Vastasyntyneen sepsiksen diagnoosi: ; Kaupallinen PCR-tekniikka ja veriviljely

Vastasyntyneiden sepsis on edelleen yksi johtavista sairastuvuuden ja kuolleisuuden syistä sekä keskeneräisten että keskosten keskuudessa. Vaikka vastasyntyneiden hoidon edistyminen on parantanut selviytymistä ja vähentänyt komplikaatioita keskosilla, sepsis vaikuttaa edelleen merkittävästi kuolleisuuteen ja vastasyntyneiden tehohoitoyksiköissä (NICU). erityisesti erittäin matalan syntymäpainon (VLBW, <1500 g) ja erittäin alhaisen syntymäpainon (ELBW, <1000g) kohdalla. Vastasyntyneen sepsiksen merkit ja oireet ovat epäspesifisiä. Näitä ovat kuume tai hypotermia, hengitysvaikeudet mukaan lukien syanoosi ja apnea, ruokintavaikeudet, letargia tai ärtyneisyys, hypotonia, kohtaukset, pullistuva fontanel... Infektion ajoituksen perusteella vastasyntyneen sepsis on luokiteltu varhaisen alkavaan sepsikseen (EOS) ja myöhään alkava sepsis (LOS), johon liittyy eroja tarttumistavassa ja vallitsevissa organismeissa. EOS määritellään alkavaksi kolmen ensimmäisen elämänpäivän aikana, mikä johtuu yleensä bakteerien vertikaalisesta siirtymisestä äideiltä vauvoille synnytyksen aikana. LOS ilmaantuu 3 päivän jälkeen, ja se johtuu synnytyksen jälkeen hankituista patogeeneistä (horisontaalinen leviäminen). Vastasyntyneiden sepsiksen epidemiologia on muuttuva maisema, kuitenkin EOS Escherichia coli -sepsiksen lisääntyminen etenkin keskosten keskuudessa ja Streptococcus Group B (GBS), erityisesti S. agalactiae, - tuloksena 70 % vastuullisista mikro-organismeista. Tutkimuksessa, joka koski 6 215 vauvaa, jotka otettiin National Institute of Child Health and Human Developmentin (NICHD) vastasyntyneiden tutkimusverkoston (NRN) keskuksiin, 70 % ensimmäisistä myöhään alkaneista infektioista johtui grampositiivisista organismeista, ja koagulaasinegatiiviset stafylokokit laskevat. 48 %:lla tartunnoista. Kun otetaan huomioon yleisesti vastasyntyneiden sepsis Euroopassa, 90 % vastuullisista bakteereista johtui: Streptococcus agalactiae, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae ja Listeria monocytogenes. Vastasyntyneen sepsiksen diagnoosi on vaikeaa, koska kliiniset oireet, erityisesti taudin varhaisessa vaiheessa, ovat hienovaraisia ​​ja epäspesifisiä, eivätkä laboratoriotutkimukset ja veriviljely ole aina luotettavia, ja lisäksi veriviljely ("kultastandardi") kestää 48-72 tuntia. tai enemmän tulokseksi. Itse asiassa kulttuurimenetelmällä on useita heikkoja kohtia: se edellyttää elävien ja elintärkeiden bakteerien läsnäoloa, se riippuu kerätyn näytteen tilavuudesta - vakava ongelma vastasyntyneiden populaatiossa -, näytteen käsittelyyn tarvitaan useita tunteja, mikä saattaa johtaa Väärin negatiivinen tulos samanaikaista antibioottihoitoa saavilla koehenkilöillä tai väärä positiivinen tulos voidaan löytää kontaminaatiosta. Molekyylibiologiaan perustuvat menetelmät eivät vaadi eläviä bakteereita, joten niille ei ole ominaista kulttuurimenetelmille tyypilliset herkkyysrajoitukset. Tästä syystä tällaiset menetelmät voivat olla erittäin tehokkaita potilailla, jotka ovat jo saaneet antibioottihoidon ja joihin nopea kuljetus ei vaikuta (niin paljon, että näytteitä voidaan säilyttää huoneenlämmössä jopa muutaman päivän) ja lopuksi , eivät vaadi viljelyalustaa.

Tässä tutkimuksessa, kun vauvalle on otettava verinäyte bakteeriviljelyä varten mahdollisen sepsiksen todentamiseksi, jäännösverta (200 µl) käsitellään samaan aikaan käyttämällä molekyylibiologiaan perustuvaa pakkausta. Tämä pakkaus on suunniteltu saavuttamaan suurin herkkyys ja spesifisyys useimpien täysiaikaisten, keskosten syntyneiden invasiivisten bakteerisairauksien (meningiitti, sepsis, keuhkokuume jne.) määrittämisessä, jotta voidaan määrittää Klebsiella pneumoniaen kaikkiin serotyyppeihin kuuluvan bakteeri-DNA:n esiintyminen. , Escherichia coli, Streptococcus agalactiae ja Listeria monocytogenes Kohdebakteerit on valittu tämänhetkisen Italian epidemiologisen kontekstin perusteella siten, että mukaan on otettu bakteereita, jotka aiheuttavat noin 90 % vastasyntyneiden aivokalvontulehdus/sepsistapauksista. Havaitsemisjärjestelmä voi erehtymättä tunnistaa bakteerin, jota vastaan ​​se on suunnattu, aiheuttamatta ristireaktiota muiden bakteerien tai ihmisen DNA:n kanssa.

Tällä menetelmällä saadut tulokset ovat osoittaneet 100 %:n spesifisyyden (ei vääriä positiivisia tuloksia). Tämän menetelmän herkkyys verrattuna kulttuurimenetelmään on osoittautunut kaksi kertaa korkeammaksi.

Tämän tutkimuksen tavoitteena on verrata veriviljelymenetelmän ja bakteeri-DNA:n (kaikki Klebsiella pneumoniaen, Escherichia colin, Streptococcus agalactiaen ja Listeria monocytogenesin serotyypit) molekyylidetektioin käytettävän veriviljelymenetelmän tehokkuutta NICU:n relevantti epidemiologia huomioon ottaen. jotta voidaan varmistaa kohdebakteerien aiheuttaman vastasyntyneiden sepsiksen (EOS ja LOS) suhteellinen esiintymistiheys osastollamme kaikista sepsiksistä vastuussa olevien bakteerien koko taajuudella.

Havainnoinnin arvioitu aika kerätä 100 mitattavaa näytettä on 18 kuukautta ilmoittautumisen alkamisesta.

Näytteet vastaavat sellaisten keskosten rekisteröintiä, jotka tarvitsivat verenpoistoa sepsisepäillyn vuoksi. Näytteet käsitellään molemmilla tavoilla.