新生儿败血症诊断：； PCR商业技术和血培养

新生儿败血症仍然是足月儿和早产儿发病率和死亡率的主要原因之一。 尽管新生儿护理的进步提高了早产儿的存活率并减少了并发症，但败血症仍然对死亡率和新生儿重症监护病房 (NICU) 的死亡率有显着影响。 特别是对于极低出生体重（VLBW，<1500 g）和极低出生体重（ELBW，<1000g）。新生儿败血症的体征和症状是非特异性的。 这些包括发烧或体温过低、包括发绀和呼吸暂停在内的呼吸窘迫、喂养困难、嗜睡或易怒、肌张力减退、癫痫发作、囟门膨出……根据感染的时间，新生儿败血症已分为早发性败血症 (EOS) 和迟发性败血症 (LOS)，在传播方式和主要生物体方面存在差异。 EOS 定义为出生后头 3 天内发病，通常是由于分娩期间细菌从母亲垂直传播给婴儿。 LOS 发生在出生 3 天后，归因于出生后获得的病原体（水平传播）。 新生儿败血症的流行病学正在发生变化，但 EOS 大肠杆菌败血症（尤其是早产儿）和 B 组链球菌（GBS）（尤其是无乳链球菌）的发病率不断上升——导致 70% 的致病微生物，在一项针对国立儿童健康与人类发展研究所 (NICHD) 新生儿研究网络 (NRN) 中心收治的 6215 名婴儿的研究中，70% 的首发迟发性感染是由革兰氏阳性菌引起的，其中凝固酶阴性葡萄球菌占占 48% 的感染。 考虑到欧洲普遍存在的新生儿败血症，90% 的致病菌是：无乳链球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、单核细胞增生李斯特菌。 新生儿败血症的诊断很困难，因为临床症状，特别是在病程早期，是微妙的和非特异性的，实验室检查和血培养并不总是可靠的，而且血培养（“金标准”）需要 48-72 小时或更多的结果。 事实上，培养方法显示出许多弱点：它需要存在活的和有活力的细菌，它取决于所收集样本的体积——新生儿群体中的严重问题——需要几个小时来处理样本，可能导致在接受伴随抗生素治疗的受试者中出现假阴性，或者通过污染可以发现假阳性结果。 基于分子生物学的方法不需要活细菌，因此不具有培养方法典型的敏感性限制。 出于这个原因，这些方法对已经接受抗生素治疗的患者非常有效，并且不受快速运输的影响（以至于样本可以在室温下储存几天），最后， , 不需要任何培养基。

在本研究中，当婴儿必须接受血液样本进行细菌培养以验证可能的败血症时，使用基于分子生物学的试剂盒同时处理残留血液（200μl）。 该试剂盒旨在获得最高灵敏度和特异性，用于确定影响足月和早产儿的大多数侵袭性细菌性疾病（脑膜炎、败血症、肺炎等），以确定是否存在属于肺炎克雷伯氏菌所有血清型的细菌 DNA 、大肠杆菌、无乳链球菌和单核细胞增生李斯特氏菌 目标细菌是根据意大利当前的流行病学背景选择的，以便包括在新生儿人群中引起约 90% 的脑膜炎/败血症病例的细菌。 该检测系统可以准确无误地识别其所针对的细菌，并且不会与其他细菌或人类 DNA 发生任何交叉反应。

用这种方法获得的结果证明了 100% 的特异性（没有假阳性结果）。 事实证明，这种方法的灵敏度比培养方法高一倍。

本研究的目的是比较血培养方法和细菌 DNA 分子检测试剂盒（肺炎克雷伯菌、大肠杆菌、无乳链球菌和单核细胞增生李斯特菌的所有血清型）的有效性，同时考虑到我们 NICU 的相关流行病学，在为了验证由目标细菌引起的新生儿败血症（EOS 和 LOS）相对于我们病房所有败血症的细菌频率的相对频率。

收集 100 个可测量样本的观察估计期为从登记开始起 18 个月。

样本对应于需要为败血症嫌疑人抽血的足月早产新生儿的登记，其由两种方法处理。