Biomarcadores preditivos para a evolução da neoplasia intraepitelial cervical grau 2 (CIN2)

Introdução A infecção persistente com papilomavírus humano de alto risco (hrHPV) é uma fonte causadora de câncer cervical [1]. Neoplasia intraepiteelial cervical CIN1 (baixa), CIN2 (moderada), CIN3 (grave) define lesões pré-cancerosas cervicais evoluídas a partir da linha celular do epitélio escamoso [3]. As lesões CIN1 e CIN2 estão associadas a taxas de progressão mais baixas para câncer cervical do que CIN3 [4]. A NIC2 representa um grande desafio clinicamente, devido à expressão heterogênea de lesões evolutivas semelhantes a NIC1 e semelhantes a NIC3, cujas ferramentas de diagnóstico atuais não permitem estratificar o risco de progressão [5]. A estratificação de risco de NIC2 é altamente importante para o manejo clínico de NIC2 e para evitar o risco de super ou subtratamento. Historicamente, CIN2 tem sido o limiar para tratamento cirúrgico (biópsia excisional em cone). No entanto, como as taxas de regressão das lesões de NIC2 são altas e a biópsia excisional do cone está associada a danos reprodutivos, como parto prematuro, muitos países, como a Dinamarca, adotaram uma abordagem mais conservadora no tratamento de mulheres jovens com NIC2 (ou seja, vigilância ativa: colposcopia, biópsias cervicais a cada 4-6 meses até dois anos de acompanhamento sem qualquer procedimento cirúrgico) [6,7]. Na Região Central da Dinamarca, a vigilância ativa é recomendada para mulheres jovens desde 1995.

A proteína p16 desempenha um importante papel como inibidora na regulação e diferenciação celular. p16 é um marcador substituto comum para a atividade oncogênica hrHPV E6/E7 e transformação celular associada à evolução do câncer. O nível de expressão intrapeitelial de p16 está positivamente associado ao grau de lesão de NIC e pode ser detectado pelo biomarcador imuno-histoquímico p16INK4a [7, 8]. Embora o biomarcador p16INK4a tenha agregado valor ao diagnóstico e classificação de lesões precursoras do câncer cervical, o biomarcador não é robusto para a estratificação de risco de NIC2 [9].

Estudos recentes mostram que o novo biomarcador HPV E4 pode potencialmente distinguir CIN2 em lesões semelhantes a CIN1 versus CIN3. Sugerindo que o HPV E4 poderia ser um potencial biomarcador para a estratificação de risco de NIC2 [10-12].

No entanto, falta conhecimento sobre o HPV E4 como preditor para o desenvolvimento de NIC2.

Objetivo Explorar se o biomarcador HPV E4 pode predizer o risco de evolução de NIC2.

Materiais e métodos Desenho do estudo: Estudo de coorte histórica. População do estudo: N=500 mulheres de 23 a 40 anos de idade, com registro de NIC2 no Banco Dinamarquês de Dados Patológicos [2000-2010], no Departamento de Patologia do Aarhus University Hospital. Todas as mulheres são definidas como controladas por vigilância ativa (ou seja, colposcopia e biópsias cervicais a cada 4-6 meses até dois anos de acompanhamento).

Seleção: As mulheres elegíveis com registro de diagnóstico incidental de NIC2 serão identificadas no banco de dados dinamarquês de patologia entre todas as mulheres com registro de diagnóstico de NIC2 durante 2000-2010.

Análise laboratorial: Amostras de tecido fixadas em formol e embebidas em parafina (FFPE) serão compiladas dos arquivos do Departamento de Patologia do Aarhus University Hospital.

Os blocos FFPE serão seccionados para análise morfológica (hematoxilina & eosina (H&E) e para análise imuno-histoquímica (IHC). Aplicaremos a técnica de sanduíche para a análise de p16INK4a e HPV E4 IHC, utilizando o CINtec® Histology Kit (Roche) e o ensaio SILgrade E4 (LBP). Posteriormente, as lâminas coradas serão avaliadas por um painel de especialistas em patologia ginecológica (2 da Dinamarca, 1 do Reino Unido e 1 dos EUA, respectivamente).

A exposição será definida como expressando uma reação intraepitelial positiva para HPV E4 (semelhante a CIN1) versus negativa para HPV E4 (semelhante a CIN3).

Análise estatística: Modelo de regressão linear, medida de efeito; risco relativo (RR) (IC 95%).

Cálculos de poder: Em um tamanho de amostra de N=500 mulheres, espera-se um poder estatístico de 89%, no nível de significância 0,05 (alfa). Entre as mulheres que progridem ou persistem durante a vigilância, espera-se uma prevalência de 50% de lesões CIN2 HPV E4 positivas e 70% de lesões CIN2 positivas para p16INK4a.

Configurações e colaboradores O projeto será realizado no Departamento de Ginecologia e Obstetrícia do Hospital Gødstrup em estreita colaboração com o Departamento de Patologia do Hospital Universitário de Aarhus, incluindo o Laboratório de Diagnóstico DDL; Universidade da Virgínia; Universidade de Cambridge e Escola de Medicina da Universidade de Maryland.

Principal grupo de pesquisa na Dinamarca

1. Professora associada, MD, Anne Hammer Lauridsen, Departamento de Ginecologia e Obstetrícia, Hospital Gødstrup, Região Central da Dinamarca e Departamento de Medicina Clínica, Universidade de Aarhus
2. Professor, MD, Lone Kjeld Pedersen, Departamento de Ginecologia e Obstetrícia, Odense University Hospital & OPEN, University of Southern Denmark.
3. Professor, MD, Torben Steiniche, Professor, Departamento de Patologia, Aarhus University Hospital e Departamento de Medicina Clínica, Aarhus University.
4. Ph.d-student, Msch Health Science, Rikke Damgaard, Departamento de Ginecologia e Obstetrícia, Hospital Gødstrup, Região Central da Dinamarca e Departamento de Medicina Clínica, Aarhus University.

Declaração ética O estudo foi aprovado pelo Comitê Regional de Ética em Pesquisa em Saúde da Região Central da Dinamarca e registrado no Departamento Jurídico da Faculdade de Saúde da Universidade de Aarhus, conforme exigido pela lei dinamarquesa.

Perspectivas Biomarcadores confiáveis ​​para a estratificação de risco de lesões de NIC2 são importantes para o aconselhamento clínico de mulheres, isso permitirá uma estratégia de acompanhamento mais específica e personalizada para evitar o risco de super ou subtratamento. Como outros países estão adotando uma abordagem mais conservadora (vigilância ativa) com relação ao manejo de mulheres jovens com NIC2, nossos resultados também podem ser valiosos em uma perspectiva internacional.