Sepsis Neonatal Diagnóstico: ; Técnica Comercial PCR y Hemocultivo

La sepsis neonatal sigue siendo una de las principales causas de morbilidad y mortalidad entre los recién nacidos a término y prematuros. Aunque los avances en la atención neonatal han mejorado la supervivencia y reducido las complicaciones en los recién nacidos prematuros, la sepsis sigue contribuyendo significativamente a la mortalidad y en las Unidades de Cuidados Intensivos Neonatales (UCIN). particular para muy bajo peso al nacer (MBPN, <1500 g) y extremadamente bajo peso al nacer (ELBW, <1000 g). Los signos y síntomas de la sepsis neonatal son inespecíficos. Estos incluyen fiebre o hipotermia, dificultad respiratoria incluyendo cianosis y apnea, dificultades para alimentarse, letargo o irritabilidad, hipotonía, convulsiones, fontanela abombada... Basándose en el momento de la infección, la sepsis neonatal se ha clasificado en sepsis de aparición temprana (EOS) y sepsis de inicio tardío (LOS), con diferencias en el modo de transmisión y organismos predominantes. La EOS se define como el inicio en los primeros 3 días de vida, generalmente debido a la transmisión vertical de bacterias de madres a bebés durante el período intraparto. LOS ocurre después de los 3 días de vida y se atribuye a patógenos adquiridos postnatalmente (transmisión horizontal). La epidemiología de la sepsis neonatal es un panorama cambiante, sin embargo, las tasas crecientes de sepsis por EOS Escherichia coli, particularmente entre los bebés prematuros, y Streptococcus grupo B (GBS), en particular S. agalactiae, resultaron ser el 70% de los microorganismos responsables. En un estudio sobre 6215 bebés admitidos en los centros de la Red de Investigación Neonatal (NRN) del Instituto Nacional de Salud Infantil y Desarrollo Humano (NICHD), el 70 % de los primeros episodios de infecciones de aparición tardía fueron causados ​​por organismos grampositivos, con estafilococos coagulasa negativos contabilizados el 48% de las infecciones. Considerando la sepsis neonatal en general en Europa, el 90% de las bacterias responsables resultaron ser: Streptococcus agalactiae, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, y Listeria monocytogenes. El diagnóstico de la sepsis neonatal es difícil porque los signos clínicos, particularmente en las primeras etapas del curso de la enfermedad, son sutiles e inespecíficos, y las pruebas de laboratorio y los hemocultivos no siempre son confiables; además, el hemocultivo (el "estándar de oro") toma de 48 a 72 horas. o más para el resultado. De hecho, el método de cultivo presenta una serie de puntos débiles: requiere la presencia de gérmenes vivos y vitales, depende del volumen de la muestra recolectada -problema grave en la población neonatal-, se necesitan varias horas para procesar la muestra, pudiendo resultar falso negativo en sujetos sometidos a tratamiento concomitante con antibióticos o un resultado falso positivo por contaminación. Los métodos basados ​​en biología molecular no requieren gérmenes vivos y, por tanto, no se caracterizan por las limitaciones de sensibilidad propias de los métodos culturales. Por ello, estos métodos pueden resultar extremadamente efectivos en pacientes que ya han recibido una terapia antibiótica y no se ven afectados por un transporte rápido (tanto que las muestras pueden almacenarse a temperatura ambiente incluso durante unos días) y, finalmente, , no requieren ningún medio de cultivo.

En el presente estudio, cuando a un lactante se le debe tomar una muestra de sangre para cultivo de bacterias para verificar una posible sepsis, se procesa una sangre residual (200 µl) en el mismo tiempo utilizando un kit basado en biología molecular. Este kit está diseñado para obtener la mayor sensibilidad y especificidad en la determinación de la mayoría de las enfermedades bacterianas invasivas (meningitis, sepsis, neumonía, etc.) que afectan a los recién nacidos prematuros a término para determinar cualquier presencia de ADN bacteriano perteneciente a todos los serotipos de Klebsiella pneumoniae. , Escherichia coli, Streptococcus agalactiae y Listeria monocytogenes Las bacterias diana se han elegido sobre la base del contexto epidemiológico italiano actual, para incluir los gérmenes que causan alrededor del 90 % de los casos de meningitis/sepsis entre la población neonatal. El sistema de detección puede identificar inequívocamente el germen contra el que se dirige y sin provocar ninguna reacción cruzada con otros gérmenes o con el ADN humano.

Los resultados obtenidos con este método han demostrado una especificidad del 100% (ningún resultado falso positivo). La sensibilidad de este método en comparación con el método cultural ha resultado ser el doble.

El objetivo del presente estudio es comparar la eficacia del método de hemocultivo y el kit para la detección molecular de ADN bacteriano (todos los serotipos de Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Streptococcus agalactiae y Listeria monocytogenes) considerando la epidemiología relevante de nuestra UCIN, en con el fin de verificar la frecuencia relativa de sepsis neonatal (EOS y LOS) causada por la bacteria diana sobre la frecuencia total de las bacterias responsables de todas las sepsis en nuestra sala.

El periodo observacional estimado para recolectar 100 muestras medibles, es de 18 meses desde el inicio del enrolamiento.

Las muestras corresponden al ingreso de recién nacidos a término o pretérmino que requirieron extracción de sangre por sospecha de sepsis, que son procesadas por ambos métodos.