Diagnóstico de Sepse Neonatal: ; PCR Técnica Comercial e Hemocultura

A sepse neonatal continua sendo uma das principais causas de morbidade e mortalidade entre bebês a termo e prematuros. Embora os avanços nos cuidados neonatais tenham melhorado a sobrevida e reduzido as complicações em prematuros, a sepse ainda contribui significativamente para a mortalidade e nas Unidades de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN). particularmente para muito baixo peso ao nascer (MBP, <1.500 g) e extremo baixo peso (ELBW, <1.000 g). Os sinais e sintomas de sepse neonatal são inespecíficos. Estes incluem febre ou hipotermia, dificuldade respiratória incluindo cianose e apnéia, dificuldades de alimentação, letargia ou irritabilidade, hipotonia, convulsões, abaulamento da fontanela... sepse de início tardio (LOS), com diferenças no modo de transmissão e organismos predominantes. A EOS é definida como o início nos primeiros 3 dias de vida, geralmente devido à transmissão vertical de bactérias de mães para bebês durante o período intraparto. A LOS ocorre após 3 dias de vida e é atribuída a patógenos adquiridos pós-natal (transmissão horizontal). A epidemiologia da sepse neonatal é um cenário em mudança, no entanto, as taxas crescentes de sepse EOS por Escherichia coli, particularmente entre bebês prematuros, e Streptococcus grupo B (GBS), em particular S. agalactiae, resultaram em 70% dos microrganismos responsáveis, Em um estudo com 6.215 bebês internados nos centros da Rede de Pesquisa Neonatal (NRN) do Instituto Nacional de Saúde Infantil e Desenvolvimento Humano (NRN), 70% dos primeiros episódios de infecções de início tardio foram causados ​​por organismos gram-positivos, com estafilococos coagulase-negativos contabilizados por 48% das infecções. Considerando a sepse neonatal em geral na Europa, 90% das bactérias responsáveis ​​foram: Streptococcus agalactiae, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, e Listeria monocytogenes. O diagnóstico de sepse neonatal é difícil porque os sinais clínicos, principalmente no início do curso da doença, são sutis e inespecíficos, e os exames laboratoriais e a hemocultura nem sempre são confiáveis, além disso, a hemocultura (o 'padrão ouro) leva de 48 a 72 horas ou mais para resultado. De fato, o método cultural apresenta vários pontos fracos: requer a presença de germes vivos e vitais, depende do volume da amostra coletada - problema grave na população neonatal -, são necessárias várias horas para processar a amostra, resultando possivelmente em falso negativo em indivíduos submetidos a tratamento antibiótico concomitante ou um resultado falso positivo pode ser encontrado por contaminação. Os métodos baseados em biologia molecular não requerem germes vivos e, portanto, não apresentam as limitações de sensibilidade típicas dos métodos culturais. Por esta razão, tais métodos podem ser extremamente eficazes em pacientes que já receberam uma terapia antibiótica e não são afetados pelo transporte rápido (tanto que as amostras podem ser armazenadas em temperatura ambiente mesmo por alguns dias) e, finalmente, , não requerem nenhum meio de cultura.

No presente estudo, quando uma criança é submetida a coleta de sangue para cultura de bactérias para verificar uma possível sepse, um sangue residual (200µl) é processado ao mesmo tempo usando um kit baseado em biologia molecular. Este kit é projetado para obter a mais alta sensibilidade e especificidade na determinação da maioria das doenças bacterianas invasivas (meningite, sepse, pneumonia, etc.) afetando bebês prematuros a termo para determinar qualquer presença de DNA bacteriano pertencente a todos os sorotipos de Klebsiella pneumoniae , Escherichia coli, Streptococcus agalactiae e Listeria monocytogenes As bactérias-alvo foram escolhidas com base no atual contexto epidemiológico italiano, de modo a incluir os germes que causam cerca de 90% dos casos de meningite/sepse na população neonatal. O sistema de detecção pode identificar inequivocamente o germe contra o qual é direcionado e sem causar qualquer reação cruzada com outros germes ou DNA humano.

Os resultados obtidos com este método demonstraram uma especificidade de 100% (nenhum resultado falso positivo). A sensibilidade desse método em comparação com o método cultural acabou sendo duas vezes maior.

O objetivo do presente estudo é comparar a eficácia do método de hemocultura e do kit para detecção molecular de DNA bacteriano (todos os sorotipos de Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Streptococcus agalactiae e Listeria monocytogenes) considerando a epidemiologia relevante de nossa UTIN, em a fim de verificar a frequência relativa de sepse neonatal (EOS e LOS) causada pela bactéria-alvo sobre a frequência total da bactéria responsável por todas as sepse em nossa enfermaria.

O período observacional estimado para coletar 100 amostras mensuráveis ​​é de 18 meses a partir do início da inscrição.

As amostras correspondem ao cadastramento de recém-nascidos a termo ou pré-termo que necessitaram de coleta de sangue por suspeita de sepse, que são processadas por ambos os métodos.