RAPA-501-Allo terapie COVID-19-ARDS

První složka studie fáze 1 u člověka vyhodnotí dvě úrovně dávek RAPA-501-ALLO běžně dostupných buněk u pacientů s ARDS souvisejícím s COVID-19, s klíčovými koncovými body bezpečnosti, biologickými a potenciálními účinky modifikujícími onemocnění. Randomizovaná, dvojitě zaslepená, placebem kontrolovaná složka studie fáze 2b vyhodnotí infuzi buněk RAPA-501 ALLO ze skladu nebo kontrolní infuzi, přičemž primární cíl hodnotí, zda buňky RAPA-501 snižují 30denní mortalitu.

Pandemie COVID-19 je katastrofa, která se hraje s progresivní nemocností a úmrtností. K 6. dubnu 2021 se virem nakazilo odhadem 132,1 milionu lidí a celosvětově si vyžádalo 2 866 000 úmrtí. Spojené státy mají nejvyšší úhrny s odhadovaným počtem 30,8 milionu diagnostikovaných lidí a 556 000 úmrtí. Spojené státy mají nejvyšší úhrny s odhadem 22,4 milionu diagnostikovaných lidí a 375 000 úmrtí. Ve stádiích 1 a 2 COVID-19 převládá šíření viru u pacienta. Jako takové se terapeutické intervence zaměřují na imunitní molekuly (rekonvalescentní sérum, monoklonální protilátky) a antivirové léky (remdesivir). Naproti tomu nejzávažnější a smrtelná forma COVID-19, stadium 3, není poháněna virovým množením, ale nekontrolovanou imunitní reakcí (hyperzánět) způsobenou zvýšením imunitních molekul známých jako cytokiny a chemokiny. Jako takové se terapeutické intervence u onemocnění ve stadiu 3 zaměřují na protizánětlivé léky, jako je anticytokinová terapie (anti-IL-6 léky) nebo kortikosteroidní terapie. Bohužel tyto intervence neřeší úplnou patogenezi stadia 3 COVID-19, který zahrnuje hyperzánět způsobený „cytokinovou bouří“ a „chemokinovou bouří“, poškození tkáně, hyperkoagulaci a multiorgánové selhání (včetně plic, srdce, ledvin a mozek). Plicní složka onemocnění stadia 3 zahrnuje syndrom akutní respirační tísně (ARDS), což je poslední běžná cesta úmrtí pacienta v důsledku nesčetných stavů, včetně pneumonie, sepse a traumatu. Existuje naléhavá potřeba nových buněčných léčeb, které mohou poskytnout jak široký imunitní modulační účinek, tak účinek regenerace tkáně, jako jsou běžně dostupné allogenní hybridní TREG/Th2 buňky RAPA-501-ALLO.

Mechanismus fatální pneumonie u experimentální infekce myšího koronaviru je zprostředkován vrozenou aktivací zánětu, výslednou robustní infiltrací zánětlivých monocytů a makrofágů a následným zvýšením množství prozánětlivých cytokinů a chemokinů. Důležité je, že CD4+ a CD8+ adaptivní T buněčná odpověď na experimentální infekci koronavirem může být buď léčebná, nebo propagující nemoc. Virem indukovaný plicní zánět byl také hodnocen na modelech nehumánních primátů, které potvrdily, že dysregulovaná imunitní aktivace během virové pneumonie zahrnuje nerovnováhu podskupiny T buněk, zánětlivou kaskádu odvozenou od monocytů a výsledné poškození epiteliálních buněk. U lidí závažnost virem indukované infekce dolních cest dýchacích koreluje se zvýšeným počtem efektorových paměťových CD8+ T buněk v dýchacích cestách. Jak bylo nedávno přezkoumáno, infekce lidským koronavirem představuje pokračující boj mezi virem a hostitelem, přičemž povaha reakce diktuje vyléčení nemoci nebo alternativně zhoršení plicní nemoci. Existují důkazy, že adaptivní imunitní systém přispívá k plicnímu zánětu během onemocnění koronavirem (SARS-CoV) souvisejícím se SARS: to znamená, že bronchoalveolární tekutina od takových subjektů měla zvýšený počet T buněk a zvýšené molekuly spojené s Th1 IL-12, IFN-gama, a IP-10. Tato downstream adaptivní zánětlivá reakce zprostředkovaná T buňkami je částečně řízena SARS-Co-V proteinem viroporinem 3a. Konkrétně molekuly viroporinu aktivují NLRP3 inflammasom, který spojuje vrozené a adaptivní zánětlivé reakce. Kromě toho SARS-CoV i SARS-CoV-2 exprimují molekulu ORF3a s otevřeným čtecím rámcem, která také aktivuje zánět NLRP3.

Nedávno byla popsána povaha imunity během řešení symptomatické infekce COVID-19, konkrétně: vznik buněk sekretujících protilátky a CD4+ T folikulárních pomocných buněk; zvýšení počtu CD8+ T buněk exprimujících perforin a granzym; a relativní nedostatek zvýšení prozánětlivých cytokinů a chemokinů. Naproti tomu pacienti s těžkou chorobou COVID-19 měli výrazně zvýšené plazmatické hladiny cytokinů (včetně IL-2 a TNF-alfa) a chemokinů (včetně IP-10 a MIP-1-alfa) (Huang et al., Lancet, 2020). Souhrnně tyto výsledky naznačují, že prozánětlivé cytokinové a chemokinové reakce, které se vyskytují u závažného onemocnění COVID-19, jsou škodlivé a že účinné protizánětlivé přístupy se nakonec mohou ukázat jako terapeutické. Jak však již bylo podrobně popsáno, pokročilejší stadium 3 onemocnění COVID-19 je charakterizováno složkou ARDS a cytokinovou bouří, jako takové, nové přístupy k léčbě virové pneumonie COVID-19 by měly optimálně zahrnovat jak protizánětlivý prvek, tak i prvek pro ochranu/opravu tkáně.

Stádium 3 COVID-19 nese odhadovanou 30denní úmrtnost přes 50 % navzdory využití JIP, mechanické ventilaci a podpůrným terapiím ke zvládání ARDS a multiorgánového selhání. Úzce působící cílené protizánětlivé přístupy, jako jsou anti-IL-6 terapeutika, nebyly zvláště účinné ve 3. stadiu COVID-19 a široký protizánětlivý farmaceutický přístup kortikosteroidní terapie v některých studiích pouze mírně zmírnil 3. stupeň onemocnění. Buněčná terapie je také hodnocena ve stadiu 3 COVID-19, konkrétně mezenchymální stromální buňky (MSC) a nyní, se současným protokolem RAPA-501-ALLO, regulační T (TREG) buňky. Terapie TREG má mechanismus účinku, který zahrnuje mnohostranný protizánětlivý účinek, který staví terapii TREG do popředí budoucí kurativní terapie širokého spektra autoimunitních a neurodegenerativních onemocnění, plus transplantačních komplikací, jako je štěp proti hostiteli onemocnění (GVHD) a rejekce štěpu. Kromě toho může terapie TREG poskytnout tkáňový regenerační účinek, který staví buněčnou terapii TREG do čela úsilí nové regenerativní medicíny o nápravu nesčetných tkáňových onemocnění, jako jsou onemocnění kůže, svalů, plic, jater, střev, srdce (infarkt myokardu) a mozek (mrtvice). Běžná buněčná terapie RAPA-501-ALLO nabízí tento potenciální mechanismus působení s dvojí hrozbou, který zahrnuje jak protizánětlivé, tak i tkáňové reparační účinky pro účinnou léčbu COVID-19 a mnohočetných letálních stavů.

Buňky RAPA-501-ALLO jsou generovány od zdravých dobrovolníků, kryokonzervovány, uloženy do banky a poté jsou kdykoli k dispozici pro běžnou terapii. Během výroby jsou T buňky „přeprogramovány“ ex vivo pomocí nového, patentovaného 7denního dvoukrokového procesu, který zahrnuje dediferenciaci T buněk a následnou re-diferenciaci směrem ke dvěma klíčovým protizánětlivým programům, TREG a Th2 drahám. čímž vzniká „hybridní“ produkt. Hybridní fenotyp inhibuje zánětlivé dráhy fungující u COVID-19, včetně modulace více cytokinů a chemokinů, které přitahují zánětlivé buňky do tkáně pro iniciaci multiorgánového poškození. Hybridní fenotyp TREG a Th2 buněk RAPA-501-ALLO křížově reguluje populace Th1 a Th17, které iniciují hyperzánět COVID-19. Imunitní modulace RAPA-501 probíhá způsobem nezávislým na T buněčných receptorech, což umožňuje běžnou buněčnou terapii. Konečně v experimentálních modelech virové pneumonie a ARDS zprostředkovávají TREG buňky ochranný účinek na plicní alveolární tkáň. Vzhledem k tomuto jedinečnému mechanismu účinku, který zahrnuje jak protizánětlivé, tak i tkáňové ochranné účinky, je alogenní produkt T-buněk RAPA-501 zvláště vhodný pro hodnocení v prostředí ARDS 3. fáze související s COVID-19.

Obecně platí, že klasické autoimunitní onemocnění, neurodegenerativní onemocnění a virově indukované zánětlivé onemocnění jsou řízeny převahou odpovědí typu Th1/Th17 s relativní nedostatečností kontraregulačních imunosupresivních podskupin Th2 a TREG. Buňky TREG, které jsou částečně definovány svou expresí transkripčního faktoru FOXP3, byly rozsáhle studovány v experimentálních modelech pro jejich schopnost modulovat autoimunitní onemocnění, neurodegenerativní onemocnění a transplantační komplikace, včetně reakce štěpu proti hostiteli (GVHD) a štěpu. odmítnutí. Důležité je, že produkce IL-2 nebo exogenního podávání IL-2 T buňkami řídí zánět plic během experimentální virové infekce; proto, vzhledem ke známé úloze TREG buněk jako konzumentů IL-2, existuje silné mechanické zdůvodnění pro prospěšný příspěvek TREG buněk během virem řízeného zánětu plic. Kromě toho v experimentálních myších modelech virem indukovaného zánětu plic a poškození plic intervence, které zvýšily počet a funkci buněk TREG, urychlily opravu poškození plic. A Th2 buňky, které jsou zčásti definovány svou expresí transkripčního faktoru GATA3, byly popsány před třiceti lety jako silná kontraregulační populace, která brání převaze Th1 buněk. Je důležité poznamenat, že klinická data naznačují, že manévry, které zvyšují populaci imunosupresivních buněk, včetně buněk TREG, mohou snížit závažné zánětlivé onemocnění, jako je reakce štěpu proti hostiteli, aniž by narušily antivirovou imunitu. Navíc jak v experimentálních modelech, tak v klinických studiích může vhodná hladina TREG buněk vést k celkovému zlepšení plicního zánětu během virové bronchiolitidy. Souhrnně tato zjištění naznačují, že T buňky exprimující kombinovaný fenotyp TREG/Th2 by předvídatelně přinesly příznivé účinky v nastavení virem indukovaného plicního zánětu a poškození spojeného se závažným onemocněním COVID-19 stadia 3.

Klinické studie hodnotily buňky typu TREG i Th2 pro různé stavy, zejména komplikace transplantace. Obecně se předpokládá, že přirozené (n)TREG buňky odvozené od thymu exprimují stabilnější fenotyp než buňky (i)TREG indukované postthymem; pro srovnání, iTREG buňky mohou zprostředkovat silnější supresi. Nicméně jak nTREG, tak iTREG buňky jsou citlivé na diferenciační plasticitu, což vyvolává obavy, že potenciálně terapeutická TREG populace by se mohla in vivo přeměnit na patogenní fenotypy Th1/Th17. Ex vivo expandované (n)TREG buňky byly hodnoceny v rámci alogenní transplantace hematopoetických buněk (HCT) s použitím dárců pupečníkové krve; v poslední době stejná výzkumná skupina vyvinula ex vivo rozšířenou (i)TREG buněčnou terapii k omezení transplantačních komplikací. Kromě toho byly ex vivo expandované buňky nTREG hodnoceny v podmínkách diabetes mellitus I. typu; tato klinická studie zjistila, že terapie TREG je bezpečná a alespoň přechodně účinná při zlepšování kontroly onemocnění. Kromě toho, v podmínkách amyotrofické laterální sklerózy (ALS), což je onemocnění propagované těžkou periferní a centrální zánětlivou odpovědí vyvolanou Th1, klinická studie adoptivního přenosu buněk nTREG zjistila, že intervence byla bezpečná a ukázala se slibná z hlediska Zlepšení onemocnění ALS. A konečně, ve fázi II studie terapie Th2 buňkami rezistentními na rapamycin v prostředí alogenní HCT s nízkou intenzitou byl adoptivní přenos Th2 buněk bezpečný a spojený s posunem k polarizaci Th2 in vivo, zachováním přihojení dárce, stabilizací smíšeného chimérismu , nízký výskyt GVHD a silné protinádorové účinky u pacientů s refrakterní hematologickou malignitou. Souhrnně tyto výsledky klinických studií naznačují, že adoptivní přenos populací typu TREG a Th2 lze bezpečně podávat, dokonce i v alogenním prostředí HCT, a může zprostředkovat prospěšnou modulaci zánětlivých stavů.

Výroba ex vivo může být použita k vytvoření indukovaných (i)TREG buněk z post-thymické zásoby periferních T buněk. V současném protokolu se způsob výroby zaměří na inhibici mTOR, což je zavedená intervence, která podporuje indukci buněk TREG. V kombinaci s inhibicí mTOR kultivační systém, který se používá, obsahuje cytokiny, které podporují fenotyp Th2 i TREG, jmenovitě IL-4, TGF-beta a IL-2. Nakonec bude protokol zahrnovat produkt TREG/Th2 buněk složený z podskupin CD4+ i CD8+ T buněk, protože tyto kontraregulační podskupiny T buněk exprimují diferenciální repertoáry receptorů T buněk (TCR) a rozmanitost efektorových mechanismů, které mohou potenciálně zvýšit protizánětlivý účinek. Pro výrobu RAPA-501 se mononukleární buňky periferní krve odebírají z aferézy v ustáleném stavu a podrobují se následujícímu dvoustupňovému kultivačnímu zásahu: v kroku 1 vede krok vážného hladovění k dediferenciaci T buněk, která je realizována oběma způsoby. selektivní využití médií a přidání farmaceutických činidel schválených FDA, která silně inhibují signalizaci mTOR; a v kroku 2 dochází k opětovné diferenciaci T buněk pomocí kostimulačních činidel a polarizačních cytokinů typu Th2 a TREG. Po 6 dnech v kultuře je výsledná populace TREG/Th2 kryokonzervována v alikvotech na jedno použití v terapeutických dávkách řízených protokolem. T buňky cytokinového fenotypu typu II jsou charakterizovány částečně svou expresí transkripčního faktoru GATA3, zatímco populace regulačních T buněk jsou identifikovány částečně svou expresí transkripčního faktoru FOXP3. Při zahájení kultivace velmi nízká frekvence T buněk exprimuje buď GATA3 nebo FOXP3. Na rozdíl od toho buněčný produkt RAPA-501 vyrobený v kultivačních podmínkách TREG/Th2 exprimuje vysokou frekvenci T buněk, které jsou buď jednou pozitivní na GATA3, jednou pozitivní na FOXP3, nebo dvojitě pozitivní na GATA3 i FOXP3. Důležité je, že tento profil transkripčních faktorů je exprimován jak ve vyrobených CD4+, tak v CD8+ T buňkách. Je důležité poznamenat, že byly definovány populace CD4+ i CD8+ T buněk s funkcí TREG, včetně populace CD8+ TREG, která silně potlačuje GVHD; je potenciálně výhodné mít v terapeutickém produktu zastoupeny obě podskupiny, protože buňky CD4+ a CD8+ TREG využívají různé efektorové mechanismy.

Populace regulačních T buněk mohou potlačit patogenní populace efektorových T buněk několika definovanými mechanismy, včetně exprese molekul ektonukleotidázy CD39 a CD73, které působí tak, že hydrolyzují prozánětlivý ATP směrem k imunosupresivnímu adenosinovému substrátu. Buňky TREG, které exprimují CD39, mají skutečně zvýšenou supresivní funkci a jsou spojovány s vyřešením zánětlivého onemocnění střev. Dále je supresivní funkce lidských TREG buněk zprostředkována částečně CD73. T buňky vyrobené v kultivačních podmínkách TREG/Th2 mají zvýšenou expresi efektorových molekul spojených s TREG, CD39 a CD73. Kromě CD39/CD73 ektonukleotidáz byla funkce TREG buněk také korelována s expresí CD103, což je integrin, který určuje lokalizaci epiteliálních lymfocytů. Signalizace CD103 a IL-2 receptoru skutečně spolupracují na udržení imunitní tolerance ve střevní sliznici; dále jsou buňky TREG exprimující CD103 kritické pro zlepšení experimentální chronické GVHD. T buňky vyrobené v kultivačních podmínkách TREG/Th2 mají zvýšenou expresi TREG efektorové molekuly CD103.

V experimentálních modelech je účinnost adoptivní terapie T buňkami závislá na úspěšném přihojení a in vivo perzistenci T buněk. Důležité je, že stav diferenciace T buněk pomáhá diktovat perzistenci in vivo, přičemž méně diferencované buňky mají zvýšenou perzistenci. Myší T buňky rezistentní na rapamycin, které exprimovaly fenotyp T centrální paměti (TCM), měly zvýšený in vivo potenciál přihojení štěpu ve srovnání s kontrolními T buňkami. Kromě toho měly lidské T buňky rezistentní na rapamycin také zvýšené přihojení v modelu xenogenní reakce štěpu proti hostiteli z člověka do myši. T buňky se sníženou diferenciací vzhledem k populaci T efektorové paměti (TEM) mají zvýšenou perzistenci in vivo a zprostředkovávají zvýšené in vivo účinky, včetně podskupiny TCM, podskupiny naivních T buněk a nověji paměti T kmenových buněk (TSCM). podmnožina. Tento vztah mezi stavem diferenciace T buněk a funkcí T buněk in vivo je relevantní pro TREG buňky, protože: (1) TREG buňky fenotypu TCM byly účinnější při snižování experimentálního GVHD ve srovnání s TREG buňkami fenotypu TEM; a (2) TREG buňky, které exprimovaly marker kmenových buněk CD150, byly vysoce účinné pro prevenci rejekce štěpu kmenových buněk. T buňky vyrobené v kultivačních podmínkách TREG/Th2 jsou obohaceny o buňky, které mají snížený stav diferenciace konzistentní s podskupinou T kmenových buněk, včetně exprese markeru CD150.

Je také důležité posoudit profil sekrece cytokinů vyrobených buněk RAPA-501. Za prvé je kritické, že buněčný produkt je schopen sekrece IL-4, což je hnací cytokin pro následnou Th2 diferenciaci. Za druhé, je žádoucí, aby adoptivně přenesená populace T buněk byla schopná sekretovat IL-2, protože tato kapacita indikuje progenitorovou funkci, která umožňuje T buňkám snadněji expandovat in vivo bez potřeby exogenního IL-2. Konečně je důležité, že buněčná populace RAPA-501 má sníženou sekreci cytokinů typu Th1 nebo Th17 IFN-gama, TNF-alfa, IL-17 a GM-CSF. Vyrobený buněčný produkt RAPA-501 vylučuje IL-4 a IL-2 s minimální sekrecí cytokinů typu Th1 nebo Th17.

Regulační T buňky mohou být také částečně definovány jejich schopností potlačovat proliferaci nebo funkci efektorových T buněk. Důležité je, že vyrobené TREG/Th2 buňky silně potlačují Th1/Tc1 buněčnou sekreci mnoha zánětlivých cytokinů, včetně IFN-gama, GM-CSF a TNF-alfa. K posouzení mechanismu suprese byly provedeny experimenty s použitím testu transwell, kdy efektorové T buňky a RAPA-501 buňky jsou odděleny filtrem, který zabraňuje kontaktu mezi buňkami, ale umožňuje buněčnou komunikaci pomocí malých rozpustných mediátorů, jako jsou cytokiny. Buňky RAPA-501 působily způsobem nezávislým na TCR, aby potlačily kapacitu sekrece cytokinů efektorových T buněk. Protože do komůrky transwell obsahující buňky RAPA-501 nebyla poskytnuta žádná kostimulace, nevyžadovaly buňky RAPA-501 kostimulaci k modulaci hladin zánětlivých cytokinů, včetně IL-2, IFN-gama, GM-CSF a TNF-alfa. . Následující cytokiny a chemokiny byly redukovány buňkami RAPA-501 v tomto transwell testu, s relativně stejnou supresí zprostředkovanou CD4+ a CD8+ podskupinami buněk RAPA-501: CCL1, CCL2, CCL7, CCL11, CCL13, CCL17, CCL20, CCL22, CCL26 CXCL1, CXCL10, CXCL11, CXCL12, IL-6, IFN-gama, GM-CSF a IL-10. Schopnost TREG buněk konzumovat IL-2 je běžně popisovaným jevem, ačkoli předchozí studie identifikovaly požadavek mezibuněčného kontaktu pro spotřebu IL-2. Buňky RAPA-501 jako takové jsou jedinečně schopné modulovat hladinu více zánětlivých cytokinů způsobem nezávislým na kontaktu. Tyto výsledky naznačují, že buňky RAPA-501 představují vhodného kandidáta pro neutralizaci mnoha cytokinů a chemokinů spojených s různými nemocemi, včetně virem indukovaného zánětu plic. Ve světle této schopnosti buněčného produktu RAPA-501 potlačovat zánět zprostředkovaný T buňkami způsobem nezávislým na TCR je terapie RAPA-501 vysoce vhodná pro alogenní, běžně dostupné léčebné aplikace.

Další experimenty byly provedeny za účelem vyhodnocení, zda buněčný produkt RAPA-501 může také regulovat lidské mikrogliální buňky CNS, což jsou buňky odvozené od myeloidů, které jsou analogické s periferní populací monocytů. Pro vyhodnocení, zda buněčný produkt RAPA-501 může modulovat prozánětlivé mikrogliální buňky způsobem nezávislým na kontaktu, byla testována schopnost buněk RAPA-501 snižovat zánětlivý stav mikrogliální buněčné linie HMC3 v testu transwell. Buňky RAPA-501 snižovaly buněčnou sekreci HMC3 prozánětlivých cytokinů IL-6 a IFN-gama a prozánětlivého chemokinu IP-10 při relativně nízkém poměru buněk RAPA-501 k mikrogliálním buňkám 1:40. Tyto výsledky ukazují, že produkt RAPA-501 je schopen inhibovat sekreci cytokinů a chemokinů z populací odvozených od myeloidů způsobem nezávislým na kontaktu a TCR, čímž poskytuje další zdůvodnění pro alogenní, běžně dostupné použití RAPA- 501 produkt.

Byl také hodnocen buněčný produkt RAPA-501 na stabilitu fenotypu T buněk. To znamená, že bylo stanoveno, že limitujícím faktorem buněčné terapie TREG může být například diferenciační plasticita, kdy mohou být buňky TREG ovlivněny zánětlivými cytokiny, aby ztratily své vlastnosti TREG a přijaly zánětlivý stav typu Th1, který pak může podporovat patogeneze onemocnění. K vyřešení této možnosti byla využita kapacita buněk RAPA-501 modulovat transkripční faktory diferenciace T buněk po prodlouženém kultivačním intervalu, který zahrnoval kostimulaci T buněk, nepřítomnost inhibitorů mTOR a přítomnost polarizujících zánětlivých cytokinů IFN-alfa a IL -6 byl studován. Tyto experimenty ukázaly, že buněčný produkt RAPA-501 měl pozoruhodnou diferenciační stabilitu (pokračující exprese FOXP3 a GATA3 v podskupinách CD4+ a CD8+; chybějící up-regulace TBET).

Stručně řečeno, buňky RAPA-501 exprimují fenotyp konzistentní s populací regulačních T buněk, včetně: stabilní exprese TREG a Th2 transkripčních faktorů FOXP3 a GATA3; exprese funkčních molekul TREG CD39, CD73 a CD103; exprese sníženého stavu diferenciace T buněk, včetně exprese markeru kmenových buněk CD150; sekrece cytokinů typu Th2 s minimální sekrecí cytokinů typu Th1/Th17; funkční supresivní schopnost jak proti efektorovým Th1/Tc1 buňkám, tak prozánětlivým myeloidním buňkám, včetně snížených hladin mnohočetných zánětlivých cytokinů a chemokinů; a schopnost inhibovat zánětlivé efektory způsobem nezávislým na kontaktu a TCR. Souhrnně tyto vlastnosti produktu RAPA-501 předpovídají, že tato terapie představuje nového a slibného kandidáta na léčbu ARDS souvisejícího s COVID-19.

Toto je první studie fáze 1/fáze 2b u člověka hodnotící alogenní buněčnou terapii RAPA-501 u účastníků s ARDS souvisejícím s COVID-19. Budou hodnoceny dvě kohorty fáze 1, jmenovitě kohorta 1 s nízkou dávkou (40 x 10^6 buněk/infuze) a kohorta 2 s vysokou dávkou (160 x 10^6 buněk/infuze); tato složka fáze 1 bude využívat toxicitu omezující dávku (DLT) jako primární cílový bod. Za předpokladu, že je bezpečnost prokázána ve složce studie fáze 1, může být každá kohorta dávky RAPA-501 hodnocena v randomizované složce fáze 2b. V komponentě fáze 2b budou pro každou hladinu dávky RAPA-501, která byla stanovena jako bezpečná, pacienti randomizováni k podání buněk RAPA-501 (n=19) nebo placeba (n=19). Po infuzi buněk RAPA-501 nebo placeba budou tyto randomizované kohorty pokračovat v terapii standardní péče (neřízené protokolem). Primárním cílovým parametrem studie fáze 2b je 30denní mortalita se statistickým cílem snížit mortalitu u příjemců RAPA-501 ve srovnání s randomizovanou, placebem kontrolovanou kohortou.

Účastníci studie musí být hospitalizovaní pacienti s ARDS souvisejícími s COVID-19, konkrétně: infekce SARS-CoV-2, jak bylo stanoveno pomocí RT-PCR nebo ekvivalentního testu; plicní infiltrát při radiologickém vyšetření; a diagnóza ARDS vyžadující intenzivní respirační podporu včetně neinvazivní ventilace, jako je vysokoprůtoková nosní kanyla nebo mechanická ventilace. Studie se skládá z: (1) kroku zápisu do studia (screeningu); a (2) po potvrzení způsobilosti bude provedena infuze buněk RAPA-501. V kohortě 1 bude infuze buněk RAPA-501 v dávce 40 x 10^6 buněk/infuzi; tři účastníci budou zpočátku léčeni s týdenním oddělením účastníků této složky fáze 1, aby se vyhodnotila DLT, která bude definována jako toxicita stupně 3 nebo vyšší přisouzená buňkám RAPA-501 během 7 dnů po infuzi. V jakémkoli bodě, kdy je terapie kohorty 1 považována za bezpečnou (buď 0/3 nebo 1/6 s DLT), může být terapie kohorty 1 RAPA-501 vyhodnocena v randomizované složce studie fáze 2b, aby se řešil primární cíl studie týkající se na 30denní úmrtnost. V kterémkoli okamžiku, kdy je terapie kohorty 1 považována za bezpečnou, může být zahájena léčba na kohortě 2, která vyhodnotí infuzi buněk RAPA-501 v dávce 160 x 10^6 buněk/infuzi. Stejným způsobem jako u kohorty 1, pokud je terapie kohorty 2 považována za bezpečnou, může být terapie kohorty 2 RAPA-501 hodnocena v randomizované složce studie fáze 2b, aby se řešil primární cíl studie týkající se 30denní mortality. Studie se bude skládat ze tří hlavních fází: (1) výše podrobný 30denní interval týkající se primárních cílů studie; (2) prodloužený, celkový 90denní interval pro pokračování relativně intenzivního klinického sledování potenciálních koncových bodů účinnosti a bezpečnosti; a (3) prodloužený, celkový 6měsíční interval pro zajištění dlouhodobého klinického sledování a pokračování ve sledování laboratorních parametrů souvisejících s imunitními a virovými koncovými body.