Livelli gamma GCF di annessina-A1, anidrasi carbonica-1 e fattore di allungamento-1 nella parodontite

La diagnosi delle malattie e delle condizioni parodontali è stata organizzata secondo i criteri diagnostici radiografici e clinici proposti dal World Workshop 2017 sulla classificazione delle malattie e condizioni parodontali e perimplantari; In questo studio sono stati inclusi 20 pazienti con parodontite generalizzata di stadio III di grado B, 20 pazienti con parodontite generalizzata di stadio III di grado C, 19 pazienti con gengivite e volontari parodontalmente sani.

L'esame clinico parodontale dei soggetti sani e con parodontite consisteva nella registrazione dell'indice di placca (PI), della profondità della tasca al sondaggio (PPD), del livello di attacco clinico (CAL) e del sanguinamento al sondaggio (BOP). CAL è stato calcolato aggiungendo GR ai valori PPD. Per ogni soggetto sono state calcolate le medie per PPD a bocca piena, CAL e la percentuale di siti con BOP. Un singolo esaminatore calibrato (VO) ha condotto un esame parodontale a bocca piena di tutti i partecipanti. Le misurazioni sono state eseguite utilizzando una sonda parodontale Williams (Hu-Friedy, Chicago, IL, USA). Tutte le misurazioni sono state eseguite a bocca piena e in 4 siti (mesio-buccale, medio-buccale, distobuccale e medio-linguale) per ciascun dente. Prima delle misurazioni cliniche, la calibrazione intra-esaminatore è stata eseguita misurando i valori PPD e CAL due volte su cinque pazienti con un intervallo di un giorno, risultando in coefficienti di correlazione intraclasse pari a 0,92 per PD e 0,90 per CAL.

I campioni GCF sono stati prelevati dagli aspetti buccali di due siti interprossimali non adiacenti in denti a radice singola. Nei gruppi di parodontite, il GCF è stato campionato da due tasche più profonde di denti a radice singola. I campioni sono stati raccolti dai siti con segni visibili di infiammazione nel gruppo gengivite e senza BOP nel gruppo sano. Le aree selezionate sono state accuratamente ripulite dalla placca sopragengivale utilizzando curette sterili, isolate con rulli di cotone e leggermente asciugate all'aria per evitare la contaminazione.

Per il campionamento GCF sono state utilizzate strisce di carta da filtro standardizzate (PerioPaper, Proflow, Amityville, NY). Strisce di carta sterili sono state inserite delicatamente nel solco gengivale o nella tasca fino a sentire una leggera resistenza e lasciate lì per 30 secondi. L'irritazione meccanica è stata evitata e le strisce visivamente contaminate dal sangue sono state scartate. Un dispositivo elettronico precalibrato ha misurato il volume del fluido assorbito (Periotron 8010, Oraflow, Amityville, NY). Le letture sono state convertite in un volume effettivo (microlitro, μL) facendo riferimento alla curva standard. Le strisce di carta sono state poste singolarmente in un tubo di polipropilene sterile e conservate a -80◦C per ulteriori analisi.

I livelli di annessina-A1 sono stati studiati con kit disponibili in commercio utilizzando il metodo ELISA (Bioscience SRB, numero di catalogo: 201-12-3158). La densità ottica è stata misurata spettrofotometricamente alla lunghezza d'onda di 450 nm (Tecan). Gli intervalli di analisi per il kit annessina-A1 erano 0,20-20 ng/mL, la sensibilità 0,2 ng/mL ei coefficienti di varianza intra- e inter-analisi (CV%) erano <10%. I risultati sono stati presentati come ng.

I livelli di anidrasi carbonica 1 sono stati studiati con kit disponibili in commercio utilizzando il metodo ELISA (Bioscience SRB, numero di catalogo: SRB-T-88927). La densità ottica è stata misurata spettrofotometricamente alla lunghezza d'onda di 450 nm (Tecan). Gli intervalli di dosaggio per il kit CA I erano 3,12-200 ng/mL, la sensibilità <1,875 ng/mL ei coefficienti di varianza intra e inter-saggio (CV%) erano <10%. I risultati sono stati presentati come ng.

I livelli di EEF1G sono stati studiati con kit disponibili in commercio utilizzando il metodo ELISA (Bioscience SRB, numero di catalogo: 201-12-3732). La densità ottica è stata misurata spettrofotometricamente alla lunghezza d'onda di 450 nm (Tecan). Gli intervalli di dosaggio per il kit EF1-Ɣ erano 31,25-2000 pg/mL, la sensibilità <12,4 pg/mL e i coefficienti di varianza intra e interanalisi (CV%) erano <10%. I risultati sono stati presentati come ng.

L'analisi statistica è stata eseguita utilizzando tecniche non parametriche. I confronti tra i gruppi di studio sono stati eseguiti utilizzando il test di Kruskal-Wallis. Quando c'erano differenze significative (p <0,05), i confronti post-hoc a 2 gruppi sono stati valutati con i test U di Mann-Whitney corretti da Bonferroni e i valori p <0,05 sono stati considerati significativi. Tutta l'analisi dei dati è stata eseguita utilizzando un pacchetto statistico (Abacus Concepts Inc., Berkeley, CA, USA). Sono stati valutati l'accuratezza diagnostica, la sensibilità, la specificità, il valore predittivo positivo (PPV), il valore predittivo negativo (NPV), la curva delle caratteristiche operative del ricevitore (ROC) e l'area sotto la curva ROC (AUC) del set di dati del test. I valori P <0,05 sono stati considerati statisticamente significativi e sono stati calcolati gli intervalli di confidenza al 95% (IC).