Wgląd w rozpowszechnianie raka płuca (LUCID)

U pacjentów z resektowalnym NSCLC leczonych wyłącznie chirurgicznie lub z chirurgią jako częścią leczenia multimodalnego, poziomy CTC, ctDNA, STAS oraz mikroprzerzutów w węzłach chłonnych będą oceniane, aby sprawdzić, czy są one związane z wzorcami nawrotów i długoterminowymi wynikami.

Aby osiągnąć ten cel, obecność i liczba CTC oraz ctDNA będą analizowane z próbek krwi żylnej obwodowej pobranych w trzech punktach czasowych (przed i po operacji oraz podczas obserwacji). Ponadto, jako cele drugorzędne zostaną ocenione następujące aspekty:

1. Ocena zgodności transkryptomiki przestrzennej między komórkami nowotworowymi zlokalizowanymi w pierwotnym guzie płuca a tymi obecnymi w STAS i/lub przerzutach w węzłach chłonnych, a także różnic w profilu molekularnym między pierwotnymi komórkami guza płuca a krążącymi komórkami nowotworowymi.
2. Ilościowa ocena wpływu zmiennych śródoperacyjnych na uwalnianie CTC i ctDNA do krwiobiegu.

Główne zmienne śródoperacyjne to:

• Kolejność resekcji struktur wnęki płuca (np. żyła pierwsza vs. tętnica pierwsza).
• Techniki manipulacji płuc (chirurgia otwarta, VATS, RATS).
• Zakres resekcji (segmentektomia, lobektomia, pneumonektomia). CTC będą analizowane przy użyciu obecnego złotego standardu platformy CTC (system CellSearch, Menarini Silicon Biosystems, Włochy), podczas gdy ctDNA będzie oceniane za pomocą technologii sekwencjonowania nowej generacji (NGS) (platforma ILLUMINA).

Do oceny transkryptomiki przestrzennej, szkiełka barwione eozyną i hematoksyliną z pierwotnego guza oraz STAS i/lub przerzutów w węzłach chłonnych będą analizowane za pomocą platformy Xenium (10x Genomics, USA) w celu przestrzennego ilościowego określenia rodzajów mRNA przy użyciu panelu profilowania immuno-onkologicznego Xenium Human.

Dla punktów końcowych projektu, zmienne ciągłe będą opisane jako mediana (IQR) i porównane przy użyciu testów t-Studenta lub testów Manna-Whitneya; zmienne kategorialne będą opisane jako n (%) i porównane przy użyciu testów χ²/Fishera. OS i DFS będą szacowane przy użyciu metody Kaplana-Meiera, porównane za pomocą testów log-rank i analizowane przy użyciu wielowymiarowych modeli Coxa (weryfikacja założenia proporcjonalności; wyniki jako HR i 95% CI). Dla częstości występowania nawrotów z uwzględnieniem śmierci jako zdarzenia konkurencyjnego (DFI), użyjemy funkcji skumulowanej częstości i testów Graya; do analizy wielowymiarowej, model Fine-Graya (współczynnik ryzyka podhazardu, 95% CI). Związki między biomarkerami (CTC/ctDNA jako ciągłe i/lub dychotomiczne, np. CTC ≥1 komórka; VAF%/ng•mL) a wynikami zależnymi od czasu będą oceniane za pomocą Cox/Fine-Gray; prawdopodobieństwo STAS i mikroprzerzutów w węzłach chłonnych za pomocą regresji logistycznej. Dynamikę CTC/ctDNA przed/po/obserwacji przeanalizujemy za pomocą testów sparowanych (Wilcoxon) oraz modeli liniowych/mieszanych z powtarzanymi pomiarami lub ANCOVA z korektą dla wartości wyjściowych. Wpływ zmiennych śródoperacyjnych na ΔCTC/ΔctDNA zostanie oszacowany za pomocą modeli liniowych/mieszanych; na ryzyko nawrotu/zgonu za pomocą Cox/Fine-Gray, z korektą dla wieku, płci, stadium, histotypu, stopnia (G3), naciekania opłucnej trzewnej, PD-L1, dostępu (Open/VATS/RATS), zakresu resekcji i terapii adjuwantowych (z możliwą stratyfikacją według stadium). Brakujące dane będą traktowane za pomocą wielokrotnego imputowania (założenie MAR) i przeprowadzimy analizy wrażliwości (np. alternatywne progi biomarkerów). Próg istotności α = 0,05 dwustronny; wartości p i 95% CI będą raportowane; w miarę potrzeby, korekta dla wielokrotnych porównań (Benjamini-Hochberg). Analiza za pomocą R/Stata/SPSS.