Неонатальный сепсис Диагноз: ; Коммерческий метод ПЦР и посев крови

Неонатальный сепсис остается одной из ведущих причин заболеваемости и смертности как доношенных, так и недоношенных детей. Хотя достижения в области ухода за новорожденными улучшили выживаемость и уменьшили количество осложнений у недоношенных детей, сепсис по-прежнему вносит значительный вклад в смертность и в отделения интенсивной терапии новорожденных (ОИТН). особенно для детей с очень низкой массой тела при рождении (ОНМТ, <1500 г) и экстремально низкой массой тела при рождении (ЭНМТ, <1000 г). Признаки и симптомы неонатального сепсиса неспецифичны. К ним относятся лихорадка или гипотермия, респираторный дистресс, включая цианоз и апноэ, трудности с кормлением, вялость или раздражительность, гипотония, судороги, выпячивание родничка... В зависимости от времени заражения сепсис новорожденных классифицируют на сепсис с ранним началом (EOS) и сепсис новорожденных. сепсис с поздним началом (LOS) с различными путями передачи и преобладающими микроорганизмами. EOS определяется как начало в первые 3 дня жизни, как правило, из-за вертикальной передачи бактерий от матери к ребенку во время интранатального периода. LOS возникает после 3 дней жизни и приписывается возбудителям, приобретенным постнатально (горизонтальная передача). Эпидемиология сепсиса новорожденных представляет собой меняющийся ландшафт, тем не менее растущие показатели EOS сепсиса Escherichia coli, особенно среди недоношенных детей, и Streptococcus группы B (GBS), в частности S. agalactiae, - привели к тому, что 70% ответственных микроорганизмов, В исследовании с участием 6215 младенцев, поступивших в центры сети неонатальных исследований (NRN) Национального института здоровья ребенка и развития человека (NICHD), 70% первых эпизодов инфекций с поздним началом были вызваны грамположительными микроорганизмами с учетом коагулазонегативных стафилококков. на 48% случаев заражения. Учитывая общий неонатальный сепсис в Европе, 90% ответственных бактерий оказались: Streptococcus agalactiae, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, e Listeria monocytogenes. Диагноз неонатального сепсиса затруднен, поскольку клинические признаки, особенно на ранних стадиях заболевания, малозаметны и неспецифичны, а лабораторные анализы и посев крови не всегда надежны, более того, посев крови («золотой стандарт») занимает 48–72 часа. или больше для результата. На самом деле культуральный метод имеет ряд слабых мест: он требует присутствия живых и жизнеспособных микробов, зависит от объема собранного образца - серьезная проблема в неонатальной популяции - для обработки образца требуется несколько часов, что может привести к ложноотрицательный результат у субъектов, проходящих сопутствующее лечение антибиотиками, или ложноположительный результат может быть обнаружен при заражении. Методы, основанные на молекулярной биологии, не требуют живых микробов и, следовательно, не характеризуются ограничениями чувствительности, характерными для культуральных методов. По этой причине такие методы могут оказаться чрезвычайно эффективными у пациентов, которые уже получали антибактериальную терапию и не подвержены быстрой транспортировке (настолько, что образцы могут храниться при комнатной температуре даже в течение нескольких дней) и, наконец, , не требуют никакой питательной среды.

В настоящем исследовании, когда у младенца должен быть взят образец крови для посева бактерий для подтверждения возможного сепсиса, остаточная кровь (200 мкл) обрабатывается одновременно с использованием набора, основанного на молекулярной биологии. Этот набор предназначен для получения максимальной чувствительности и специфичности при определении большинства инвазивных бактериальных заболеваний (менингит, сепсис, пневмония и т. д.), поражающих доношенных и недоношенных детей, для определения любого присутствия бактериальной ДНК, принадлежащей ко всем серотипам Klebsiella pneumoniae. , Escherichia coli, Streptococcus agalactiae и Listeria monocytogenes Целевые бактерии были выбраны на основе текущего эпидемиологического контекста в Италии, чтобы включить микробы, вызывающие около 90% случаев менингита/сепсиса среди новорожденных. Система обнаружения может безошибочно идентифицировать микроорганизм, против которого она направлена, не вызывая перекрестной реакции с другими микроорганизмами или ДНК человека.

Результаты, полученные этим методом, продемонстрировали 100% специфичность (отсутствие ложноположительных результатов). Чувствительность этого метода по сравнению с культуральным методом оказалась вдвое выше.

Целью настоящего исследования является сравнение эффективности метода посева крови и набора для молекулярного обнаружения ДНК бактерий (всех серотипов Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Streptococcus agalactiae и Listeria monocytogenes) с учетом соответствующей эпидемиологии нашего отделения интенсивной терапии, в чтобы проверить относительную частоту неонатального сепсиса (EOS и LOS), вызванного бактериями-мишенями, по отношению к общей частоте бактерий, ответственных за все случаи сепсиса в нашем отделении.

Расчетный период наблюдения для сбора 100 поддающихся измерению образцов составляет 18 месяцев с начала набора.

Образцы соответствуют набору доношенных или недоношенных новорожденных, нуждавшихся в заборе крови для подозрения на сепсис, которые обрабатываются обоими способами.