Detekce mutací EGFR v tekutých cytologických vzorcích

Přítomnost mutací aktivujícího receptoru epidermálního růstového faktoru (EGFR) identifikuje pacienty s plicním adenokarcinomem, u kterých mohou být inhibitory tyrozinkinázy EGFR (TKI) potenciální léčbou první volby. V současnosti jsou k dispozici TKI erlotinib, gefitinib a afatinib, které působí tak, že blokují aktivitu receptorové tyrosinkinázy, čímž zastavují buněčnou proliferaci a způsobují buněčnou smrt. Několik studií zjistilo, že léčba TKI první linie prodlužuje přežití bez progrese ve srovnání se standardní chemoterapií a je také spojena s příznivější snášenlivostí a menšími nežádoucími účinky.

Vzorky pro analýzu mutace EGFR se odebírají od pacientů endobronchiální ultrazvukem řízenou transbronchiální jehlovou aspirací (EBUS-TBNA) a bronchiálním čištěním a výplachem. EBUS-TBNA poskytuje minimálně invazivní metodu odběru vzorků tkáně z radiologicky podezřelých lymfatických uzlin v hrudníku pomocí jehly s jemným kalibrem. Získané vzorky jsou odebírány a odesílány do laboratoře ke zpracování. V současné době se laboratoře spoléhají na použití vzorků zalitých ve formalínu fixovaných v parafínu (FFPE) pro testování EGFR, proto se v laboratoři vytvářejí sraženiny pomocí odebraných tkáňových fragmentů. Sražený vzorek musí být poté fixován ve formalínu před zpracováním v histologické laboratoři, aby se vytvořila sklíčka pro mikroskopické vyšetření konzultujícím patologem. Jakmile je adenokarcinom diagnostikován, vzorky FFPE jsou poté odeslány na analýzu mutace EGFR. Současný laboratorní proces trvá přibližně 5 dní.

Tekuté cytologické vzorky (LBC) získané stejnými odběrovými postupy jsou také připraveny v laboratoři a fixovány pomocí roztoku na bázi methanolu (PreservCyt). Předchozí výzkum byl proveden s cílem zjistit, zda lze vzorky LBC použít místo vzorků FFPE pro detekci mutací EGFR s příznivými výsledky. Příklady zahrnují výzkum Zhao et al (2017), Satouchi et al (2017), De Luca et al (2017) a Malapelle et al (2016). Přechod na použití vzorků LBC pro testování EGFR by odstranil více kroků zpracování v cestě vzorku k testování mutace. K potvrzení adenokarcinomu bude ve většině případů vyžadována imunocytochemie. Tato rychlejší cesta by byla přínosná v případech již potvrzeného adenokarcinomu pro testování léčby EGFR druhé linie (T790M) a v případech, kdy lze k testování využít reziduální cytologický vzorek, který by se za normálních okolností zlikvidoval, čímž se optimalizuje potenciál odběru.

Tato studie bude zkoumat, zda jsou vzorky LBC vhodnou alternativou k vzorkům FFPE pro detekci mutací EGFR pomocí platformy Biocartis Idylla.

Pokud se ukáže, že tekuté cytologické vzorky jsou vhodnou alternativou, mohlo by to mít za následek:

• Rychlejší doba obratu výsledků v případech jednoznačného adenokarcinomu. To by poskytlo dřívější přístup k TKI umožňujícím optimální správu pacienta.
• Jednodušší příprava vzorků v laboratoři
• Umožnilo by to efektivní využití veškerého materiálu získaného při odběru vzorků. Například by mohlo být provedeno dodatečné testování na tkáni FFPE namísto testování EGFR, což by mohlo pomoci při diagnostice. Zvýšení efektivního využití materiálu by také mohlo zabránit opakování procedury EBUS u pacientů.
• Bylo zjištěno, že methanol je lepší fixační prostředek než formalín. Použití cytologických vzorků na kapalné bázi může umožnit lepší výsledky molekulárního testování.
• Poskytlo by podporu myšlence, že molekulární testování na jiné druhy rakoviny může být možné provádět na cytologických vzorcích na bázi kapaliny, například testování mutace BRAF na melanom. Poskytuje také podporu pro použití jiných kapalných vzorků pro molekulární testování, jako jsou vzorky krve, které by mohly být testovány na cirkulující nádorové buňky (méně invazivní odběr vzorků).