Rozpoznanie sepsy u noworodków: ; Komercyjna technika PCR i posiew krwi

Posocznica noworodków pozostaje jedną z głównych przyczyn zachorowalności i śmiertelności zarówno wśród noworodków, jak i wcześniaków. Chociaż postęp w opiece neonatologicznej poprawił przeżywalność i zmniejszył liczbę powikłań u wcześniaków, posocznica nadal znacząco przyczynia się do śmiertelności i na oddziałach intensywnej terapii noworodków (NICU). szczególnie w przypadku bardzo małej masy urodzeniowej (VLBW, <1500 g) i skrajnie niskiej masy urodzeniowej (ELBW, <1000 g). Oznaki i objawy posocznicy noworodków są niespecyficzne. Obejmują one gorączkę lub hipotermię, zaburzenia oddychania, w tym sinicę i bezdech, trudności w karmieniu, letarg lub drażliwość, hipotonię, drgawki, wypukłe ciemiączko... Na podstawie czasu zakażenia posocznicę noworodków sklasyfikowano jako posocznicę o wczesnym początku (EOS) i sepsa o późnym początku (LOS), z różnicami w sposobie przenoszenia i dominującymi organizmami. EOS definiuje się jako początek w pierwszych 3 dniach życia, zwykle spowodowany wertykalnym przeniesieniem bakterii z matki na niemowlę w okresie śródporodowym. LOS występuje po 3 dniach życia i jest przypisywany patogenom nabytym po urodzeniu (transmisja pozioma). Epidemiologia sepsy noworodków zmienia się, niemniej jednak wzrastająca częstość EOS Escherichia coli sepsa, szczególnie wśród wcześniaków, oraz Streptococcus grupy B (GBS), w szczególności S. agalactiae, - spowodowała, że ​​70% odpowiedzialnych mikroorganizmów, W badaniu przeprowadzonym na 6215 niemowlętach przyjętych do ośrodków Sieci Badań nad Neonatami (KSOW) Narodowego Instytutu Zdrowia Dziecka i Rozwoju Człowieka (NICHD) 70% zakażeń o późnym początku pierwszego epizodu było spowodowanych przez organizmy Gram-dodatnie, z gronkowcami koagulazo-ujemnymi za 48% zakażeń. Biorąc pod uwagę posocznicę noworodków w Europie, 90% odpowiedzialnych bakterii to: Streptococcus agalactiae, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Listeria monocytogenes. Rozpoznanie sepsy u noworodków jest trudne, ponieważ objawy kliniczne, zwłaszcza we wczesnym okresie choroby, są subtelne i niespecyficzne, a badania laboratoryjne i posiew krwi nie zawsze są wiarygodne, ponadto posiew krwi („złoty standard”) trwa 48-72 godzin lub więcej dla wyniku. W rzeczywistości metoda hodowlana ma kilka słabych punktów: wymaga obecności żywych i żywotnych drobnoustrojów, jest uzależniona od objętości pobranej próbki – poważny problem w populacji noworodków –, na przetworzenie próbki potrzeba kilku godzin, co może skutkować wyniki fałszywie ujemne u osób poddawanych jednoczesnemu leczeniu antybiotykami lub wyniki fałszywie dodatnie można znaleźć na podstawie kontaminacji. Metody oparte na biologii molekularnej nie wymagają obecności żywych zarazków, a zatem nie charakteryzują się ograniczeniami czułości charakterystycznymi dla metod kulturowych. Z tego powodu metody te mogą okazać się niezwykle skuteczne u pacjentów, którzy przeszli już antybiotykoterapię i nie mają wpływu na szybki transport (do tego stopnia, że ​​próbki można przechowywać w temperaturze pokojowej nawet przez kilka dni), a wreszcie , nie wymagają żadnej pożywki hodowlanej.

W niniejszym badaniu, gdy niemowlę musi przejść próbkę krwi do hodowli bakteryjnej w celu zweryfikowania możliwej posocznicy, w tym samym czasie przetwarza się resztkową krew (200 µl) przy użyciu zestawu opartego na biologii molekularnej. Zestaw ten został zaprojektowany w celu uzyskania najwyższej czułości i swoistości w oznaczaniu większości inwazyjnych chorób bakteryjnych (zapalenie opon mózgowych, posocznica, zapalenie płuc itp.) dotykających wcześniaków urodzonych o czasie w celu określenia obecności DNA bakteryjnego należącego do wszystkich serotypów Klebsiella pneumoniae , Escherichia coli, Streptococcus agalactiae i Listeria monocytogenes Docelowe bakterie zostały wybrane na podstawie aktualnego włoskiego kontekstu epidemiologicznego, tak aby obejmowały zarazki powodujące około 90% przypadków zapalenia opon mózgowo-rdzeniowych/posocznicy wśród noworodków. System wykrywania może bezbłędnie zidentyfikować zarazek, przeciwko któremu jest skierowany, bez powodowania reakcji krzyżowej z innymi zarazkami lub ludzkim DNA.

Wyniki uzyskane tą metodą wykazały 100% specyficzność (brak wyników fałszywie dodatnich). Czułość tej metody w porównaniu z metodą kulturową okazała się dwukrotnie większa.

Celem niniejszej pracy jest porównanie skuteczności metody posiewu krwi i zestawu do molekularnego wykrywania DNA bakterii (wszystkie serotypy Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Streptococcus agalactiae i Listeria monocytogenes) z uwzględnieniem epidemiologii naszego OIOM-u, w w celu zweryfikowania względnej częstości występowania sepsy u noworodków (EOS i LOS) wywołanej przez bakterie docelowe na całej częstości bakterii odpowiedzialnych za wszystkie sepsy na naszym oddziale.

Szacunkowy okres obserwacji do zebrania 100 mierzalnych próbek wynosi 18 miesięcy od rozpoczęcia rejestracji.

Próbki odpowiadają rejestracji noworodków urodzonych o czasie, które wymagały pobrania krwi z powodu podejrzenia sepsy, które są przetwarzane przez obie metody.