Neonatal sepsis Diagnose: ; PCR kommerciel teknik og blodkultur

Neonatal sepsis er fortsat en af ​​de førende årsager til morbiditet og dødelighed både blandt fuldbårne og præmature spædbørn. Selvom fremskridt inden for neonatal pleje har forbedret overlevelsen og reduceret komplikationer hos præmature spædbørn, bidrager sepsis stadig betydeligt til dødeligheden og på neonatale intensive afdelinger (NICU'er). især for meget lav fødselsvægt (VLBW, <1500 g) og ekstremt lav fødselsvægt (ELBW, <1000g). Tegnene og symptomerne på neonatal sepsis er uspecifikke. Disse omfatter feber eller hypotermi, åndedrætsbesvær, herunder cyanose og apnø, ernæringsbesvær, sløvhed eller irritabilitet, hypotoni, anfald, svulmende fontanel... Baseret på tidspunktet for infektionen er neonatal sepsis blevet klassificeret i tidligt opstået sepsis (EOS) og sen-debut sepsis (LOS), med forskelle i transmissionsmåden og dominerende organismer. EOS defineres som debut i de første 3 dage af livet, generelt på grund af vertikal transmission af bakterier fra mødre til spædbørn i løbet af den intrapartum-periode. LOS opstår efter 3 dage af livet, og det tilskrives patogener erhvervet postnatalt (horisontal transmission). Epidemiologien af ​​neonatal sepsis er et landskab i forandring, ikke desto mindre resulterede en stigende forekomst af EOS Escherichia coli sepsis, især blandt præmature spædbørn, og Streptococcus gruppe B (GBS), især S. agalactiae, - til at være 70 % af de ansvarlige mikroorganismer, I en undersøgelse af 6215 spædbørn indlagt på National Institute of Child Health and Human Development (NICHD) Neonatal Research Network (NRN) centre, var 70 % af de sent-debuterende infektioner i første episode forårsaget af gram-positive organismer, med koagulase-negative stafylokokker. for 48 % af infektionerne. Generelt set i betragtning af neonatal sepsis i Europa, resulterede 90 % af de ansvarlige bakterier i: Streptococcus agalactiae, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, og Listeria monocytogenes. Diagnosen af ​​neonatal sepsis er vanskelig, fordi kliniske tegn, især tidligt i sygdomsforløbet, er subtile og uspecifikke, og laboratorieprøver og bloddyrkning er ikke altid pålidelige, desuden tager bloddyrkning ('guldstandarden) 48-72 timer eller mere for resultatet. Faktisk viser kulturmetoden en række svage punkter: den kræver tilstedeværelsen af ​​levende og vitale bakterier, det afhænger af mængden af ​​den indsamlede prøve - alvorligt problem i neonatal population -, der er brug for flere timer til at behandle prøven, hvilket muligvis resulterer i falsk negativ hos forsøgspersoner, der gennemgår samtidig antibiotikabehandling, eller et falsk positivt resultat kan findes ved kontaminering. Metoderne baseret på molekylærbiologi kræver ikke levende bakterier og er derfor ikke karakteriseret ved de følsomhedsbegrænsninger, der er typiske for kulturmetoder. Af denne grund kan sådanne metoder resultere i at være ekstremt effektive hos patienter, der allerede har modtaget en antibiotikabehandling, og som ikke er påvirket af hurtig transport (så meget, at prøver kan opbevares ved stuetemperatur selv i et par dage) og endelig , kræver ikke noget dyrkningsmedium.

I denne undersøgelse, når et spædbarn skal gennemgå en blodprøve til bakteriekultur for at verificere en mulig sepsis, behandles et resterende blod (200 µl) på samme tid ved hjælp af et kit baseret på molekylærbiologi. Dette sæt er designet til at opnå den højeste sensitivitet og specificitet ved bestemmelse af de fleste invasive bakterielle sygdomme (meningitis, sepsis, lungebetændelse osv.), der påvirker fuldbårne, for tidligt fødte spædbørn for at bestemme enhver tilstedeværelse af bakterielt DNA, der tilhører alle serotyper af Klebsiella pneumoniae , Escherichia coli, Streptococcus agalactiae og Listeria monocytogenes Målbakterierne er udvalgt på baggrund af den nuværende italienske epidemiologiske kontekst, således at de inkluderer bakterier, der forårsager omkring 90 % af meningitis/sepsis-tilfældene blandt den neonatale befolkning. Detektionssystemet kan umiskendeligt identificere kimen, som det er rettet imod og uden at forårsage krydsreaktion med andre bakterier eller menneskeligt DNA.

Resultaterne opnået med denne metode har vist en 100 % specificitet (intet falsk positivt resultat). Følsomheden af ​​denne metode sammenlignet med den kulturelle metode har vist sig at være dobbelt så høj.

Formålet med denne undersøgelse er at sammenligne effektiviteten af ​​blodkulturmetoden og sættet til molekylær påvisning af bakterielt DNA (alle serotyper af Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Streptococcus agalactiae og Listeria monocytogenes) under hensyntagen til den relevante epidemiologi af vores NICU, i for at verificere den relative hyppighed af neonatal sepsis (EOS og LOS) forårsaget af målbakterien på hele frekvensen af ​​de bakterier, der er ansvarlige for al sepsis på vores afdeling.

Den estimerede observationsperiode til at indsamle 100 målbare prøver er 18 måneder fra begyndelsen af ​​tilmeldingen.

Prøver svarer til indskrivningen af ​​præmature nyfødte, som havde brug for en blodudtagning for mistænkt for sepsis, som behandles af begge mododer.