Pohledy na šíření rakoviny plic (LUCID)

U pacientů s resekovatelným NSCLC léčených pouze chirurgicky nebo s chirurgií jako součástí multimodální léčby budou hodnoceny hladiny CTC, ctDNA, STAS a mikrometastáz v lymfatických uzlinách, aby se zjistilo, zda jsou spojeny s vzory recidivy a dlouhodobými výsledky.

K dosažení tohoto cíle bude přítomnost a počet CTC a ctDNA analyzována z periferních venózních vzorků krve odebraných ve třech časových bodech (před a po operaci a během sledování). Kromě toho budou jako sekundární cíle hodnoceny následující aspekty:

1. Vyhodnotit konzistenci prostorové transkriptomiky mezi nádorovými buňkami umístěnými v primárním plicním nádoru a těmi přítomnými v STAS a/nebo metastázách lymfatických uzlin, stejně jako rozdíly v molekulárním profilu mezi primárními plicními nádorovými buňkami a cirkulujícími nádorovými buňkami.
2. Kvantifikovat vliv intraoperačních proměnných na uvolňování CTC a ctDNA do krevního řečiště.

Hlavní intraoperační proměnné jsou:

• Pořadí resekce hilárních struktur (např. žíla první vs. tepna první).
• Techniky manipulace s plícemi (otevřená chirurgie, VATS RATS).
• Rozsah resekce (segmentektomie, lobektomie, pneumonektomie). CTC budou analyzovány pomocí současné zlaté standardní platformy CTC (CellSearch systém, Menarini Silicon Biosystems, Itálie), zatímco ctDNA bude hodnocena pomocí technologie Next Generation Sequencing (NGS) (platforma ILLUMINA).

Pro hodnocení prostorové transkriptomiky budou eosinem a hematoxylinem barvené řezy primárního nádoru a STAS a/nebo metastáz lymfatických uzlin analyzovány pomocí platformy Xenium (10x Genomics, USA) pro prostorové kvantifikování druhů mRNA s panelem Xenium Human Immuno-Oncology profiling.

Pro projektové koncové body budou spojité proměnné popsány jako medián (IQR) a porovnány pomocí t-testů nebo Mann-Whitney testů; kategorické proměnné budou popsány jako n (%) a porovnány pomocí χ²/Fisherových testů. OS a DFS budou odhadnuty pomocí Kaplan-Meierovy metody, porovnány pomocí log-rank testů a analyzovány pomocí multivariačních Coxových modelů (ověření předpokladu proporcionality; výsledky jako HR a 95% CI). Pro incidenci recidivy s uvažováním smrti jako konkurenční události (DFI) použijeme funkce kumulativní incidence a Grayovy testy; pro multivariační analýzu Fine-Grayův model (sub-hazard ratio, 95% CI). Asociace mezi biomarkery (CTC/ctDNA jako spojité a/nebo dichotomizované, např. CTC ≥1 buňka; VAF%/ng•mL) a časově závislými výsledky budou hodnoceny pomocí Coxova/Fine-Grayova modelu; pravděpodobnost STAS a mikrometastáz lymfatických uzlin pomocí logistické regrese. Dynamika CTC/ctDNA před/po/sledování bude analyzována pomocí párových testů (Wilcoxon) a lineárních/smíšených modelů s opakovanými měřeními nebo ANCOVA s úpravou pro základní hodnoty. Vliv intraoperačních proměnných na ΔCTC/ΔctDNA bude odhadnut pomocí lineárních/smíšených modelů; na riziko recidivy/smrti pomocí Coxova/Fine-Grayova modelu, s úpravou pro věk, pohlaví, stadium, histotyp, grade (G3), viscerální pleurální invazi, PD-L1, přístup (Open/VATS/RATS), rozsah resekce a adjuvantní terapie (s možnou stratifikací podle stadia). Chybějící data budou zpracována pomocí vícenásobné imputace (předpoklad MAR) a budou provedeny analýzy citlivosti (např. alternativní prahové hodnoty biomarkerů). Prahová hodnota významnosti α = 0,05 oboustranně; budou uvedeny p-hodnoty a 95% CI; pokud je to vhodné, korekce pro vícenásobná porovnání (Benjamini-Hochberg). Analýza pomocí R/Stata/SPSS.