Biomarkery prediktivní pro vývoj cervikální intraepiteliální neoplazie 2. stupně (CIN2)

Úvod Perzistující infekce vysoce rizikovým lidským papilomavirem (hrHPV) je kauzálním zdrojem rakoviny děložního čípku [1]. Cervikální intraepiteliální neoplazie CIN1 (nízká), CIN2 (střední), CIN3 (závažná) definuje cervikální prekancerózní léze vzniklé z buněčné linie dlaždicového epitelu [3]. Léze CIN1 a CIN2 jsou spojeny s nižší mírou progrese u karcinomu děložního hrdla než u CIN3 [4]. CIN2 představuje velkou klinickou výzvu vzhledem k heterogenní expresi jak CIN1-like, tak CIN3-like vyvíjejících se lézí, které současné diagnostické nástroje neumožňují stratifikovat riziko progrese [5]. Riziková stratifikace CIN2 je velmi důležitá pro klinickou léčbu CIN2 a pro zamezení riziku nadměrné nebo nedostatečné léčby. Historicky byl CIN2 prahem pro chirurgický management (čípková excizní biopsie). Protože však míra regrese lézí CIN2 je vysoká a excizní biopy kužele je spojena s poškozením reprodukce, jako je předčasný porod, mnoho zemí, jako je Dánsko, přijalo konzervativnější přístup v léčbě mladých žen s CIN2 (tj. aktivní sledování: kolposkopie, cervikální punčové biopsie každých 4–6 měsíců až do dvou let sledování bez jakéhokoli chirurgického zákroku) [6,7]. V centrálním regionu Dánska je aktivní dohled pro mladé ženy doporučován od roku 1995.

Protein p16 hraje důležitou roli jako inhibitor v buněčné regulaci a diferenciaci. p16 je běžný náhradní marker pro hrHPV E6/E7 onkogenní aktivitu a buněčnou transformaci spojenou s rozvojem rakoviny. Hladina intrapeiteliální exprese p16 je pozitivně spojena se stupněm léze CIN a může být detekována imunohistochemickým biomarkerem p16INK4a [7, 8]. Přestože biomarker p16INK4a má přidanou hodnotu k diagnostice a gradingu cervikálních prekancerogenních lézí, biomarker není robustní pro stratifikaci rizika CIN2 [9].

Nedávné studie ukazují, že nový biomarker HPV E4 může potenciálně odlišit CIN2 v lézích podobných CIN1 od lézí podobných CIN3. Naznačuje, že HPV E4 by mohl být potenciálním biomarkerem pro stratifikaci rizika CIN2 [10–12].

Nicméně chybí znalosti o HPV E4 jako prediktoru pro vývoj CIN2.

Cíl Prozkoumat, zda biomarker HPV E4 může předpovídat riziko rozvoje CIN2.

Materiály a metody Design studie: Historická kohortová studie. Studijní populace: N=500 žen ve věku 23–40 let, se záznamem CIN2 v Dánské patologické datové bance [2000–2010] na Ústavu patologie Fakultní nemocnice Aarhus. Všechny ženy jsou definovány jako řízené aktivním dohledem (tj. kolposkopie a cervikální punčové biopsie každých 4-6 měsíců až po dvouleté sledování).

Výběr: Vhodné ženy se záznamem náhodné diagnózy CIN2 budou identifikovány v Dánské patologické databance mezi všemi ženami se záznamem diagnózy CIN2 v letech 2000-2010.

Laboratorní analýza: Vzorky tkáně fixované ve formalínu zalité v parafínu (FFPE) budou shromážděny z archivů na Ústavu patologie Fakultní nemocnice v Aarhusu.

Bloky FFPE budou rozděleny pro morfologickou analýzu (hematoxylin & eosin (H&E) a pro imunohistochemickou analýzu (IHC). Použijeme sendvičovou techniku ​​pro analýzu p16INK4a a HPV E4 IHC pomocí soupravy CINtec® Histology Kit (Roche) a testu SILgrade E4 (LBP). Následně budou obarvená sklíčka vyhodnocena odbornou komisí v rámci gynekologické patologie (2 z Dánska, 1 z Velké Británie a 1 z USA).

Expozice bude definována jako vyjádření HPV E4 pozitivní (CIN1-like) vs HPV E4 negativní (CIN3-like) intraepiteliální reakce.

Statistická analýza: Lineární regresní model, měření účinku; relativní riziko (RR) (95% CI).

Výpočty síly: Při velikosti vzorku N=500 žen se očekává statistická síla 89 %, na hladině významnosti 0,05 (alfa). U žen, které progredují nebo přetrvávají během sledování, se očekává prevalence 50 % CIN2 HPV E4 pozitivních lézí a 70 % p16INK4a pozitivních CIN2 lézí.

Nastavení a spolupracovníci Projekt bude realizován na Gynekologicko-porodnické klinice nemocnice Gødstrup v úzké spolupráci s Ústavem patologie Fakultní nemocnice Aarhus včetně Diagnostické laboratoře DDL; University of Virginia; University of Cambridge a University of Maryland School of Medicine.

Hlavní výzkumná skupina v Dánsku

1. Docent, MD, Anne Hammer Lauridsen, oddělení gynekologie a porodnictví, nemocnice Gødstrup, centrální region Dánska a oddělení klinické medicíny, Aarhus University
2. Profesor, MD, Lone Kjeld Pedersen, oddělení gynekologie a porodnictví, Odense University Hospital & OPEN, University of Southern Denmark.
3. Profesor, MD, Torben Steiniche, profesor, Ústav patologie, Aarhus University Hospital & Department of Clinical Medicine, Aarhus University.
4. Ph.d-student, Msch Health Science, Rikke Damgaard, oddělení gynekologie a porodnictví, nemocnice Gødstrup, centrální region Dánska a oddělení klinické medicíny, Aarhus University.

Etické prohlášení Studie je schválena Regionálním výborem pro etiku zdravotnického výzkumu, Centrální region Dánska a registrována na právním oddělení Fakulty zdravotnictví Univerzity Aarhus v souladu s požadavky dánského práva.

Perspektivy Biomarkery spolehlivé pro stratifikaci rizika lézí CIN2 jsou důležité pro klinické poradenství ženám, což umožní specifičtější a personalizovanější strategii sledování, aby se zabránilo riziku nadměrné nebo nedostatečné léčby. Vzhledem k tomu, že ostatní země směřují ke konzervativnějšímu přístupu (aktivní surveillance) s ohledem na management mladých žen s CIN2, naše výsledky mohou být cenné i v mezinárodním měřítku.