GCF Anexina-A1, Anidrase Carbônica-1 e Níveis Gama do Fator de Alongamento-1 na Periodontite

O diagnóstico das doenças e condições periodontais foi organizado de acordo com os critérios diagnósticos radiográficos e clínicos propostos pelo Workshop Mundial de 2017 sobre Classificação de Doenças e Condições Periodontais e Peri-implantares; 20 pacientes com periodontite generalizada estágio III grau B, 20 pacientes com periodontite generalizada estágio III grau C, 19 pacientes com gengivite e voluntários periodontais saudáveis ​​foram incluídos neste estudo.

O exame clínico periodontal dos indivíduos saudáveis ​​e com periodontite consistiu no índice de placa (PI), profundidade da bolsa de sondagem (PPD), nível de inserção clínica (CAL) e sangramento à sondagem (BOP) registrados. O CAL foi calculado adicionando GR aos valores de PPD. As médias para PPD de boca cheia, CAL e a porcentagem de locais com BOP foram calculadas para cada indivíduo. Um único examinador calibrado (VO) realizou um exame periodontal completo da boca de todos os participantes. As medidas foram realizadas usando uma sonda periodontal Williams (Hu-Friedy, Chicago, IL, EUA). Todas as medições foram realizadas em toda a boca e em 4 locais (mésio-vestibular, meio-vestibular, disto-vestibular e meio-lingual) para cada dente. Antes das medições clínicas, a calibração intra-examinador foi realizada medindo os valores de PPD e CAL duas vezes em cinco pacientes com um intervalo de um dia, resultando em coeficientes de correlação intraclasse de 0,92 para PD e 0,90 para CAL.

Amostras GCF foram retiradas das faces vestibulares de dois sítios interproximais não adjacentes em dentes uniradiculares. Nos grupos de periodontite, GCF foi amostrado de dois bolsos mais profundos de dentes unitários. As amostras foram coletadas dos locais com sinais visíveis de inflamação no grupo com gengivite e sem BOP no grupo saudável. As áreas selecionadas foram cuidadosamente limpas de placa supragengival com curetas estéreis, isoladas com rolos de algodão e levemente secas ao ar para evitar contaminação.

Tiras de papel de filtro padronizadas (PerioPaper, Proflow, Amityville, NY) foram usadas para amostragem GCF. Tiras de papel estéril foram gentilmente inseridas no sulco ou bolsa gengival até que uma leve resistência fosse sentida e deixadas lá por 30 segundos. A irritação mecânica foi evitada e as tiras visualmente contaminadas com sangue foram descartadas. Um dispositivo eletrônico pré-calibrado mediu o volume de fluido absorvido (Periotron 8010, Oraflow, Amityville, NY). As leituras foram convertidas para um volume real (microlitro, μL) por referência à curva padrão. As tiras de papel foram colocadas individualmente em um tubo de polipropileno estéril e armazenadas a -80◦C para posterior análise.

Os níveis de anexina-A1 foram estudados com kits disponíveis comercialmente usando o método ELISA (Bioscience SRB, catálogo no: 201-12-3158). A densidade óptica foi medida espectrofotometricamente em um comprimento de onda de 450 nm (Tecan). As faixas de ensaio para o kit Anexina-A1 foram de 0,20-20 ng/mL, sensibilidade de 0,2 ng/mL e os coeficientes de variância (CV%) intra e interensaio foram <10%. Os resultados foram apresentados como ng.

Os níveis de anidrase carbônica 1 foram estudados com kits disponíveis comercialmente usando o método ELISA (Bioscience SRB, catálogo no: SRB-T-88927). A densidade óptica foi medida espectrofotometricamente em um comprimento de onda de 450 nm (Tecan). As faixas de ensaio para o kit CA I foram de 3,12-200 ng/mL, sensibilidade <1,875 ng/mL e os coeficientes de variância intra e interensaio (CV%) foram <10%. Os resultados foram apresentados como ng.

Os níveis de EEF1G foram estudados com kits disponíveis comercialmente usando o método ELISA (Bioscience SRB, catálogo no: 201-12-3732). A densidade óptica foi medida espectrofotometricamente em um comprimento de onda de 450 nm (Tecan). As faixas de ensaio para o kit EF1-Ɣ foram 31,25-2000pg/mL, sensibilidade <12,4pg/mL, e os coeficientes de variância (CV%) intra e interensaio foram <10%. Os resultados foram apresentados como ng.

A análise estatística foi realizada por meio de técnicas não paramétricas. As comparações entre os grupos de estudo foram realizadas por meio do teste de Kruskal-Wallis. Quando havia diferenças significativas (p < 0,05), comparações post-hoc de 2 grupos foram avaliadas com testes de Mann-Whitney U corrigidos por Bonferroni, e valores de p < 0,05 foram considerados significativos. Toda a análise de dados foi realizada usando um pacote estatístico (Abacus Concepts Inc., Berkeley, CA, EUA). A precisão diagnóstica, sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo (PPV), valor preditivo negativo (VPN), curva característica de operação do receptor (ROC) e área sob a curva ROC (AUC) do conjunto de dados de teste foram avaliados. Valores de p < 0,05 foram considerados estatisticamente significativos e intervalos de confiança (ICs) de 95% foram calculados.