Биомаркеры, прогнозирующие развитие цервикальной интраэпителиальной неоплазии 2 степени (CIN2)

Введение Персистирующая инфекция вирусом папилломы человека высокого риска (врВПЧ) является причинным источником рака шейки матки [1]. Цервикальная интраэпителиальная неоплазия CIN1 (низкая), CIN2 (умеренная), CIN3 (тяжелая) определяет предраковые поражения шейки матки, развившиеся из клеточной линии плоского эпителия [3]. Поражения CIN1 и CIN2 связаны с более низкой скоростью прогрессирования рака шейки матки, чем CIN3 [4]. CIN2 представляет серьезную клиническую проблему из-за гетерогенной экспрессии как CIN1-подобных, так и CIN3-подобных развивающихся поражений, которые современные диагностические инструменты не позволяют стратифицировать по риску прогрессирования [5]. Стратификация риска CIN2 очень важна для клинического ведения CIN2 и во избежание риска избыточного или недостаточного лечения. Исторически CIN2 был порогом для хирургического лечения (конусная эксцизионная биопсия). Однако, поскольку частота регрессии поражений CIN2 высока, а конусная эксцизионная биопия связана с нарушением репродуктивной функции, например преждевременными родами, во многих странах, таких как Дания, принят более консервативный подход к ведению молодых женщин с CIN2 (т. активное наблюдение: кольпоскопия, пункционная биопсия шейки матки каждые 4-6 месяцев до двух лет наблюдения без каких-либо хирургических вмешательств) [6,7]. В Центральном регионе Дании активное наблюдение за молодыми женщинами рекомендуется с 1995 года.

Белок p16 играет важную роль в качестве ингибитора клеточной регуляции и дифференцировки. p16 является распространенным суррогатным маркером онкогенной активности врВПЧ E6/E7 и клеточной трансформации, связанной с развитием рака. Уровень внутриэпителиальной экспрессии p16 положительно связан со степенью поражения CIN и может быть обнаружен с помощью иммуногистохимического биомаркера p16INK4a [7, 8]. Хотя биомаркер p16INK4a имеет дополнительную ценность для диагностики и классификации предраковых поражений шейки матки, биомаркер не является надежным для стратификации риска CIN2 [9].

Недавние исследования показывают, что новый биомаркер HPV E4 может потенциально различать CIN2 в CIN1-подобных и CIN3-подобных поражениях. Предполагается, что HPV E4 может быть потенциальным биомаркером для стратификации риска CIN2 [10-12].

Тем не менее, отсутствуют данные о HPV E4 как о предикторе развития CIN2.

Цель Изучить, может ли биомаркер HPV E4 предсказать риск развития CIN2.

Материалы и методы. Дизайн исследования: Историческое когортное исследование. Исследуемая группа: N = 500 женщин в возрасте 23–40 лет с записью CIN2 в Датском банке патологических данных [2000–2010 гг.], в отделении патологии Орхусской университетской больницы. Все женщины находятся под активным наблюдением (т.е. кольпоскопия и пункционная биопсия шейки матки каждые 4-6 месяцев до двух лет наблюдения).

Отбор: Подходящие женщины со случайным диагнозом CIN2 будут определены в Датском банке данных патологии среди всех женщин с диагнозом CIN2 в течение 2000-2010 гг.

Лабораторный анализ: Фиксированные формалином образцы тканей, залитые парафином (FFPE), будут собраны из архивов в отделении патологии Орхусской университетской больницы.

Блоки FFPE будут разделены для морфологического анализа (гематоксилин и эозин (H&E) и для иммуногистохимического анализа (IHC). Мы будем применять сэндвич-методику для анализа ИГХ p16INK4a и HPV E4 с использованием гистологического набора CINtec® (Roche) и анализа SILgrade E4 (LBP). Впоследствии окрашенные предметные стекла будут оценены группой экспертов по гинекологической патологии (2 из Дании, 1 из Великобритании и 1 из США соответственно).

Воздействие будет определяться как выражение внутриэпителиальной реакции, положительной по отношению к HPV E4 (CIN1-подобной) и отрицательной по HPV E4 (CIN3-подобной).

Статистический анализ: модель линейной регрессии, мера эффекта; относительный риск (ОР) (95% ДИ).

Расчет мощности: при размере выборки N = 500 женщин ожидается статистическая мощность 89% при уровне значимости 0,05 (альфа). Среди женщин, которые прогрессируют или сохраняются во время наблюдения, ожидается преобладание 50% CIN2-положительных поражений HPV E4 и 70% p16INK4a-положительных поражений CIN2.

Места и сотрудники Проект будет осуществляться в отделении гинекологии и акушерства больницы Гёдструп в тесном сотрудничестве с отделением патологии больницы Орхусского университета, включая диагностическую лабораторию DDL; Университет Вирджинии; Кембриджский университет и Медицинская школа Мэрилендского университета.

Основная исследовательская группа в Дании

1. Доцент, доктор медицинских наук, Энн Хаммер Лауридсен, отделение гинекологии и акушерства, больница Гёдструп, Центральный регион Дании, и отделение клинической медицины, Орхусский университет
2. Профессор, доктор медицинских наук, Лоне Кьелд Педерсен, отделение гинекологии и акушерства, Университетская больница Оденсе и OPEN, Университет Южной Дании.
3. Профессор, доктор медицинских наук, Торбен Штайниче, профессор кафедры патологии Орхусского университетского госпиталя и кафедры клинической медицины Орхусского университета.
4. Аспирант, Msch Health Science, Rikke Damgaard, отделение гинекологии и акушерства, больница Gødstrup, Центральный регион Дании, и отделение клинической медицины, Орхусский университет.

Этическое заявление Исследование одобрено Региональным комитетом по этике медицинских исследований Центрального региона Дании и зарегистрировано юридическим отделом медицинского факультета Орхусского университета в соответствии с требованиями датского законодательства.

Перспективы Биомаркеры, надежные для стратификации риска поражений CIN2, важны для клинического консультирования женщин, это позволит разработать более конкретную и персонализированную стратегию последующего наблюдения, чтобы избежать риска избыточного или недостаточного лечения. Поскольку другие страны переходят к более консервативному подходу (активное наблюдение) в отношении ведения молодых женщин с CIN2, наши результаты могут быть ценными и в международной перспективе.