Hladiny anexinu GCF-A1, karboanhydrázy-1 a elongačního faktoru-1 u parodontitidy

Diagnostika onemocnění a stavů parodontu byla uspořádána podle radiografických a klinických diagnostických kritérií navržených v roce 2017 Světovým workshopem o klasifikaci parodontálních a periimplantátových onemocnění a stavů; Do této studie bylo zahrnuto 20 pacientů s generalizovanou parodontitidou stupně III stupně B, 20 pacientů s generalizovanou parodontitidou stupně III stupně C, 19 pacientů s gingivitidou a periodontálně zdraví dobrovolníci.

Klinické periodontální vyšetření zdravých subjektů a subjektů s periodontitidou sestávalo ze zaznamenaného indexu plaku (PI), hloubky kapsy sondy (PPD), úrovně klinického připojení (CAL) a krvácení při sondování (BOP). CAL byla vypočtena přidáním GR k hodnotám PPD. Pro každý subjekt byly vypočteny průměry pro PPD v plných ústech, CAL a procento míst s BOP. Jediný kalibrovaný vyšetřující lékař (VO) provedl u všech účastníků parodontální vyšetření celých úst. Měření byla provedena pomocí Williamsovy periodontální sondy (Hu-Friedy, Chicago, IL, USA). Všechna měření byla provedena v plných ústech a na 4 místech (mezio-bukální, střední-bukální, distobukální a střední-lingvální) pro každý zub. Před klinickými měřeními byla provedena kalibrace v rámci vyšetřovatele měřením hodnot PPD a CAL dvakrát u pěti pacientů s jednodenním intervalem, což vedlo k tomu, že korelační koeficienty uvnitř třídy byly 0,92 pro PD a 0,90 pro CAL.

Vzorky GCF byly odebrány z bukálních aspektů dvou nesousedních interproximálních míst u jednokořenových zubů. Ve skupinách s parodontitidou byl GCF odebrán ze dvou nejhlubších kapes jednokořenových zubů. Vzorky byly odebrány z míst s viditelnými známkami zánětu ve skupině s gingivitidou a bez BOP ve zdravé skupině. Vybrané oblasti byly pečlivě očištěny od supragingiválního plaku pomocí sterilních kyret, izolovány bavlněnými smotky a mírně vysušeny na vzduchu, aby se zabránilo kontaminaci.

Pro odběr vzorků GCF byly použity standardizované proužky filtračního papíru (PerioPaper, Proflow, Amityville, NY). Sterilní papírové proužky byly jemně vloženy do gingiválního sulku nebo kapsy, dokud nebyl pociťován mírný odpor, a ponechány tam po dobu 30 sekund. Bylo zabráněno mechanickému podráždění a proužky vizuálně kontaminované krví byly zlikvidovány. Předkalibrované elektronické zařízení měřilo absorbovaný objem tekutiny (Periotron 8010, Oraflow, Amityville, NY). Odečty byly převedeny na skutečný objem (mikrolitry, μl) odkazem na standardní křivku. Papírové proužky byly jednotlivě umístěny do sterilní polypropylenové zkumavky a skladovány při -80 °C pro další analýzu.

Hladiny annexinu-A1 byly studovány s komerčně dostupnými soupravami za použití metody ELISA (Bioscience SRB, katalogové č.: 201-12-3158). Optická hustota byla měřena spektrofotometricky při vlnové délce 450 nm (Tecan). Rozsahy testu pro soupravu Annexin-A1 byly 0,20-20 ng/ml, senzitivita 0,2 ng/ml a koeficienty variance v rámci testu a mezi testy (CV %) byly <10 %. Výsledky byly prezentovány jako ng.

Hladiny karboanhydrázy 1 byly studovány s komerčně dostupnými soupravami za použití metody ELISA (Bioscience SRB, katalogové č.: SRB-T-88927). Optická hustota byla měřena spektrofotometricky při vlnové délce 450 nm (Tecan). Rozsahy testu pro soupravu CA I byly 3,12-200 ng/ml, citlivost <1,875 ng/ml a koeficienty variance v rámci testu a mezi testy (CV %) byly <10 %. Výsledky byly prezentovány jako ng.

Hladiny EEF1G byly studovány s komerčně dostupnými soupravami za použití metody ELISA (Bioscience SRB, katalogové č.: 201-12-3732). Optická hustota byla měřena spektrofotometricky při vlnové délce 450 nm (Tecan). Rozsahy testu pro soupravu EF1-Ɣ byly 31,25-2000 pg/ml, citlivost <12,4 pg/ml a koeficienty variance (CV %) v rámci testu a mezi testy byly <10 %. Výsledky byly prezentovány jako ng.

Statistická analýza byla provedena pomocí neparametrických technik. Srovnání mezi studijními skupinami bylo provedeno pomocí Kruskal-Wallisova testu. Když byly signifikantní rozdíly (p < 0,05), byla hodnocena post-hoc dvouskupinová srovnání pomocí Bonferroniho korigovaných Mann-Whitney U testů a p-hodnoty < 0,05 byly považovány za významné. Veškerá analýza dat byla provedena pomocí statistického balíčku (Abacus Concepts Inc., Berkeley, CA, USA). Byla hodnocena diagnostická přesnost, senzitivita, specificita, pozitivní prediktivní hodnota (PPV), negativní prediktivní hodnota (NPV), křivka provozní charakteristiky přijímače (ROC) a plocha pod křivkou ROC (AUC) testovacího souboru dat. Hodnoty P < 0,05 byly považovány za statisticky významné a byly vypočteny 95% intervaly spolehlivosti (CI).