肺癌传播的见解 (LUCID)

在接受单独手术治疗或作为多模式治疗一部分手术的可切除NSCLC患者中，将评估CTC、ctDNA、STAS及淋巴结微转移水平，以观察其是否与复发模式及长期结局相关。

为实现此目标，将从三个时间点（术前、术后及随访期间）采集的外周静脉血样本中分析CTC和ctDNA的存在与数量。此外，以下方面将作为次要目标进行评估：

1. 评估位于原发肺肿瘤的肿瘤细胞与STAS和/或淋巴结转移中存在的肿瘤细胞之间空间转录组学的一致性，以及原发肺肿瘤细胞与循环肿瘤细胞之间分子谱的差异。
2. 量化术中变量对CTC和ctDNA释放入血的影响。

主要术中变量包括：

• 肺门结构切除顺序（如静脉优先 vs. 动脉优先）。
• 肺操作技术（开放手术、VATS、RATS）。
• 切除范围（肺段切除术、肺叶切除术、全肺切除术）。CTC将使用当前金标准平台（CellSearch系统，Menarini Silicon Biosystems，意大利）进行分析，而ctDNA将使用下一代测序（NGS）技术（ILLUMINA平台）进行评估。

对于空间转录组学评估，将使用Xenium平台（10x Genomics，美国）分析原发肿瘤及STAS和/或淋巴结转移的伊红-苏木精染色切片，通过Xenium人类免疫肿瘤分析面板对mRNA种类进行空间定量。

关于项目终点：连续变量将以中位数（IQR）描述，并使用t检验或Mann-Whitney检验进行比较；分类变量将以n（%）描述，并使用χ²/Fisher检验进行比较。OS和DFS将使用Kaplan-Meier法估计，通过log-rank检验比较，并采用多变量Cox模型分析（比例风险假设验证；结果以HR和95% CI表示）。对于考虑死亡作为竞争事件的复发发生率（DFI），将使用累积发生率函数和Gray检验；多变量分析采用Fine-Gray模型（亚风险比，95% CI）。生物标志物（CTC/ctDNA作为连续和/或二分类变量，如CTC≥1个细胞；VAF%/ng•mL）与时间依赖性结局的关联将通过Cox/Fine-Gray模型评估；STAS和淋巴结微转移的概率通过逻辑回归分析。术前/术后/随访期间CTC/ctDNA动态将使用配对检验（Wilcoxon）及线性/混合模型（重复测量或ANCOVA调整基线值）分析。术中变量对ΔCTC/ΔctDNA的影响将通过线性/混合模型估计；对复发/死亡风险的影响通过Cox/Fine-Gray模型分析，调整年龄、性别、分期、组织类型、分级（G3）、脏层胸膜侵犯、PD-L1、手术入路（开放/VATS/RATS）、切除范围及辅助治疗（可能按分期分层）。缺失数据将采用多重插补处理（MAR假设），并进行敏感性分析（如替代生物标志物阈值）。显著性阈值α=0.05双侧；将报告p值和95% CI；适当时进行多重比较校正（Benjamini-Hochberg）。使用R/Stata/SPSS进行分析。