Neonatal sepsis Diagnose: ; PCR kommersiell teknikk og blodkultur

Neonatal sepsis er fortsatt en av de viktigste årsakene til sykelighet og dødelighet både blant termin og premature spedbarn. Selv om fremskritt innen neonatalomsorg har forbedret overlevelse og redusert komplikasjoner hos premature spedbarn, bidrar sepsis fortsatt betydelig til dødelighet og i neonatale intensivavdelinger (NICUs). spesielt for svært lav fødselsvekt (VLBW, <1500 g) og ekstremt lav fødselsvekt (ELBW, <1000g). Tegnene og symptomene på neonatal sepsis er uspesifikke. Disse inkluderer feber eller hypotermi, pustebesvær inkludert cyanose og apné, matvansker, sløvhet eller irritabilitet, hypotoni, anfall, svulmende fontanel... Basert på tidspunktet for infeksjonen har neonatal sepsis blitt klassifisert i tidlig-debut sepsis (EOS) og late-onset sepsis (LOS), med forskjeller i overføringsmåte og dominerende organismer. EOS er definert som debut i de første 3 dagene av livet, vanligvis på grunn av vertikal overføring av bakterier fra mødre til spedbarn i løpet av fødselsperioden. LOS oppstår etter 3 dager av livet, og det tilskrives patogener ervervet postnatalt (horisontal overføring). Epidemiologien til neonatal sepsis er et landskap i endring, men en økende forekomst av EOS Escherichia coli sepsis, spesielt blant premature spedbarn, og Streptococcus gruppe B (GBS), spesielt S. agalactiae, - resulterte i å være 70 % av de ansvarlige mikroorganismene, I en studie på 6215 spedbarn innlagt på National Institute of Child Health and Human Development (NICHD) Neonatal Research Network (NRN) sentre, ble 70 % av sent-debutinfeksjoner i første episode forårsaket av gram-positive organismer, med koagulase-negative stafylokokker. for 48 % av infeksjonene. Med tanke på generelt neonatal sepsis i Europa, ble 90 % av de ansvarlige bakteriene: Streptococcus agalactiae, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, og Listeria monocytogenes. Diagnosen av neonatal sepsis er vanskelig fordi kliniske tegn, spesielt tidlig i sykdomsforløpet, er subtile og uspesifikke, og laboratorietester og blodkultur er ikke alltid pålitelige, dessuten tar blodkultur (gullstandarden) 48-72 timer eller mer for resultatet. Faktisk viser kulturmetoden en rekke svake punkter: den krever tilstedeværelsen av levende og vitale bakterier, det avhenger av volumet av den innsamlede prøven - alvorlig problem i nyfødtpopulasjonen - det trengs flere timer for å behandle prøven, noe som muligens resulterer i falskt negativt hos personer som gjennomgår samtidig antibiotikabehandling eller et falskt positivt resultat kan bli funnet ved kontaminering. Metodene basert på molekylærbiologi krever ikke levende bakterier og er derfor ikke preget av sensitivitetsbegrensningene som er typiske for kulturmetoder. Av denne grunn kan slike metoder resultere i å være ekstremt effektive hos pasienter som allerede har mottatt en antibiotikabehandling, og som ikke er påvirket av rask transport (så mye at prøvene kan lagres ved romtemperatur selv i noen få dager) og til slutt , krever ikke noe kulturmedium.

I denne studien, når et spedbarn må gjennomgå en blodprøve for bakteriekultur for å verifisere en mulig sepsis, behandles et gjenværende blod (200 µl) på samme tid ved å bruke et sett basert på molekylærbiologi. Dette settet er utformet for å oppnå den høyeste sensitiviteten og spesifisiteten i bestemmelsen av de fleste invasive bakterielle sykdommer (meningitt, sepsis, lungebetennelse, etc.) som påvirker fullbårne, premature spedbarn for å bestemme eventuell tilstedeværelse av bakteriell DNA som tilhører alle serotyper av Klebsiella pneumoniae , Escherichia coli, Streptococcus agalactiae og Listeria monocytogenes Målbakteriene er valgt på grunnlag av dagens italienske epidemiologiske kontekst, for å inkludere bakterier som forårsaker omtrent 90 % av hjernehinnebetennelsen/sepsis-tilfellene blant nyfødtpopulasjonen. Deteksjonssystemet kan umiskjennelig identifisere kimen det er rettet mot og uten å forårsake noen kryssreaksjon med andre bakterier eller menneskelig DNA.

Resultatene oppnådd med denne metoden har vist en 100 % spesifisitet (ingen falskt positivt resultat). Følsomheten til denne metoden sammenlignet med kulturmetoden har vist seg å være dobbelt så høy.

Målet med denne studien er å sammenligne effektiviteten til blodkulturmetoden og settet for molekylær påvisning av bakteriell DNA (alle serotyper av Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Streptococcus agalactiae og Listeria monocytogenes) med tanke på den relevante epidemiologien til vår NICU, i for å verifisere den relative frekvensen av neonatal sepsis (EOS og LOS) forårsaket av målbakteriene på hele frekvensen av bakteriene som er ansvarlige for all sepsis i vår avdeling.

Den estimerte observasjonsperioden for å samle inn 100 målbare prøver er 18 måneder fra begynnelsen av registreringen.

Prøver tilsvarer registreringen av premature nyfødte som trengte bloduttak for en mistenkt sepsis, som behandles av begge motodene.