Approfondimenti sulla Disseminazione del Cancro al Polmone (LUCID)

Nei pazienti con NSCLC resecabile trattati con sola chirurgia o con chirurgia come parte di un trattamento multimodale, verranno valutati i livelli di CTC, ctDNA, STAS e micrometastasi linfonodali per verificare se sono associati a pattern di recidiva e outcome a lungo termine.

Per raggiungere questo obiettivo, la presenza e la conta di CTC e ctDNA verranno analizzate da campioni di sangue venoso periferico raccolti in tre momenti (prima e dopo l'intervento chirurgico e durante il follow-up). Inoltre, i seguenti aspetti verranno valutati come obiettivi secondari:

1. Valutare la coerenza della trascrittomica spaziale tra le cellule tumorali localizzate nel tumore polmonare primario e quelle presenti nelle STAS e/o metastasi linfonodali, nonché le differenze nel profilo molecolare tra le cellule tumorali polmonari primarie e le cellule tumorali circolanti.
2. Quantificare l'impatto delle variabili intraoperatorie sul rilascio di CTC e ctDNA nel flusso sanguigno.

Le principali variabili intraoperatorie sono:

• La sequenza di resezione delle strutture ilari (ad esempio, vena prima vs. arteria prima).
• Tecniche di manipolazione polmonare (chirurgia aperta, VATS RATS).
• L'estensione della resezione (segmentectomia, lobectomia, pneumonectomia). Le CTC verranno analizzate utilizzando la piattaforma gold standard attuale (sistema CellSearch, Menarini Silicon Biosystems, Italia), mentre il ctDNA verrà valutato utilizzando la tecnologia Next Generation Sequencing (NGS) (piattaforma ILLUMINA).

Per la valutazione della trascrittomica spaziale, i vetrini colorati con eosina ed ematossilina del tumore primario e delle STAS e/o metastasi linfonodali verranno analizzati utilizzando la piattaforma Xenium (10x Genomics, USA) per quantificare spazialmente le specie di mRNA con il pannello di profilo Xenium Human Immuno-Oncology.

Per gli endpoint del progetto, le variabili continue saranno descritte come mediana (IQR) e confrontate utilizzando test t o test di Mann-Whitney; le variabili categoriche saranno descritte come n (%) e confrontate utilizzando test χ²/Fisher. OS e DFS saranno stimati utilizzando Kaplan-Meier, confrontati con test log-rank e analizzati con modelli di Cox multivariati (verifica dell'assunzione di proporzionalità; risultati come HR e 95% CI). Per l'incidenza di recidiva considerando la morte come evento competitivo (DFI), utilizzeremo funzioni di incidenza cumulativa e test di Gray; per l'analisi multivariata, il modello di Fine-Gray (sub-hazard ratio, 95% CI). Le associazioni tra biomarcatori (CTC/ctDNA come continui e/o dicotomizzati, ad esempio, CTC ≥1 cellula; VAF%/ng•mL) e outcome dipendenti dal tempo saranno valutate con Cox/Fine-Gray; la probabilità di STAS e micrometastasi linfonodali con regressione logistica. Le dinamiche di CTC/ctDNA pre-/post-/follow-up saranno analizzate utilizzando test appaiati (Wilcoxon) e modelli lineari/misti con misure ripetute o ANCOVA aggiustando per i valori basali. L'effetto delle variabili intraoperatorie su ΔCTC/ΔctDNA sarà stimato utilizzando modelli lineari/misti; sul rischio di recidiva/morte con Cox/Fine-Gray, aggiustando per età, sesso, stadio, istotipo, grado (G3), invasione pleurica viscerale, PD-L1, approccio (Open/VATS/RATS), estensione della resezione e terapie adiuvanti (con possibile stratificazione per stadio). I dati mancanti saranno trattati con imputazione multipla (assunzione MAR) e verranno eseguite analisi di sensibilità (ad esempio, soglie alternative per i biomarcatori). Soglia di significatività α = 0.05 a due code; verranno riportati p-value e 95% CI; quando appropriato, correzione per confronti multipli (Benjamini-Hochberg). Analisi con R/Stata/SPSS.