Biomarkører prediktive for cervical intraepitelial neoplasi grad 2 (CIN2) utvikling

Introduksjon Vedvarende infeksjon med høyrisiko humant papillomavirus (hrHPV) er en forårsakende kilde til livmorhalskreft [1]. Cervikal intraepithelial neoplasi CIN1 (lav), CIN2 (moderat), CIN3 (alvorlig) definerer cervical precancer lesjoner utviklet fra plateepitelcellelinjen [3]. CIN1 og CIN2 lesjoner er assosiert med lavere progresjonsrater for livmorhalskreft enn CIN3 [4]. CIN2 utgjør en stor utfordring klinisk, på grunn av det heterogene uttrykket av både CIN1-lignende og CIN3-lignende utviklende lesjoner, som dagens diagnostiske verktøy ikke gjør det mulig å stratifisere i risiko for progresjon [5]. Risiko-stratifisering av CIN2 er svært viktig for klinisk behandling av CIN2 og for å unngå risiko for over- eller underbehandling. Historisk sett har CIN2 vært terskelen for kirurgisk behandling (kjegleeksisjonsbiopsi). Men siden regresjonsraten for CIN2-lesjoner er høy, og kjegleeksisjonsbiopi er assosiert med reproduksjonsskader, som for tidlig fødsel, har mange land som Danmark tatt i bruk en mer konservativ tilnærming i behandlingen av unge kvinner med CIN2 (dvs. aktiv overvåking: kolposkopi, cervical punch biopsier for hver 4-6 måned opp til to års oppfølging uten noen kirurgisk prosedyre) [6,7]. I Midt-Danmark har aktiv overvåking blitt anbefalt for unge kvinner siden 1995.

p16-proteinet spiller en viktig rolle som hemmer i cellulær regulering og differensiering. p16 er en vanlig surrogatmarkør for hrHPV E6/E7 onkogen aktivitet og cellulær transformasjon assosiert med kreftutvikling. Det intrapeitheliale ekspresjonsnivået til p16 er positivt assosiert med grad av CIN-lesjon, og kan påvises av p16INK4a immuno-histo-kjemisk biomarkør [7, 8]. Selv om p16INK4a-biomarkøren har en merverdi til diagnostikk og gradering av cervical precancer lesjoner, er biomarkøren ikke robust for risiko-stratifisering av CIN2 [9].

Nyere studier viser at den nye biomarkøren HPV E4 potensielt kan skille CIN2 i CIN1-lignende vs CIN3-lignende lesjoner. Antyder at HPV E4 kan være en potensiell biomarkør for risikostratifisering av CIN2 [10-12].

Imidlertid mangler kunnskap om HPV E4 som prediktor for CIN2-utvikling.

Mål Å undersøke om HPV E4-biomarkøren kan forutsi risiko for CIN2-utvikling.

Materialer og metoder Studiedesign: Historisk kohortstudie. Studiepopulasjon: N=500 kvinner i alderen 23-40 år, med registrering av CIN2 i den danske patologiske databanken [2000-2010], ved patologisk avdeling, Aarhus Universitetssykehus. Alle kvinner er definert som administrert av aktiv overvåking (dvs. kolposkopi og cervical punch biopsier for hver 4-6 måneder opptil to års oppfølging).

Utvalg: Kvalifiserte kvinner med en registrering av tilfeldig CIN2-diagnose vil bli identifisert i den danske patologidatabanken blant alle kvinner med en registrering av CIN2-diagnose i løpet av 2000-2010.

Laboratorieanalyse: Formalinfikserte parafininnstøpte (FFPE) vevsprøver vil bli samlet fra arkivene, ved Patologisk avdeling, Aarhus Universitetssykehus.

FFPE-blokker vil bli seksjonert for morfologianalyse (hematoxylin & eosin (H&E) og for immuno-histo-kjemi analyse (IHC). Vi vil bruke sandwichteknikken for p16INK4a og HPV E4 IHC-analysen, ved å bruke CINtec® Histology Kit (Roche) og SILgrade E4-analysen (LBP). Deretter vil de fargede objektglassene bli evaluert av et ekspertpanel innen gynekologisk patologi (henholdsvis 2 fra Danmark, 1 fra Storbritannia og 1 fra USA).

Eksponering vil bli definert som å uttrykke en HPV E4 positiv (CIN1-lignende) vs HPV E4 negativ (CIN3-lignende) intraepitelial reaksjon.

Statistisk analyse: Lineær regresjonsmodell, effektmål; relativ risiko (RR) (95 % KI).

Maktberegninger: Ved en utvalgsstørrelse på N=500 kvinner forventes en statistisk potens på 89 %, ved signifikansnivået 0,05 (alfa). Blant kvinner som utvikler seg eller vedvarer under overvåking, forventes en prevalens på 50 % CIN2 HPV E4 positive lesjoner og 70 % p16INK4a positive CIN2 lesjoner.

Innstillinger og samarbeidspartnere Prosjektet vil bli utført ved Gynekologisk og Obstetrisk avdeling ved Gødstrup Hospital i nært samarbeid med Patologisk avdeling, Aarhus Universitetssykehus inkludert DDL Diagnostisk Laboratorium; University of Virginia; University of Cambridge og University of Maryland School of Medicine.

Hovedforskergruppe i Danmark

1. Førsteamanuensis, dr.med., Anne Hammer Lauridsen, Gynekologisk og obstetrisk avdeling, Gødstrup Hospital, Region Midt Danmark & ​​Klinisk avdeling, Aarhus Universitet
2. Professor, MD, Lone Kjeld Pedersen, Gynekologisk og obstetrisk avdeling, Odense Universitetssykehus & OPEN, Syddansk Universitet.
3. Professor, dr.med. Torben Steiniche, professor, patologisk avdeling, Aarhus Universitetssykehus & Klinisk avdeling, Aarhus Universitet.
4. Ph.d-student, Msch Health Science, Rikke Damgaard, Gynekologisk og obstetrisk avdeling, Gødstrup Sykehus, Region Midt i Danmark & ​​Institutt for klinisk medisin, Aarhus Universitet.

Etisk erklæring Studien er godkjent av Regional Komité for Helseforskningsetisk, Region Midtjylland og registrert ved Juridisk Institutt, Helsefakultetet, Aarhus Universitet i henhold til dansk lov.

Perspektiver Biomarkører pålitelige for risikostratifisering av CIN2-lesjoner er viktig for klinisk rådgivning av kvinner, dette vil muliggjøre en mer spesifikk og personlig oppfølgingsstrategi for å unngå risiko for over- eller underbehandling. Ettersom andre land beveger seg mot en mer konservativ tilnærming (aktiv overvåking) med hensyn til håndtering av unge kvinner med CIN2, kan våre resultater også være verdifulle i et internasjonalt perspektiv.