Wykrywanie mutacji EGFR w płynnych próbkach cytologicznych

Obecność mutacji aktywującego receptora naskórkowego czynnika wzrostu (EGFR) identyfikuje chorych na gruczolakoraka płuc, u których inhibitory kinazy tyrozynowej (TKI) EGFR mogą stanowić potencjalne leczenie pierwszego rzutu. Obecnie dostępne TKI to erlotynib, gefitynib i afatynib, które działają poprzez blokowanie aktywności receptorowej kinazy tyrozynowej, zatrzymując w ten sposób proliferację komórek i powodując śmierć komórek. W kilku badaniach wykazano, że leczenie pierwszego rzutu TKI wydłuża przeżycie wolne od progresji choroby w porównaniu ze standardową chemioterapią, a także wiąże się z lepszą tolerancją i mniejszą liczbą działań niepożądanych.

Próbki do analizy mutacji EGFR pobiera się od pacjentów za pomocą przezoskrzelowej aspiracji igły przezoskrzelowej pod kontrolą USG (EBUS-TBNA) oraz szczotkowania i płukania oskrzeli. EBUS-TBNA zapewnia minimalnie inwazyjną metodę pobierania próbek tkanek z radiologicznie podejrzanych węzłów chłonnych w klatce piersiowej za pomocą cienkiej igły. Uzyskane próbki są pobierane i przesyłane do laboratorium w celu przetworzenia. Obecnie laboratoria polegają na wykorzystaniu próbek utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie (FFPE) do badania EGFR, dlatego w laboratorium wytwarza się skrzepy z pobranych fragmentów tkanek. Skrzepnięta próbka musi być następnie utrwalona w formalinie przed przetwarzaniem w laboratorium histologicznym w celu wytworzenia szkiełek do badania mikroskopowego przez konsultanta patologa. Po zdiagnozowaniu gruczolakoraka próbki FFPE są następnie wysyłane do analizy mutacji EGFR. Bieżący proces laboratoryjny trwa około 5 dni.

Próbki cytologiczne na bazie cieczy (LBC) uzyskane za pomocą tych samych procedur pobierania próbek są również przygotowywane w laboratorium i utrwalane za pomocą roztworu na bazie metanolu (PreservCyt). Wcześniejsze badania przeprowadzono w celu ustalenia, czy próbki LBC mogą być stosowane zamiast próbek FFPE do wykrywania mutacji EGFR z korzystnymi wynikami. Przykłady tego obejmują badania Zhao i in. (2017), Satouchi i in. (2017), De Luca i in. (2017) oraz Malapelle i in. (2016). Przejście na stosowanie próbek LBC do testowania EGFR usunęłoby wiele etapów przetwarzania w ścieżce próbki do badania mutacji. W większości przypadków do potwierdzenia gruczolakoraka wymagana będzie immunocytochemia. Ta szybsza ścieżka byłaby korzystna w przypadkach już potwierdzonego gruczolakoraka do badań drugiego rzutu leczenia EGFR (T790M) oraz w przypadkach, w których pozostała próbka cytologiczna, która normalnie zostałaby wyrzucona, może zostać wykorzystana do badań, optymalizując potencjał pobierania próbek.

To badanie ma na celu zbadanie, czy próbki LBC są wykonalną alternatywą dla próbek FFPE do wykrywania mutacji EGFR przy użyciu platformy Biocartis Idylla.

Jeśli okaże się, że płynne próbki cytologiczne stanowią wykonalną alternatywę, może to spowodować:

• Szybszy czas oczekiwania na wyniki w przypadku jednoznacznego gruczolakoraka. Zapewniłoby to wcześniejszy dostęp do TKI, co pozwoliłoby na optymalne zarządzanie pacjentem.
• Łatwiejsze przygotowanie próbki w laboratorium
• Pozwoliłoby to na efektywne wykorzystanie całego materiału pozyskanego w ramach procedur pobierania próbek. Na przykład dodatkowe badania można przeprowadzić na tkance FFPE zamiast badania EGFR, co mogłoby pomóc w postawieniu diagnozy. Zwiększenie efektywnego wykorzystania materiału mogłoby również zapobiec powtórzeniu procedury EBUS u pacjentów.
• Stwierdzono, że metanol jest lepszym utrwalaczem niż formalina. Wykorzystanie płynnych próbek cytologicznych może pozwolić na uzyskanie lepszych wyników badań molekularnych.
• Zapewniłoby to poparcie dla pomysłu, że testy molekularne w kierunku innych nowotworów mogą być przeprowadzane na płynnych próbkach cytologicznych, na przykład test mutacji BRAF w czerniaku. Zapewnia również wsparcie dla wykorzystania innych próbek cieczy do badań molekularnych, takich jak próbki krwi, które można zbadać pod kątem krążących komórek nowotworowych (pobieranie próbek mniej inwazyjne).