Biomarcatori predittivi per l'evoluzione della neoplasia intraepiteliale cervicale di grado 2 (CIN2)

Introduzione L'infezione persistente da papillomavirus umano ad alto rischio (hrHPV) è una fonte eziologica del cancro cervicale [1]. La neoplasia intraepiteliale cervicale CIN1 (bassa), CIN2 (moderata), CIN3 (grave) definisce le lesioni precancerose cervicali evolute dalla linea cellulare dell'epitelio squamoso [3]. Le lesioni CIN1 e CIN2 sono associate a tassi di progressione inferiori per il cancro cervicale rispetto a CIN3 [4]. CIN2 rappresenta una sfida importante dal punto di vista clinico, a causa dell'espressione eterogenica di lesioni in evoluzione sia CIN1-like che CIN3-like, che gli attuali strumenti diagnostici non consentono di stratificare nel rischio di progressione [5]. La stratificazione del rischio di CIN2 è molto importante per la gestione clinica di CIN2 e per evitare il rischio di sovra o sottotrattamento. Storicamente, CIN2 è stata la soglia per la gestione chirurgica (biopsia escissionale del cono). Tuttavia, poiché i tassi di regressione delle lesioni CIN2 sono elevati e la biopia escissionale del cono è associata a danni riproduttivi, come la nascita pretermine, molti paesi come la Danimarca hanno adottato un approccio più conservativo nella gestione delle giovani donne con CIN2 (es. sorveglianza attiva: colposcopia, punch biopsia cervicale ogni 4-6 mesi fino a due anni di follow-up senza alcuna procedura chirurgica) [6,7]. Nella regione centrale della Danimarca, la sorveglianza attiva è stata raccomandata per le giovani donne dal 1995.

La proteina p16 svolge un ruolo importante come inibitore nella regolazione e differenziazione cellulare. p16 è un marker surrogato comune per l'attività oncogenica di hrHPV E6/E7 e la trasformazione cellulare associata all'evoluzione del cancro. Il livello di espressione intrapeiteliale di p16 è positivamente associato al grado di lesione CIN e può essere rilevato dal biomarcatore immunoistochimico p16INK4a [7, 8]. Sebbene il biomarcatore p16INK4a abbia un valore aggiunto per la diagnostica e la classificazione delle lesioni precancerose cervicali, il biomarcatore non è robusto per la stratificazione del rischio di CIN2 [9].

Studi recenti mostrano che il nuovo biomarcatore HPV E4 può potenzialmente distinguere CIN2 in lesioni simili a CIN1 rispetto a lesioni simili a CIN3. Suggerendo che l'HPV E4 potrebbe essere un potenziale biomarcatore per la stratificazione del rischio di CIN2 [10-12].

Tuttavia, mancano conoscenze sull'HPV E4 come predittore dell'evoluzione di CIN2.

Scopo Esplorare se il biomarcatore HPV E4 può prevedere il rischio di evoluzione di CIN2.

Materiali e metodi Disegno dello studio: Studio di coorte storico. Popolazione in studio: N=500 donne di età compresa tra 23 e 40 anni, con un record di CIN2 nella banca dati patologica danese [2000-2010], presso il Dipartimento di Patologia, Aarhus University Hospital. Tutte le donne sono definite come gestite da sorveglianza attiva (es. colposcopia e punch biopsia cervicale ogni 4-6 mesi fino a due anni di follow-up).

Selezione: le donne idonee con un record di diagnosi accidentale di CIN2 saranno identificate nella banca dati patologica danese tra tutte le donne con un record di diagnosi CIN2 nel periodo 2000-2010.

Analisi di laboratorio: campioni di tessuto fissati in formalina e inclusi in paraffina (FFPE) saranno raccolti dagli archivi, presso il Dipartimento di Patologia, Aarhus University Hospital.

I blocchi di FFPE saranno sezionati per l'analisi morfologica (ematossilina ed eosina (H&E) e per l'analisi immunoistochimica (IHC). Applicheremo la tecnica sandwich per l'analisi IHC di p16INK4a e HPV E4, utilizzando il CINtec® Histology Kit (Roche) e il test SILgrade E4 (LBP). Successivamente, i vetrini colorati saranno valutati da un gruppo di esperti all'interno della patologia ginecologica (rispettivamente 2 dalla Danimarca, 1 dal Regno Unito e 1 dagli Stati Uniti).

L'esposizione sarà definita come l'espressione di una reazione intraepiteliale HPV E4 positiva (simile a CIN1) rispetto a HPV E4 negativa (simile a CIN3).

Analisi statistica: modello di regressione lineare, misura dell'effetto; rischio relativo (RR) (IC 95%).

Calcolo della potenza: per un campione di N=500 donne, è prevista una potenza statistica dell'89%, al livello di significatività 0,05 (alfa). Tra le donne che progrediscono o persistono durante la sorveglianza, è prevista una prevalenza del 50% di lesioni CIN2 HPV E4 positive e del 70% di lesioni CIN2 positive per p16INK4a.

Ambienti e collaboratori Il progetto sarà svolto presso il Dipartimento di Ginecologia e Ostetricia dell'Ospedale di Gødstrup in stretta collaborazione con il Dipartimento di Patologia dell'Ospedale Universitario di Aarhus, compreso il Laboratorio Diagnostico DDL; Università della Virginia; Università di Cambridge e Scuola di Medicina dell'Università del Maryland.

Principale gruppo di ricerca in Danimarca

1. Professore associato, MD, Anne Hammer Lauridsen, Dipartimento di ginecologia e ostetricia, Ospedale di Gødstrup, Regione centrale della Danimarca e Dipartimento di medicina clinica, Università di Aarhus
2. Professore, MD, Lone Kjeld Pedersen, Dipartimento di Ginecologia e Ostetricia, Ospedale universitario di Odense e OPEN, Università della Danimarca meridionale.
3. Professore, MD, Torben Steiniche, Professore, Dipartimento di Patologia, Ospedale universitario di Aarhus e Dipartimento di medicina clinica, Università di Aarhus.
4. Ph.d-student, Msch Health Science, Rikke Damgaard, Dipartimento di Ginecologia e Ostetricia, Gødstrup Hospital, Regione Centrale della Danimarca e Dipartimento di Medicina Clinica, Università di Aarhus.

Dichiarazione etica Lo studio è approvato dal Comitato Regionale per l'Etica della Ricerca Sanitaria, Regione Centrale della Danimarca e registrato presso il Dipartimento Legale, Facoltà di Salute, Università di Aarhus come richiesto dalla legge danese.

Prospettive I biomarcatori affidabili per la stratificazione del rischio delle lesioni CIN2 sono importanti per la consulenza clinica delle donne, ciò consentirà una strategia di follow-up più specifica e personalizzata per evitare il rischio di trattamento eccessivo o insufficiente. Poiché altri paesi si stanno muovendo verso un approccio più conservativo (sorveglianza attiva) rispetto alla gestione delle giovani donne con CIN2, i nostri risultati possono essere preziosi anche in una prospettiva internazionale.