RAPA-501-Allo Therapy of COVID-19-ARDS

Den første i menneskelige fase 1-studiekomponenten vil evaluere to dosenivåer av RAPA-501-ALLO hyllevare hos pasienter med COVID-19-relatert ARDS, med nøkkelendepunkter for sikkerhet, biologiske og potensielle sykdomsmodifiserende effekter. Den randomiserte, dobbeltblinde, placebokontrollerte fase 2b-studiekomponenten vil evaluere infusjon av RAPA-501 ALLO hyllevareceller eller en kontrollinfusjon, med det primære endepunktet som vurderer om RAPA-501-celler reduserer 30-dagers dødelighet.

COVID-19-pandemien er en katastrofe som utspiller seg med progressiv sykelighet og dødelighet. Per 6. april 2021 har anslagsvis 132,1 millioner mennesker fått viruset og 2 866 000 dødsfall har resultert globalt. USA har de høyeste totalene med anslagsvis 30,8 millioner mennesker diagnostisert og 556 000 dødsfall. USA har de høyeste totalene med anslagsvis 22,4 millioner mennesker diagnostisert og 375 000 dødsfall. I stadier 1 og 2 av COVID-19 er viral spredning i pasienten dominerende. Som sådan fokuserer terapeutiske intervensjoner på immunmolekyler (rekonvalescent serum, monoklonale antistoffer) og antivirale medisiner (remdesivir). I markant kontrast er den mest alvorlige og dødelige formen for COVID-19, stadium 3, ikke drevet av viral spredning, men av en ut-av-kontroll immunrespons (hyperinflammasjon) forårsaket av økninger i immunmolekyler kjent som cytokiner og kjemokiner. Som sådan fokuserer terapeutiske intervensjoner for stadium 3 sykdom på antiinflammatoriske medisiner som anti-cytokinbehandling (anti-IL-6-medisiner) eller kortikosteroidbehandling. Dessverre adresserer ikke slike intervensjoner hele patogenesen av stadium 3 COVID-19, som inkluderer hyperinflammasjon på grunn av "cytokinstorm" og "kjemokinstorm", vevsskade, hyperkoagulasjon og multiorgansvikt (inkludert lunge, hjerte, nyre og hjerne). Lungekomponenten i stadium 3 sykdom inkluderer akutt respiratorisk distress syndrom (ARDS), som er en siste vanlig bane for pasientdød på grunn av en myriade av tilstander, inkludert lungebetennelse, sepsis og traumer. Det er et stort behov for nye cellulære behandlinger som kan levere både en bredbasert immunmodulasjonseffekt og en vevsregenererende effekt, slik som RAPA-501-ALLO hyllevare allogene hybrid TREG/Th2-celler.

Mekanismen for dødelig lungebetennelse i eksperimentell murin koronavirusinfeksjon er mediert av medfødt inflammasomaktivering, en resulterende robust infiltrasjon av inflammatoriske monocytter og makrofager, og en påfølgende økning i flere pro-inflammatoriske cytokiner og kjemokiner. Viktigere er at den adaptive CD4+ og CD8+ T-celleresponsen på eksperimentell koronavirusinfeksjon kan være enten helbredende eller sykdomsforplantende. Viral-indusert lungebetennelse har også blitt evaluert i ikke-menneskelige primatmodeller, som har bekreftet at dysregulert immunaktivering under viral lungebetennelse involverer ubalanse i T-celler, en nedstrøms monocytt-avledet inflammatorisk kaskade og resulterende epitelcelleskade. Hos mennesker korrelerer alvorlighetsgraden av virusindusert nedre luftveisinfeksjon med økt antall effektorminne CD8+ T-celler i luftveiene. Som nylig gjennomgått, representerer menneskelig koronavirusinfeksjon en pågående kamp mellom virus og vert, med arten av responsen som dikterer sykdomsbehandling eller alternativt forverret lungesykdom. Det finnes bevis på at det adaptive immunsystemet bidrar til lungebetennelse under SARS-assosiert Coronavirus (SARS-CoV) sykdom: det vil si at bronkoalveolær væske fra slike forsøkspersoner hadde økt T-celletall og økte Th1-assosierte molekyler IL-12, IFN-gamma, og IP-10. Denne nedstrøms adaptive T-celle-medierte inflammatoriske responsen er delvis drevet av SARS-Co-V-proteinet viroporin 3a. Spesifikt aktiverer viroporinmolekyler NLRP3-inflammasomet som forbinder medfødte til adaptive inflammatoriske responser. Videre uttrykker både SARS-CoV og SARS-CoV-2 et ORF3a-molekyl med åpen leseramme, som også aktiverer NLRP3-inflammasomet.

Naturen til immunitet under oppløsning av symptomatisk COVID-19-infeksjon har nylig blitt rapportert, nemlig: fremvekst av antistoff-utskillende celler og CD4+ T-follikulære hjelpeceller; økning i perforin- og granzyme-uttrykkende CD8+ T-celler; og relativ mangel på en økning i pro-inflammatoriske cytokiner og kjemokiner. I markant kontrast hadde pasienter med alvorlig COVID-19-sykdom sterkt økte plasmanivåer av cytokiner (inkludert IL-2 og TNF-alfa) og kjemokiner (inkludert IP-10 og MIP-1-alfa) (Huang et al., Lancet, 2020). Samlet indikerer disse resultatene at pro-inflammatoriske cytokin- og kjemokinresponser som oppstår ved alvorlig COVID-19 er skadelige og at effektive antiinflammatoriske tilnærminger til slutt kan vise seg å være terapeutiske. Imidlertid, som tidligere beskrevet, er den mer avanserte stadium 3 COVID-19 sykdommen preget av en ARDS-komponent, og cytokinstorm, som sådan bør nye tilnærminger for å behandle COVID-19 viral lungebetennelse optimalt inkorporere både et antiinflammatorisk element og en vevsbeskyttelse/vevsreparasjonselement.

Fase 3 COVID-19 har en estimert 30-dagers dødelighet på over 50 % til tross for bruk av intensivavdelingen, mekanisk ventilasjon og støttebehandlinger for å håndtere ARDS og multiorgansvikt. Smalt virkende målrettede antiinflammatoriske tilnærminger som anti-IL-6-terapi har ikke vært spesielt effektive i stadium 3 COVID-19, og den brede antiinflammatoriske farmasøytiske tilnærmingen til kortikosteroidbehandling, har bare moderat temperert stadium 3 sykdom i noen studier. Celleterapi blir også evaluert i stadium 3 COVID-19, spesielt mesenkymale stromale celler (MSC) og nå, med den nåværende RAPA-501-ALLO-protokollen, regulatoriske T (TREG) celler. TREG-terapi har en virkningsmekanisme som inkluderer en mangefasettert antiinflammatorisk effekt, som setter TREG-terapi i forkant av fremtidig kurativ terapi av et bredt spekter av autoimmune og nevrodegenerative sykdommer, pluss transplantasjonskomplikasjoner, som graft-versus-host sykdom (GVHD) og graftavstøtning. I tillegg kan TREG-terapi gi en vevsregenerativ effekt, noe som plasserer TREG-celleterapi i spissen for nye regenerative medisintiltak for å reparere en myriade av vevsbaserte sykdommer, som sykdommer i hud, muskler, lunger, lever, tarm, hjerte (hjerteinfarkt) og hjerne (slag). RAPA-501-ALLO hyllevare-celleterapi tilbyr denne potensielle doble trusselmekanismen som inkluderer både antiinflammatoriske og vevsreparasjonseffekter for effektiv behandling av COVID-19 og flere dødelige tilstander.

RAPA-501-ALLO-celler er generert fra friske frivillige, kryokonservert, banket, og er deretter tilgjengelig for hyllebehandling når som helst. Under produksjon blir T-celler "omprogrammert" ex vivo ved hjelp av en ny, patentert 7-dagers totrinnsprosess som involverer T-celle-de-differensiering og påfølgende re-differensiering mot de to sentrale anti-inflammatoriske programmene, TREG- og Th2-veiene, dermed skape et "hybrid" produkt. Hybridfenotypen hemmer inflammatoriske veier som er operative i COVID-19, inkludert modulering av flere cytokiner og kjemokiner, som tiltrekker inflammatoriske celler inn i vev for initiering av multiorganskade. Hybrid TREG- og Th2-fenotypen til RAPA-501-ALLO-celler kryssregulerer Th1- og Th17-populasjoner som initierer hyperinflammasjon av COVID-19. RAPA-501 immunmodulering skjer på en T-cellereseptor-uavhengig måte, og tillater dermed hyllebehandling. Til slutt, i eksperimentelle modeller av viral lungebetennelse og ARDS, medierer TREG-celler en beskyttende effekt på det lungealveolære vevet. På grunn av denne unike virkningsmekanismen som involverer både anti-inflammatoriske og vevsbeskyttende effekter, er det allogene RAPA-501 T-celleproduktet spesielt egnet for evaluering i forbindelse med Stage 3 COVID-19-relatert ARDS.

Generelt er klassisk autoimmun sykdom, nevrodegenerativ sykdom og virusindusert inflammatorisk sykdom drevet av overvekt av Th1/Th17-type responser med en relativ insuffisiens av de motregulerende immunundertrykkende Th2- og TREG-undergruppene. TREG-celler, som delvis er definert av deres uttrykk for FOXP3-transkripsjonsfaktor, har blitt omfattende studert i eksperimentelle modeller for deres evne til å modulere autoimmun sykdom, nevrodegenerativ sykdom og transplantasjonskomplikasjoner, inkludert graft-versus-host disease (GVHD) og graft avslag. Det er viktig at T-celleproduksjon av IL-2 eller eksogen IL-2-administrasjon driver lungebetennelse under eksperimentell virusinfeksjon; Derfor, gitt TREG-cellers kjente rolle som forbruker av IL-2, er det en sterk mekanistisk begrunnelse for et gunstig bidrag fra TREG-celler under virusdrevet lungebetennelse. Videre, i eksperimentelle murine modeller av virusindusert lungebetennelse og lungeskade, akselererte intervensjoner som økte TREG-celleantall og funksjon reparasjonen av lungeskade. Og Th2-celler, som delvis er definert av deres uttrykk for GATA3-transkripsjonsfaktor, ble beskrevet for tretti år siden som en kraftig motregulerende populasjon for å forhindre overvekt av Th1-celler. Det er viktig å merke seg at kliniske data indikerer at manøvrer som øker immunsuppressive cellepopulasjoner, inkludert TREG-celler, kan redusere alvorlig inflammatorisk sykdom som graft-versus-host-sykdom uten å svekke antiviral immunitet. I tillegg, i både eksperimentelle modeller og kliniske studier, kan et passende nivå av TREG-celler resultere i en generell forbedring i lungebetennelse under viral bronkiolitt. Samlet indikerer disse funnene at T-celler som uttrykker en kombinert TREG/Th2-fenotype forutsigbart ville gi gunstige effekter i setting av viral-indusert lungebetennelse og skade assosiert med alvorlig stadium 3 COVID-19 sykdom.

Kliniske studier har evaluert både TREG- og Th2-type celler for forskjellige tilstander, mest fremtredende transplantasjonskomplikasjoner. Generelt antas thymus-avledede naturlige (n)TREG-celler å uttrykke en mer stabil fenotype enn post-thymus-induserte (i)TREG-celler; til sammenligning kan iTREG-celler mediere kraftigere undertrykkelse. Ikke desto mindre er både nTREG- og iTREG-celler mottakelige for differensieringsplastisitet, noe som skaper bekymring for at en potensielt terapeutisk TREG-populasjon kan konvertere til patogene Th1/Th17-fenotyper in vivo. Ex vivo utvidede (n)TREG-celler ble evaluert i forbindelse med allogen hematopoietisk celletransplantasjon (HCT) ved bruk av navlestrengsblodgivere; Nylig har den samme forskningsgruppen utviklet ex vivo utvidet (i)TREG-celleterapi for å begrense transplantasjonskomplikasjoner. I tillegg har ex vivo utvidede nTREG-celler blitt evaluert i forbindelse med type I diabetes mellitus; denne kliniske studien fant at TREG-behandling var trygg og i det minste forbigående effektiv for å forbedre sykdomskontroll. Videre, i sammenheng med amyotrofisk lateral sklerose (ALS), som er en sykdom forplantet av en alvorlig Th1-drevet perifer og sentral inflammatorisk respons, identifiserte en klinisk studie av nTREG-celleadopsjonsoverføring at intervensjonen var trygg og viste lovende mht. ALS sykdomsforbedring. Til slutt, i en fase II-studie av rapamycin-resistent Th2-celleterapi i innstillingen av lav-intensitets allogen HCT, var adoptiv Th2-celleoverføring trygg og assosiert med et skifte mot Th2-polarisering in vivo, bevaring av donorengraftment, stabilisering av blandet kimærisme , lav grad av GVHD og potente antitumoreffekter hos pasienter med refraktær hematologisk malignitet. Samlet indikerer disse kliniske studieresultatene at adoptiv overføring av TREG- og Th2-type populasjoner kan administreres trygt, selv i allogen HCT-innstilling, og kan mediere fordelaktig modulering av inflammatoriske tilstander.

Ex vivo-produksjon kan brukes til å generere induserte (i)TREG-celler fra post-tymisk pool av perifere T-celler. I gjeldende protokoll vil produksjonsmetoden fokusere på mTOR-hemming, som er en etablert intervensjon som fremmer induksjon av TREG-celler. I kombinasjon med mTOR-hemming, inkorporerer kultursystemet som brukes cytokiner som fremmer både en Th2- og en TREG-fenotype, nemlig IL-4, TGF-beta og IL-2. Til slutt vil protokollen inkludere et TREG/Th2-celleprodukt som består av både CD4+ og CD8+ T-celleundersett, ettersom disse motregulerende T-celleundergruppene uttrykker differensielle T-cellereseptor (TCR) repertoarer og et mangfold av effektormekanismer som potensielt kan forbedre en anti-inflammatorisk effekt. For produksjon av RAPA-501 samles perifere mononukleære blodceller fra en steady-state aferese og utsettes for følgende to-trinns kulturintervensjon: i trinn 1 resulterer et alvorlig sulttrinn i T-celle-de-differensiering, som realiseres gjennom både selektiv medieutnyttelse og tillegg av FDA-godkjente farmasøytiske midler som kraftig hemmer mTOR-signalering; og i trinn 2 skjer re-differensiering av T-celler ved bruk av co-stimuleringsmidler og Th2- og TREG-type polariserende cytokiner. Etter 6 dager i kultur blir den resulterende TREG/Th2-populasjonen kryokonservert i engangsprøver ved protokolldrevne terapeutiske doser. T-celler av type II cytokin-fenotype er delvis karakterisert ved deres uttrykk for transkripsjonsfaktoren GATA3, mens regulatoriske T-cellepopulasjoner identifiseres delvis ved deres uttrykk for FOXP3-transkripsjonsfaktor. Ved kulturinitiering uttrykker en svært lav frekvens av T-celler enten GATA3 eller FOXP3. I motsetning til dette uttrykker RAPA-501-celleproduktet produsert under TREG/Th2-kulturforholdene en høy frekvens av T-celler som enten er enkeltpositive for GATA3, enkeltpositive for FOXP3 eller dobbeltpositive for både GATA3 og FOXP3. Det er viktig at denne transkripsjonsfaktorprofilen uttrykkes i både produserte CD4+ og CD8+ T-celler. Det er viktig å merke seg at både CD4+ og CD8+ T-cellepopulasjoner med TREG-funksjon er definert, inkludert en CD8+ TREG-populasjon som kraftig undertrykker GVHD; det er potensielt fordelaktig å ha begge undergruppene representert i et terapeutisk produkt fordi CD4+ og CD8+ TREG-celler bruker differensielle effektormekanismer.

Regulatoriske T-cellepopulasjoner kan undertrykke patogene effektor T-cellepopulasjoner ved flere definerte mekanismer, inkludert gjennom ekspresjon av CD39 og CD73 ektonukleotidasemolekyler, som virker for å hydrolysere pro-inflammatorisk ATP mot det immunundertrykkende adenosinsubstratet. TREG-celler som uttrykker CD39 har faktisk økt undertrykkende funksjon og har vært assosiert med oppløsning av inflammatorisk tarmsykdom. Videre formidles undertrykkende funksjon av humane TREG-celler delvis av CD73. T-celler produsert i TREG/Th2-kulturbetingelsen har en økning i ekspresjon av de TREG-assosierte effektormolekylene, CD39 og CD73. I tillegg til CD39/CD73-ektonukleotidasene, har TREG-cellefunksjon også blitt korrelert med ekspresjon av CD103, som er et integrin som dikterer epitellymfocyttlokalisering. CD103- og IL-2-reseptorsignalering samarbeider for å opprettholde immuntoleranse i tarmslimhinnen; videre er CD103-uttrykkende TREG-celler avgjørende for forbedring av eksperimentell kronisk GVHD. T-celler produsert i TREG/Th2-kulturbetingelsen har økt ekspresjon av TREG-effektormolekylet CD103.

I eksperimentelle modeller er effekten av adoptiv T-celleterapi avhengig av vellykket engraftment og in vivo T-celle-persistens. Viktigere er at T-celledifferensieringstilstanden hjelper til med å diktere in vivo persistens, med mindre differensierte celler som har økt utholdenhet. Murine rapamycin-resistente T-celler, som uttrykte en T-sentralminne (TCM) fenotype, hadde økt in vivo-engraftmentpotensial i forhold til kontroll-T-celler. I tillegg hadde humane rapamycin-resistente T-celler også økt engraftment i en human-in-murin modell av xenogen graft-versus-host-sykdom. T-celler med redusert differensiering i forhold til T-effektorminne (TEM)-populasjonen har økt in vivo-utholdenhet og medierer økte in vivo-effekter, inkludert TCM-undergruppen, den naive T-celle-undergruppen, og mer nylig, T-stamcelleminnet (TSCM) delmengde. Dette forholdet mellom T-celledifferensieringsstatus og in vivo T-cellefunksjon er relevant for TREG-celler, ettersom: (1) TREG-celler av TCM-fenotype var mer effektive til å redusere eksperimentell GVHD i forhold til TREG-celler av TEM-fenotype; og (2) TREG-celler som uttrykte stamcellemarkøren CD150 var svært effektive for forebygging av stamcelletransplantatavstøtning. T-celler produsert i TREG/Th2-kulturbetingelsene er anriket for celler som har en redusert differensieringstilstand i samsvar med en T-stamcelleundergruppe, inkludert ekspresjon av CD150-markøren.

Det er også viktig å vurdere cytokinsekresjonsprofilen til de produserte RAPA-501-cellene. For det første er det avgjørende at celleproduktet er i stand til IL-4-sekresjon, som er drivercytokinet for påfølgende Th2-differensiering. For det andre er det ønskelig at en adoptivt overført T-cellepopulasjon er i stand til å utskille IL-2, da denne kapasiteten indikerer en progenitorfunksjon som tillater T-celler å utvide seg lettere in vivo uten behov for eksogen IL-2. Til slutt er det viktig at RAPA-501-cellepopulasjonen har redusert sekresjon av Th1- eller Th17-type cytokinene IFN-gamma, TNF-alpha, IL-17 og GM-CSF. Det produserte RAPA-501-celleproduktet utskiller IL-4 og IL-2 med minimal sekresjon av Th1- eller Th17-type cytokiner.

Regulatoriske T-celler kan også delvis defineres ved deres evne til å undertrykke spredningen eller funksjonen til effektor-T-celler. Det er viktig at produserte TREG/Th2-celler kraftig undertrykker Th1/Tc1-cellesekresjon av flere inflammatoriske cytokiner, inkludert IFN-gamma, GM-CSF og TNF-alfa. For å vurdere mekanismen for undertrykkelse ble det utført eksperimenter ved bruk av transwell-analysen, hvor effektor-T-celler og RAPA-501-celler separeres med et filter som forhindrer celle-til-celle-kontakt, men tillater cellekommunikasjon med små løselige mediatorer som cytokiner. RAPA-501-celler virket på en TCR-uavhengig måte for å undertrykke cytokinsekresjonskapasiteten til effektor-T-celler. Fordi ingen ko-stimulering ble gitt til transbrønnkammeret som inneholdt RAPA-501-celler, krevde ikke RAPA-501-celler samstimulering for å modulere inflammatoriske cytokinnivåer, inkludert IL-2, IFN-gamma, GM-CSF og TNF-alfa . Følgende cytokiner og kjemokiner ble redusert av RAPA-501-celler i denne transwell-analysen, med relativt lik undertrykkelse mediert av CD4+ og CD8+ undergrupper av RAPA-501-celler: CCL1, CCL2, CCL7, CCL11, CCL13, CCL17, CCL20, CCL22, CCL , CXCL1, CXCL10, CXCL11, CXCL12, IL-6, IFN-gamma, GM-CSF og IL-10. Evnen til TREG-celler til å konsumere IL-2 er et ofte beskrevet fenomen, selv om tidligere studier identifiserte behovet for celle-til-celle-kontakt for IL-2-forbruk. Som sådan er RAPA-501-celler unikt i stand til å modulere nivået av flere inflammatoriske cytokiner på en kontaktuavhengig måte. Disse resultatene tyder på at RAPA-501-celler representerer en egnet kandidat for nøytralisering av flere cytokiner og kjemokiner assosiert med forskjellige sykdommer, inkludert virusindusert lungebetennelse. I lys av denne kapasiteten til RAPA-501-celleproduktet til å undertrykke T-cellemediert betennelse på en TCR-uavhengig måte, er RAPA-501-terapi svært egnet for allogene, hyllevarebehandlingsapplikasjoner.

Ytterligere eksperimenter ble utført for å evaluere om RAPA-501-celleproduktet også kan regulere humane CNS-mikroglialceller, som er myeloide-avledede celler som er analoge med den perifere monocyttpopulasjonen. For å evaluere om RAPA-501-celleproduktet kan modulere pro-inflammatoriske mikrogliaceller på en kontaktuavhengig måte, ble evnen til RAPA-501-celler til å redusere den inflammatoriske tilstanden til mikroglialcellelinjen HMC3 testet i en transwell-analyse. RAPA-501-celler reduserte HMC3-cellesekresjonen av de pro-inflammatoriske cytokinene IL-6 og IFN-gamma og det pro-inflammatoriske kjemokinet IP-10 ved det relativt lave forholdet mellom RAPA-501-celler og mikrogliaceller på 1:40. Disse resultatene viser at RAPA-501-produktet er i stand til å hemme cytokin- og kjemokinsekresjon fra myeloide-avledede populasjoner på en kontakt- og TCR-uavhengig måte, og dermed gi en ytterligere begrunnelse for allogen, hyllevare-utnyttelse av RAPA- 501 produkt.

RAPA-501-celleprodukt for stabilitet av T-celle-fenotype ble også evaluert. Det vil si at det har blitt fastslått at en begrensende faktor for TREG-celleterapi kan være differensieringsplastisitet, for eksempel hvorved TREG-celler kan påvirkes av inflammatoriske cytokiner til å miste sine TREG-karakteristikker og adoptere en Th1-type inflammatorisk tilstand, som deretter kan fremme sykdomspatogenese. For å adressere denne muligheten, RAPA-501-cellekapasiteten til å modulere T-celledifferensieringstranskripsjonsfaktorer etter et utvidet kulturintervall som involverte T-celle-kostimulering, fravær av mTOR-hemmere og tilstedeværelsen av de polariserende inflammatoriske cytokinene IFN-alfa og IL -6 ble studert. Disse eksperimentene viste at RAPA-501-celleproduktet hadde bemerkelsesverdig differensieringsstabilitet (fortsatt ekspresjon av FOXP3 og GATA3 i CD4+ og CD8+ undergrupper; mangel på oppregulering av TBET).

Oppsummert uttrykker RAPA-501-celler en fenotype i samsvar med en regulatorisk T-cellepopulasjon, inkludert: stabil ekspresjon av TREG- og Th2-transkripsjonsfaktorene FOXP3 og GATA3; ekspresjon av TREG funksjonelle molekyler CD39, CD73 og CD103; ekspresjon av en redusert tilstand av T-celledifferensiering, inkludert ekspresjon av stamcellemarkøren CD150; sekresjon av et Th2-mønster av cytokiner med minimal sekresjon av Th1/Th17-type cytokiner; funksjonell undertrykkende kapasitet mot både effektor-Th1/Tc1-celler og pro-inflammatoriske myeloidceller, inkludert reduserte nivåer av multiple inflammatoriske cytokiner og kjemokiner; og en kapasitet til å hemme inflammatoriske effektorer på en kontakt- og TCR-uavhengig måte. Samlet forutsier disse egenskapene til RAPA-501-produktet at denne behandlingen representerer en ny og lovende kandidat for å behandle COVID-19-relatert ARDS.

Dette er en første-i-menneskelig fase 1/fase 2b-studie som evaluerer allogen RAPA-501-celleterapi hos deltakere med COVID-19-relatert ARDS. To fase 1-kohorter vil bli evaluert, nemlig en lavdose-kohort 1 (40 x 10^6 celler/infusjon) og en høydose-kohort 2 (160 x 10^6 celler/infusjon); denne fase 1-komponenten vil bruke dosebegrensende toksisitet (DLT) som et primært endepunkt. Forutsatt at sikkerhet er demonstrert i fase 1-studiekomponenten, kan hver RAPA-501-dosekohort evalueres i den randomiserte fase 2b-komponenten. I fase 2b-komponenten, for hvert RAPA-501-dosenivå som er fastslått å være trygt, vil pasienter randomiseres til å motta RAPA-501-celler (n=19) eller placebo (n=19). Etter infusjon av enten RAPA-501-celler eller placebo, vil disse randomiserte kohortene fortsette med standardbehandling (ikke protokolldrevet). Det primære endepunktet for fase 2b-studien er 30-dagers dødelighet, med det statistiske målet om å redusere dødeligheten hos RAPA-501-mottakere i forhold til den randomiserte placebokontrollkohorten.

Studiedeltakere må være innlagte pasienter med COVID-19-relatert ARDS, spesielt: SARS-CoV-2-infeksjon, bestemt ved RT-PCR eller tilsvarende test; lungeinfiltrat ved radiologisk undersøkelse; og en diagnose av ARDS som krever intensiv åndedrettsstøtte inkludert ikke-invasiv ventilasjon som høystrøms nesekanyle eller mekanisk ventilasjon. Studien består av: (1) et studieregistreringstrinn (screening); og (2) etter at kvalifikasjonen er bekreftet, vil infusjon av RAPA-501-celler utføres. På kohort 1 vil infusjon av RAPA-501-celler være i en dose på 40 x 10^6 celler/infusjon; tre deltakere vil bli behandlet innledningsvis, med én uke som skiller deltakerne i denne fase 1-komponenten for å evaluere for DLT, som vil bli definert som grad 3 eller høyere toksisitet som kan tilskrives RAPA-501-celler innen 7 dager etter infusjon. Når som helst kohort 1-terapi anses å være trygg (enten 0/3 eller 1/6 har en DLT), kan kohort 1 RAPA-501-terapi evalueres i den randomiserte fase 2b-studiekomponenten for å adressere det primære studiemålet knyttet til til 30 dagers dødelighet. Når som helst Cohort 1-terapi anses å være trygg, kan behandling på Cohort 2 startes, som vil evaluere infusjonen av RAPA-501-celler i en dose på 160 x 10^6 celler/infusjon. På samme måte som Cohort 1, hvis Cohort 2-terapi anses å være trygg, kan Cohort 2 RAPA-501-terapi evalueres i den randomiserte fase 2b-studiekomponenten for å adressere det primære studiemålet knyttet til 30-dagers dødelighet. Studien vil bestå av tre hovedstadier: (1) det ovenfor detaljerte 30-dagers intervallet knyttet til de primære studiemålene; (2) et utvidet, totalt 90-dagers intervall for å fortsette relativt intensiv klinisk overvåking av potensielle effekt- og sikkerhetsendepunkter; og (3) et utvidet, totalt 6-måneders intervall for å gi langsiktig klinisk oppfølging og for å fortsette å overvåke for laboratorieparametre knyttet til immun- og virale endepunkter.