Neugeborenen-Sepsis-Diagnose: ; Kommerzielle PCR-Technik und Blutkultur

Neonatale Sepsis bleibt eine der Hauptursachen für Morbidität und Mortalität sowohl bei termingerechten als auch bei Frühgeborenen. Obwohl Fortschritte in der Neugeborenenversorgung das Überleben verbessert und Komplikationen bei Frühgeborenen verringert haben, trägt die Sepsis immer noch erheblich zur Sterblichkeit und auf Neugeborenen-Intensivstationen (NICUs) bei insbesondere bei sehr niedrigem Geburtsgewicht (VLBW, < 1500 g) und extrem niedrigem Geburtsgewicht (ELBW, < 1000 g). Die Anzeichen und Symptome einer neonatalen Sepsis sind unspezifisch. Dazu gehören Fieber oder Hypothermie, Atemnot einschließlich Zyanose und Apnoe, Ernährungsschwierigkeiten, Lethargie oder Reizbarkeit, Muskelhypotonie, Krampfanfälle, hervorquellende Fontanelle... Basierend auf dem Zeitpunkt der Infektion wurde die neonatale Sepsis in Early-Onset-Sepsis (EOS) und Late-Onset-Sepsis (LOS), mit Unterschieden in der Übertragungsart und den vorherrschenden Organismen. EOS ist definiert als Beginn in den ersten 3 Lebenstagen im Allgemeinen aufgrund einer vertikalen Übertragung von Bakterien von Müttern auf Säuglinge während der intrapartalen Phase. LOS tritt nach 3 Lebenstagen auf und wird auf postnatal erworbene Erreger zurückgeführt (horizontale Übertragung). Die Epidemiologie der Neonatal-Sepsis ist eine sich verändernde Landschaft, dennoch sind zunehmende Raten von EOS Escherichia coli-Sepsis, insbesondere bei Frühgeborenen, und Streptococcus-Gruppe B (GBS), insbesondere S. agalactiae, – die 70 % der verantwortlichen Mikroorganismen ausmachen, In einer Studie an 6215 Säuglingen, die in Zentren des Neonatal Research Network (NRN) des National Institute of Child Health and Human Development (NICHD) aufgenommen wurden, wurden 70 % der Spätinfektionen der ersten Episode durch grampositive Organismen verursacht, wobei Koagulase-negative Staphylokokken berücksichtigt wurden für 48 % der Infektionen. Betrachtet man die allgemeine neonatale Sepsis in Europa, so waren 90 % der verantwortlichen Bakterien: Streptococcus agalactiae, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae und Listeria monocytogenes. Die Diagnose einer neonatalen Sepsis ist schwierig, da die klinischen Anzeichen, insbesondere im frühen Krankheitsverlauf, subtil und unspezifisch sind und Labortests und Blutkulturen nicht immer zuverlässig sind, außerdem dauert die Blutkultur (der „Goldstandard“) 48–72 Stunden oder mehr für das Ergebnis. Tatsächlich weist die Kulturmethode eine Reihe von Schwachstellen auf: Sie erfordert das Vorhandensein lebender und vitaler Keime, sie hängt von der Menge der gesammelten Probe ab - ernstes Problem bei neonatalen Populationen -, es werden mehrere Stunden benötigt, um die Probe zu verarbeiten, was möglicherweise daraus resultiert falsch-negativ bei Patienten, die sich gleichzeitig einer antibiotischen Behandlung unterziehen, oder ein falsch-positives Ergebnis kann durch Kontamination gefunden werden. Die molekularbiologischen Verfahren kommen ohne lebende Keime aus und sind daher nicht durch die für kulturelle Verfahren typischen Empfindlichkeitseinschränkungen gekennzeichnet. Aus diesem Grund können sich solche Verfahren als äußerst effektiv bei Patienten erweisen, die bereits eine Antibiotikatherapie erhalten haben und durch einen schnellen Transport nicht beeinträchtigt werden (so sehr, dass Proben sogar für einige Tage bei Raumtemperatur gelagert werden können) und schließlich , benötigen kein Nährmedium.

Wenn in der vorliegenden Studie ein Säugling einer Blutprobe für eine Bakterienkultur unterzogen werden muss, um eine mögliche Sepsis zu verifizieren, wird gleichzeitig ein Restblut (200 µl) unter Verwendung eines auf Molekularbiologie basierenden Kits verarbeitet. Dieses Kit wurde entwickelt, um die höchste Sensitivität und Spezifität bei der Bestimmung der meisten invasiven bakteriellen Erkrankungen (Meningitis, Sepsis, Pneumonie usw.) zu erreichen, die termingeborene Frühgeborene betreffen, um das Vorhandensein von bakterieller DNA aller Serotypen von Klebsiella pneumoniae zu bestimmen , Escherichia coli, Streptococcus agalactiae und Listeria monocytogenes Die Zielbakterien wurden auf der Grundlage des aktuellen italienischen epidemiologischen Kontexts ausgewählt, um Keime einzuschließen, die etwa 90 % der Fälle von Meningitis/Sepsis in der Neugeborenenpopulation verursachen. Das Nachweissystem kann den Keim, gegen den es gerichtet ist, zweifelsfrei identifizieren, ohne dass es zu Kreuzreaktionen mit anderen Keimen oder menschlicher DNA kommt.

Die mit dieser Methode erhaltenen Ergebnisse haben eine 100%ige Spezifität gezeigt (kein falsch positives Ergebnis). Die Sensitivität dieser Methode hat sich im Vergleich zur Kulturmethode als doppelt so hoch herausgestellt.

Das Ziel der vorliegenden Studie ist es, die Wirksamkeit der Blutkulturmethode und des Kits zum molekularen Nachweis von bakterieller DNA (alle Serotypen von Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Streptococcus agalactiae und Listeria monocytogenes) unter Berücksichtigung der relevanten Epidemiologie unserer neonatologischen Intensivstation zu vergleichen um die relative Häufigkeit der neonatalen Sepsis (EOS und LOS), die durch die Zielbakterien verursacht wird, auf die Gesamthäufigkeit der Bakterien zu überprüfen, die für alle Sepsis auf unserer Station verantwortlich sind.

Der geschätzte Beobachtungszeitraum zum Sammeln von 100 messbaren Proben beträgt 18 Monate ab Beginn der Registrierung.

Die Proben entsprechen der Rekrutierung von Frühgeborenen oder Frühgeborenen, die eine Blutentnahme für einen Sepsisverdächtigen benötigten, die von beiden Methoden verarbeitet werden.