牙周炎中的 GCF Annexin-A1、碳酸酐酶-1 和延伸因子-1 γ 水平

根据2017年世界牙周及种植体周围疾病分类研讨会提出的放射学和临床诊断标准安排牙周疾病和病症的诊断；本研究纳入了 20 名 III 期 B 级广泛性牙周炎患者、20 名 III 期 C 级广泛性牙周炎患者、19 名牙龈炎患者和牙周健康志愿者。

健康和牙周炎受试者的临床牙周检查包括菌斑指数（PI）、探诊深度（PPD）、临床附着水平（CAL）和记录的探诊出血（BOP）。 CAL 是通过将 GR 添加到 PPD 值来计算的。 计算每个受试者的全口 PPD、CAL 和 BOP 部位百分比的平均值。 一名经过校准的检查员 (VO) 对所有参与者进行了全口牙周检查。 使用 Williams 牙周探针（Hu-Friedy，Chicago，IL，USA）进行测量。 所有测量均在全口和每颗牙齿的 4 个位置（近颊、中颊、远颊和舌中）进行。 在临床测量之前，检查员内部校准通过对 5 名患者进行两次 PPD 和 CAL 值测量，间隔为 1 天，导致组内相关系数 PD 为 0.92，CAL 为 0.90。

GCF 样本取自单根牙齿中两个不相邻的邻间部位的颊侧。 在牙周炎组中，GCF 是从两个最深的单根牙袋中取样的。 从牙龈炎组有明显炎症迹象的部位和健康组没有 BOP 的部位采集样本。 使用无菌刮匙仔细清除选定区域的龈上菌斑，用棉卷隔离，并稍微风干以避免污染。

标准化滤纸条 (PerioPaper, Proflow, Amityville, NY) 用于 GCF 采样。 将无菌纸条轻轻插入牙龈沟或袋中，直到感觉到轻微阻力，并在此处放置 30 秒。 避免了机械刺激，丢弃了视觉上被血液污染的条带。 预先校准的电子设备测量吸收的流体体积（Periotron 8010，Oraflow，Amityville，NY）。 参考标准曲线将读数转换为实际体积（微升，μL）。 将纸条单独放入无菌聚丙烯管中，并储存在 -80°C 下以供进一步分析。

使用 ELISA 方法（Bioscience SRB，目录号：201-12-3158）使用市售试剂盒研究膜联蛋白-A1 水平。 光密度在 450 nm 的波长下通过分光光度法测量 (Tecan)。 Annexin-A1 试剂盒的检测范围为 0.20-20 ng/mL，灵敏度为 0.2 ng/mL，批内和批间变异系数 (CV%) <10%。 结果以ng表示。

使用 ELISA 方法（Bioscience SRB，目录号：SRB-T-88927），使用市售试剂盒研究碳酸酐酶 1 水平。 光密度在 450 nm 的波长下通过分光光度法测量 (Tecan)。 CA I 试剂盒的检测范围为 3.12-200ng/mL，灵敏度 <1.875ng/mL，批内和批间变异系数 (CV%) <10%。 结果以ng表示。

使用 ELISA 方法（Bioscience SRB，目录号：201-12-3732）使用市售试剂盒研究 EEF1G 水平。 光密度在 450 nm 的波长下通过分光光度法测量 (Tecan)。 EF1-Ɣ 试剂盒的检测范围为 31.25-2000pg/mL， 灵敏度<12.4pg/mL，批内和批间变异系数（CV%）<10%。 结果以ng表示。

使用非参数技术进行统计分析。 研究组之间的比较使用 Kruskal-Wallis 检验进行。 当存在显着差异 (p < 0.05) 时，使用 Bonferroni 校正的 Mann-Whitney U 检验评估事后 2 组比较，p 值 < 0.05 被认为具有显着性。 所有数据分析均使用统计包（Abacus Concepts Inc., Berkeley, CA, USA）进行。 评估了测试数据集的诊断准确性、灵敏度、特异性、阳性预测值（PPV）、阴性预测值（NPV）、受试者工作特征（ROC）曲线和ROC曲线下面积（AUC）。 P 值 < 0.05 被认为具有统计学意义，并计算 95% 置信区间 (CI)。