Diagnose neonatale sepsis: ; PCR-commerciële techniek en bloedkweek

Neonatale sepsis blijft een van de belangrijkste oorzaken van morbiditeit en mortaliteit, zowel bij voldragen als premature baby's. Hoewel de vooruitgang in de neonatale zorg de overleving heeft verbeterd en de complicaties bij te vroeg geboren baby's heeft verminderd, draagt ​​sepsis nog steeds aanzienlijk bij aan de mortaliteit en op Neonatale Intensive Care Units (NICU's). met name voor zeer laag geboortegewicht (VLBW, <1500 g) en extreem laag geboortegewicht (ELBW, <1000 g). De tekenen en symptomen van neonatale sepsis zijn niet specifiek. Deze omvatten koorts of onderkoeling, ademnood waaronder cyanose en apneu, voedingsproblemen, lethargie of prikkelbaarheid, hypotonie, epileptische aanvallen, uitpuilende fontanel... Op basis van het tijdstip van de infectie is neonatale sepsis geclassificeerd in sepsis met vroege aanvang (EOS) en sepsis met late aanvang (LOS), met verschillen in de wijze van overdracht en overheersende organismen. EOS wordt gedefinieerd als begin in de eerste 3 dagen van het leven, meestal als gevolg van verticale overdracht van bacteriën van moeders op baby's tijdens de intrapartumperiode. LOS treedt op na 3 levensdagen en wordt toegeschreven aan postnataal verworven pathogenen (horizontale overdracht). De epidemiologie van neonatale sepsis is een veranderend landschap, niettemin stijgt het aantal gevallen van EOS Escherichia coli sepsis, vooral onder te vroeg geboren baby's, en Streptococcus groep B (GBS), in het bijzonder S. agalactiae, - resulteerde in 70% van de verantwoordelijke micro-organismen, In een onderzoek onder 6215 baby's die werden opgenomen in de centra van het National Institute of Child Health and Human Development (NICHD) Neonatal Research Network (NRN), werd 70% van de late infecties in de eerste episode veroorzaakt door grampositieve organismen, met coagulase-negatieve stafylokokken. voor 48% van de besmettingen. Gezien neonatale sepsis in Europa in het algemeen, bleek 90% van de verantwoordelijke bacteriën te zijn: Streptococcus agalactiae, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, en Listeria monocytogenes. De diagnose van neonatale sepsis is moeilijk omdat de klinische symptomen, vooral vroeg in het ziekteverloop, subtiel en niet-specifiek zijn, en laboratoriumtests en bloedkweek niet altijd betrouwbaar zijn, bovendien duurt bloedkweek (de 'gouden standaard') 48-72 uur of meer voor resultaat. In feite vertoont de kweekmethode een aantal zwakke punten: het vereist de aanwezigheid van levende en vitale kiemen, het hangt af van het volume van het verzamelde monster - ernstig probleem bij de neonatale populatie -, er zijn meerdere uren nodig om het monster te verwerken, mogelijk resulterend in vals-negatief bij proefpersonen die gelijktijdig een antibioticabehandeling ondergaan of een vals-positief resultaat kan worden gevonden door besmetting. De op moleculaire biologie gebaseerde methoden hebben geen levende kiemen nodig en worden daarom niet gekenmerkt door de gevoeligheidsbeperkingen die kenmerkend zijn voor culturele methoden. Om deze reden kunnen dergelijke methoden uiterst effectief zijn bij patiënten die al een antibiotische therapie hebben gekregen en niet worden beïnvloed door snel transport (zo erg zelfs dat monsters zelfs voor een paar dagen bij kamertemperatuur kunnen worden bewaard) en tenslotte , hebben geen kweekmedium nodig.

In de huidige studie, wanneer een baby een bloedmonster moet ondergaan voor bacteriekweek om een ​​mogelijke sepsis te verifiëren, wordt tegelijkertijd een restbloed (200 µl) verwerkt met behulp van een kit op basis van moleculaire biologie. Deze kit is ontworpen om de hoogste sensitiviteit en specificiteit te verkrijgen bij de bepaling van de meest invasieve bacteriële ziekten (meningitis, sepsis, longontsteking, enz.) die voldragen, te vroeg geboren baby's treffen, om de aanwezigheid van bacterieel DNA te bepalen dat behoort tot alle serotypes van Klebsiella pneumoniae , Escherichia coli, Streptococcus agalactiae en Listeria monocytogenes De doelbacteriën zijn gekozen op basis van de huidige Italiaanse epidemiologische context, zodat de ziektekiemen die ongeveer 90% van de gevallen van meningitis/sepsis bij de neonatale populatie veroorzaken, worden meegerekend. Het detectiesysteem kan onmiskenbaar de ziektekiem identificeren waartegen het is gericht en zonder kruisreacties met andere ziektekiemen of menselijk DNA te veroorzaken.

De met deze methode verkregen resultaten hebben een specificiteit van 100% aangetoond (geen fout-positief resultaat). De gevoeligheid van deze methode ten opzichte van de culturele methode is twee keer zo hoog gebleken.

Het doel van de huidige studie is om de werkzaamheid van de bloedkweekmethode en de kit voor moleculaire detectie van bacterieel DNA (alle serotypen van Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Streptococcus agalactiae en Listeria monocytogenes) te vergelijken, rekening houdend met de relevante epidemiologie van onze NICU, in om de relatieve frequentie van neonatale sepsis (EOS en LOS) veroorzaakt door de doelbacterie te verifiëren op de totale frequentie van de bacteriën die verantwoordelijk zijn voor alle sepsis in onze afdeling.

De observationele geschatte periode om 100 meetbare monsters te verzamelen, is 18 maanden vanaf het begin van de inschrijving.

Monsters komen overeen met de inschrijving van voldragen premature neonaten die een bloedafname nodig hadden voor een verdachte van sepsis, die door beide mothoden worden verwerkt.