Diagnosi di sepsi neonatale: ; Tecnica commerciale PCR ed emocoltura

La sepsi neonatale rimane una delle principali cause di morbilità e mortalità sia tra i neonati a termine che tra i prematuri. Sebbene i progressi nell'assistenza neonatale abbiano migliorato la sopravvivenza e ridotto le complicanze nei neonati prematuri, la sepsi contribuisce ancora in modo significativo alla mortalità e nelle unità di terapia intensiva neonatale (UTIN). in particolare per peso alla nascita molto basso (VLBW, <1500 g) ed estremamente basso alla nascita (ELBW, <1000 g). I segni ei sintomi della sepsi neonatale non sono specifici. Questi includono febbre o ipotermia, distress respiratorio inclusa cianosi e apnea, difficoltà di alimentazione, letargia o irritabilità, ipotonia, convulsioni, fontanella sporgente... Sulla base della tempistica dell'infezione la sepsi neonatale è stata classificata in sepsi ad esordio precoce (EOS) e sepsi a esordio tardivo (LOS), con differenze nella modalità di trasmissione e nei microrganismi predominanti. La EOS è definita come l'insorgenza nei primi 3 giorni di vita generalmente dovuta alla trasmissione verticale di batteri dalla madre al bambino durante il periodo intrapartum. La LOS insorge dopo 3 giorni di vita ed è attribuita a patogeni acquisiti dopo la nascita (trasmissione orizzontale). L'epidemiologia della sepsi neonatale è un panorama in evoluzione, tuttavia un aumento dei tassi di sepsi EOS Escherichia coli, in particolare tra i neonati pretermine, e Streptococcus gruppo B (GBS), in particolare S. agalactiae, - è risultato essere il 70% dei microrganismi responsabili, In uno studio su 6215 bambini ricoverati presso i centri del National Institute of Child Health and Human Development (NICHD) Neonatal Research Network (NRN), il 70% del primo episodio di infezione ad esordio tardivo era causato da microrganismi gram-positivi, con stafilococchi coagulasi-negativi. per il 48% dei contagi. Considerando generalmente la sepsi neonatale in Europa, il 90% dei batteri responsabili è risultato essere: Streptococcus agalactiae, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, e Listeria monocytogenes. La diagnosi di sepsi neonatale è difficile perché i segni clinici, in particolare all'inizio della malattia, sono sottili e aspecifici e gli esami di laboratorio e l'emocoltura non sono sempre affidabili, inoltre l'emocoltura (il "gold standard") richiede 48-72 ore o più per risultato. Il metodo colturale presenta infatti una serie di punti deboli: richiede la presenza di germi vivi e vitali, dipende dal volume del campione raccolto - grave problema nella popolazione neonatale -, sono necessarie diverse ore per processare il campione, con possibili falsi negativi nei soggetti sottoposti a concomitante trattamento antibiotico o un risultato falso positivo può essere riscontrato per contaminazione. I metodi basati sulla biologia molecolare non richiedono germi viventi e, quindi, non sono caratterizzati dai limiti di sensibilità tipici dei metodi colturali. Per questo motivo, tali metodiche possono risultare estremamente efficaci in pazienti che hanno già ricevuto una terapia antibiotica, e non risentono del trasporto rapido (tanto che i campioni possono essere conservati a temperatura ambiente anche per pochi giorni) e, infine, , non richiedono alcun mezzo di coltura.

Nel presente studio, quando un neonato deve essere sottoposto a prelievo di sangue per la coltura batterica per verificare una possibile sepsi, viene processato contemporaneamente un sangue residuo (200µl) utilizzando un kit basato sulla biologia molecolare. Questo kit è progettato per ottenere la massima sensibilità e specificità nella determinazione della maggior parte delle malattie batteriche invasive (meningite, sepsi, polmonite, ecc.) che colpiscono i neonati prematuri a termine per determinare l'eventuale presenza di DNA batterico appartenente a tutti i sierotipi di Klebsiella pneumoniae , Escherichia coli, Streptococcus agalactiae e Listeria monocytogenes I batteri bersaglio sono stati scelti sulla base dell'attuale contesto epidemiologico italiano, in modo da includere nella popolazione neonatale i germi responsabili di circa il 90% dei casi di meningite/sepsi. Il sistema di rilevamento può identificare inequivocabilmente il germe contro il quale è diretto e senza provocare alcuna reazione incrociata con altri germi o DNA umano.

I risultati ottenuti con questo metodo hanno dimostrato una specificità del 100% (nessun risultato falso positivo). La sensibilità di questo metodo rispetto al metodo colturale si è rivelata doppia.

Lo scopo del presente studio è confrontare l'efficacia del metodo di emocoltura e del kit per la rilevazione molecolare del DNA batterico (tutti i sierotipi di Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Streptococcus agalactiae e Listeria monocytogenes) considerando l'epidemiologia rilevante della nostra UTIN, in al fine di verificare la frequenza relativa delle sepsi neonatali (EOS e LOS) causate dai batteri bersaglio sull'intera frequenza dei batteri responsabili di tutte le sepsi nel nostro reparto.

Il periodo osservativo stimato per la raccolta di 100 campioni misurabili è di 18 mesi dall'inizio dell'arruolamento.

I campioni corrispondono all'arruolamento di neonati a termine o pretermine che necessitavano di un prelievo di sangue per sospetto di sepsi, che vengono processati con entrambi i metodi.