittyy lisääntymisvaurioihin, kuten ennenaikaiseen synnytykseen, monet maat, kuten Tanska, ovat omaksuneet konservatiivisemman lähestymistavan CIN2-potilaiden nuorten naisten hoidossa (ts. aktiivinen seuranta: kolposkopia, kohdunkaulan biopsiat 4-6 kuukauden välein aina kahden vuoden seurantaan asti ilman leikkausta) [6,7]. Tanskan keskialueella aktiivista seurantaa on suositeltu nuorille naisille vuodesta 1995 lähtien.

p16-proteiinilla on tärkeä rooli solun säätelyn ja erilaistumisen estäjänä. p16 on yleinen korvikemarkkeri hrHPV E6/E7:n onkogeeniselle aktiivisuudelle ja syövän kehittymiseen liittyvälle solutransformaatiolle. P16:n intrapeiteliaalinen ilmentymistaso liittyy positiivisesti CIN-leesion asteeseen, ja se voidaan havaita p16INK4a-immunohistokemiallisella biomarkkerilla [7, 8]. Vaikka p16INK4a-biomarkkerilla on lisäarvoa kohdunkaulan esisyövän leesioiden diagnostiikassa ja luokittelussa, biomarkkeri ei ole luotettava CIN2:n riskin jakamiseen [9].

Viimeaikaiset tutkimukset osoittavat, että uusi biomarkkeri HPV E4 voi mahdollisesti erottaa CIN2:n CIN1:n kaltaisissa ja CIN3:n kaltaisissa leesioissa. Ehdotetaan, että HPV E4 voisi olla potentiaalinen biomarkkeri CIN2:n riskin jakautumisessa [10-12].

HPV E4:stä CIN2:n kehityksen ennustajana ei kuitenkaan ole tietoa.

Tavoite Tutkia voiko HPV E4 -biomarkkeri ennustaa CIN2:n kehittymisriskiä.

Materiaalit ja menetelmät Opintosuunnitelma: Historiallinen kohorttitutkimus. Tutkimuspopulaatio: N = 500 naista 23-40-vuotiaita, CIN2-tietue Tanskan Patologisessa tietopankissa [2000-2010], Århusin yliopistollisen sairaalan patologian osastolla. Kaikki naiset määritellään aktiivisen seurannan johtamiksi (esim. kolposkopia ja kohdunkaulan biopsiat 4-6 kuukauden välein aina kahden vuoden seurantaan asti).

Valinta: Tukikelpoiset naiset, joilla on satunnainen CIN2-diagnoosi, tunnistetaan Tanskan patologiatietopankissa kaikista naisista, joilla on CIN2-diagnoosi vuosina 2000–2010.

Laboratorioanalyysi: Formaliinikiinnitetyt parafiiniin upotetut (FFPE) kudosnäytteet kootaan Århusin yliopistollisen sairaalan patologian laitoksen arkistosta.

FFPE-lohkot leikataan morfologiaa (hematoksyliini & eosiini (H&E) ja immunohistokemiallinen analyysi (IHC) varten. Käytämme sandwich-tekniikkaa p16INK4a- ja HPV E4 IHC -analyysissä käyttämällä CINtec® Histology Kit -sarjaa (Roche) ja SILgrade E4 -määritystä (LBP). Tämän jälkeen gynekologisen patologian asiantuntijapaneeli arvioi värjätyt objektilasit (2 Tanskasta, 1 Yhdistyneestä kuningaskunnasta ja 1 Yhdysvalloista).

Altistuminen määritellään ilmaisemaan HPV E4 -positiivinen (CIN1:n kaltainen) vs. HPV E4 -negatiivinen (CIN3:n kaltainen) intraepiteliaalinen reaktio.

Tilastollinen analyysi: Lineaarinen regressiomalli, vaikutusmitta; suhteellinen riski (RR) (95 % CI).

Teholaskelmat: Otoskoolla N = 500 naista, tilastollisen tehon odotetaan olevan 89 %, merkitsevyystasolla 0,05 (alfa). Naisilla, jotka etenevät tai jatkuvat seurannan aikana, odotetaan olevan 50 % CIN2 HPV E4 -positiivisia ja 70 % p16INK4a-positiivisia CIN2-vaurioita.

Asetukset ja yhteistyökumppanit Projekti toteutetaan Gødstrupin sairaalan gynekologian ja synnytystautien osastolla tiiviissä yhteistyössä Aarhusin yliopistollisen sairaalan patologian osaston kanssa, mukaan lukien DDL-diagnostiikkalaboratorio; Virginian yliopisto; Cambridgen yliopisto ja Marylandin yliopiston lääketieteellinen tiedekunta.

Päätutkimusryhmä Tanskassa

1. Apulaisprofessori, MD, Anne Hammer Lauridsen, gynekologian ja synnytystautien osasto, Gødstrupin sairaala, Keski-Tanska & Kliinisen lääketieteen laitos, Århusin yliopisto
2. Professori, MD, Lone Kjeld Pedersen, gynekologian ja synnytystautien osasto, Odensen yliopistollinen sairaala & OPEN, Etelä-Tanskan yliopisto.
3. Professori, MD, Torben Steiniche, professori, patologian laitos, Århusin yliopistollinen sairaala ja kliinisen lääketieteen laitos, Århusin yliopisto.
4. Ph.d-opiskelija, Msch Health Science, Rikke Damgaard, Gynekologian ja synnytystautien osasto, Gødstrupin sairaala, Keski-Tanska & Kliinisen lääketieteen laitos, Århusin yliopisto.

Eettinen lausunto Tutkimuksen on hyväksynyt Tanskan Keski-alueen terveystutkimuksen etiikan aluekomitea ja se on rekisteröity Århusin yliopiston terveystieteellisen tiedekunnan lakiosastolle Tanskan lain edellyttämällä tavalla.

Perspektiivit CIN2-leesioiden riskien jakamiseen luotettavat biomarkkerit ovat tärkeitä naisten kliinisessä neuvonnassa, mikä mahdollistaa tarkemman ja yksilöllisemmän seurantastrategian yli- tai alihoidon riskin välttämiseksi. Kun muut maat ovat siirtymässä kohti konservatiivisempaa lähestymistapaa (aktiivinen valvonta) nuorten naisten, joilla on CIN2, hallinta, tulokset voivat olla arvokkaita myös kansainvälisesti.