Novorozenecká sepse Diagnóza: ; PCR komerční technika a krevní kultura

Novorozenecká sepse zůstává jednou z hlavních příčin morbidity a úmrtnosti jak u donošených, tak u předčasně narozených dětí. Ačkoli pokroky v neonatální péči zlepšily přežití a snížily komplikace u předčasně narozených dětí, sepse stále významně přispívá k úmrtnosti a na jednotkách intenzivní péče pro novorozence (NICU). zejména pro velmi nízkou porodní hmotnost (VLBW, <1500 g) a extrémně nízkou porodní hmotnost (ELBW, <1000g). Známky a příznaky novorozenecké sepse jsou nespecifické. Patří mezi ně horečka nebo hypotermie, respirační tíseň včetně cyanózy a apnoe, potíže s příjmem potravy, letargie nebo podrážděnost, hypotonie, záchvaty, vypouklý fontanel... Na základě načasování infekce byla novorozenecká sepse klasifikována na sepsi s časným nástupem (EOS) a pozdní sepse (LOS), s rozdíly ve způsobu přenosu a převládajícími organismy. EOS je definován jako nástup v prvních 3 dnech života obecně v důsledku vertikálního přenosu bakterií z matek na kojence během intrapartálního období. LOS se objevuje po 3 dnech života a je připisován patogenům získaným postnatálně (horizontální přenos). Epidemiologie novorozenecké sepse se mění, nicméně zvyšující se výskyt sepse EOS Escherichia coli, zejména u předčasně narozených dětí, a Streptococcus skupiny B (GBS), zejména S. agalactiae, má za následek 70 % odpovědných mikroorganismů, Ve studii na 6215 kojencích přijatých do center sítě novorozeneckého výzkumu (NRN) National Institute of Child Health and Human Development (NICHD) bylo 70 % infekcí první epizody s pozdním nástupem způsobeno grampozitivními organismy, přičemž koaguláza-negativní stafylokoky byly zahrnuty. u 48 % infekcí. Vezmeme-li v úvahu obecně neonatální sepsi v Evropě, 90 % odpovědných bakterií bylo: Streptococcus agalactiae, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, e Listeria monocytogenes. Diagnóza novorozenecké sepse je obtížná, protože klinické příznaky, zejména v časném průběhu onemocnění, jsou jemné a nespecifické a laboratorní testy a hemokultury nejsou vždy spolehlivé, navíc hemokultura ("zlatý standard) trvá 48-72 hodin nebo více pro výsledek. Kultivační metoda ve skutečnosti vykazuje řadu slabých míst: vyžaduje přítomnost živých a vitálních zárodků, závisí na objemu odebraného vzorku – vážný problém v novorozenecké populaci –, na zpracování vzorku je potřeba několik hodin, což může mít za následek falešně negativní u subjektů podstupujících souběžnou léčbu antibiotiky nebo falešně pozitivní výsledek může být nalezen kontaminací. Metody založené na molekulární biologii nevyžadují živé zárodky, a proto se nevyznačují omezeními citlivosti, která jsou typická pro kulturní metody. Z tohoto důvodu mohou být tyto metody extrémně účinné u pacientů, kteří již byli léčeni antibiotiky a nejsou ovlivněni rychlým transportem (do té míry, že vzorky mohou být skladovány při pokojové teplotě i několik dní) a konečně , nevyžadují žádné kultivační médium.

V této studii, když dítě musí podstoupit vzorek krve pro kultivaci bakterií k ověření možné sepse, je současně zpracována zbytková krev (200 µl) pomocí soupravy založené na molekulární biologii. Tato souprava je navržena tak, aby dosáhla nejvyšší citlivosti a specifičnosti při stanovení většiny invazivních bakteriálních onemocnění (meningitida, sepse, pneumonie atd.) postihujících donošené předčasně narozené děti ke stanovení jakékoli přítomnosti bakteriální DNA patřící všem sérotypům Klebsiella pneumoniae , Escherichia coli, Streptococcus agalactiae a Listeria monocytogenes Cílové bakterie byly vybrány na základě aktuálního italského epidemiologického kontextu tak, aby zahrnovaly zárodky způsobující asi 90 % případů meningitidy/sepse v populaci novorozenců. Detekční systém dokáže neomylně identifikovat choroboplodný zárodek, proti kterému je namířen, aniž by způsoboval jakoukoli zkříženou reakci s jinými zárodky nebo lidskou DNA.

Výsledky získané touto metodou prokázaly 100% specificitu (žádný falešně pozitivní výsledek). Citlivost této metody ve srovnání s kultivační metodou se ukázala být dvakrát vyšší.

Cílem této studie je porovnat účinnost hemokultivační metody a kitu pro molekulární detekci bakteriální DNA (všech sérotypů Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Streptococcus agalactiae a Listeria monocytogenes) s ohledem na relevantní epidemiologii našeho JIP, v za účelem ověření relativní frekvence novorozenecké sepse (EOS a LOS) způsobené cílovými bakteriemi na celé frekvenci bakterií odpovědných za všechny sepse na našem oddělení.

Odhadovaná doba pozorování pro sběr 100 měřitelných vzorků je 18 měsíců od začátku zápisu.

Vzorky odpovídají zapsání termínu předčasně narozených novorozenců, kteří potřebovali odběr krve pro podezření na sepsi, které jsou zpracovány oběma metodami.