COVID-19-ARDS:n RAPA-501-Allo-terapia

Ensimmäisen ihmisen vaiheen 1 tutkimuksen komponentti arvioi kahta RAPA-501-ALLO:n annostasoa hyllyltä poistetuilla potilailla, joilla on COVID-19:ään liittyvä ARDS. Päätepisteinä ovat turvallisuus, biologiset ja mahdolliset sairautta muokkaavat vaikutukset. Satunnaistettu, kaksoissokkoutettu, lumekontrolloitu vaiheen 2b tutkimuskomponentti arvioi RAPA-501 ALLO:n infuusion hyllystä tai kontrolliinfuusion, jolloin ensisijainen päätepiste arvioi, vähentävätkö RAPA-501-solut 30 päivän kuolleisuutta.

COVID-19-pandemia on katastrofi, jossa sairastuvuus ja kuolleisuus kasvavat. 6. huhtikuuta 2021 mennessä arviolta 132,1 miljoonaa ihmistä on saanut viruksen ja 2 866 000 kuolemantapausta maailmanlaajuisesti. Yhdysvalloilla on korkein kokonaismäärä, jossa arviolta 30,8 miljoonaa ihmistä on diagnosoitu ja 556 000 kuollutta. Yhdysvalloissa on korkein kokonaismäärä, jossa arviolta 22,4 miljoonaa ihmistä on diagnosoitu ja 375 000 kuollutta. COVID-19:n vaiheissa 1 ja 2 viruksen leviäminen potilaan sisällä on vallitsevaa. Sellaisenaan terapeuttiset interventiot keskittyvät immuunimolekyyleihin (toipuva seerumi, monoklonaaliset vasta-aineet) ja viruslääkkeisiin (remdesivir). Sitä vastoin COVID-19:n vakavin ja tappavin muoto, vaihe 3, ei johdu viruksen leviämisestä, vaan hallitsemattomasta immuunivasteesta (hyperinflammaatio), joka johtuu immuunimolekyylien lisääntymisestä, joka tunnetaan nimellä sytokiinit ja kemokiinit. Sellaisenaan terapeuttiset interventiot vaiheen 3 sairaudessa keskittyvät tulehduskipulääkkeisiin, kuten antisytokiinihoitoon (anti-IL-6-lääkkeet) tai kortikosteroidihoitoon. Valitettavasti tällaiset interventiot eivät koske COVID-19-vaiheen 3 koko patogeneesiä, joka sisältää "sytokiinimyrskyn" ja "kemokiinimyrskyn" aiheuttaman hypertulehduksen, kudosvaurion, hyperkoagulaation ja usean elimen vajaatoiminnan (mukaan lukien keuhkojen, sydämen, munuaisten ja aivot). Vaiheen 3 sairauden keuhkokomponentti sisältää akuutin hengitysvaikeusoireyhtymän (ARDS), joka on viimeinen yleinen potilaan kuoleman tie, joka johtuu lukemattomista tiloista, mukaan lukien keuhkokuume, sepsis ja trauma. Tarvitaan kipeästi uusia soluhoitoja, jotka voivat tarjota sekä laajapohjaisen immuunimodulaatiovaikutuksen että kudosta regeneroivan vaikutuksen, kuten RAPA-501-ALLO-allogeeninen hybridi-TREG/Th2-solut.

Kuolemaan johtavan keuhkokuumeen mekanismia kokeellisessa hiiren koronavirusinfektiossa välittää synnynnäinen tulehduksellinen aktivaatio, tuloksena oleva inflammatoristen monosyyttien ja makrofagien vahva infiltraatio ja sitä seuraava useiden tulehdusta edistävien sytokiinien ja kemokiinien lisääntyminen. Tärkeää on, että CD4+- ja CD8+-adaptiivinen T-soluvaste kokeelliseen koronavirusinfektioon voi olla joko parantavaa tai sairauden leviämistä. Viruksen aiheuttamaa keuhkotulehdusta on arvioitu myös ei-ihmiskädellisillä malleilla, jotka ovat vahvistaneet, että säätelemätön immuuniaktivaatio viruskeuhkokuumeen aikana sisältää T-solujen alajoukon epätasapainon, alavirran monosyyteistä peräisin olevan tulehduskaskadin ja siitä johtuvan epiteelisoluvaurion. Ihmisillä viruksen aiheuttaman alempien hengitysteiden infektion vakavuus korreloi hengitysteissä olevien efektorimuisti CD8+ T-solujen lisääntymisen kanssa. Kuten äskettäin tarkasteltiin, ihmisen koronavirusinfektio edustaa jatkuvaa taistelua viruksen ja isännän välillä, ja vasteen luonne sanelee sairauden parantumisen tai vaihtoehtoisesti pahenevan keuhkosairauden. On olemassa näyttöä siitä, että adaptiivinen immuunijärjestelmä myötävaikuttaa keuhkotulehdukseen SARS:iin liittyvän koronavirustaudin (SARS-CoV) aikana: toisin sanoen tällaisten koehenkilöiden bronkoalveolaarisessa nesteessä oli lisääntynyt T-solujen määrä ja lisääntynyt Th1:een liittyvien molekyylien IL-12, IFN-gamma, ja IP-10. Tätä myötävirtaan adaptiivista T-soluvälitteistä tulehdusvastetta ohjaa osittain SARS-Co-V-proteiini viroporiini 3a. Tarkemmin sanottuna viroporiinimolekyylit aktivoivat NLRP3-tulehduksen, joka yhdistää synnynnäiset ja adaptiiviset tulehdusvasteet. Lisäksi sekä SARS-CoV että SARS-CoV-2 ilmentävät avoimen lukukehyksen ORF3a-molekyyliä, joka myös aktivoi NLRP3-tulehduksen.

Immuniteetin luonteesta oireisen COVID-19-infektion ratkaisemisen aikana on äskettäin raportoitu, nimittäin: vasta-aineita erittävien solujen ja CD4+ T-follikulaaristen auttajasolujen ilmaantuminen; perforiinia ja grantsyymiä ilmentävien CD8+ T-solujen lisääntyminen; ja proinflammatoristen sytokiinien ja kemokiinien lisääntymisen suhteellinen puute. Sitä vastoin potilailla, joilla oli vaikea COVID-19-tauti, oli huomattavasti kohonnut plasman sytokiinien (mukaan lukien IL-2 ja TNF-alfa) ja kemokiinien (mukaan lukien IP-10 ja MIP-1-alfa) tasot (Huang et al., Lancet, 2020). Yhdessä nämä tulokset osoittavat, että tulehdusta edistävät sytokiini- ja kemokiinivasteet, joita esiintyy vaikeassa COVID-19-taudissa, ovat haitallisia ja että tehokkaat tulehdusta ehkäisevät lähestymistavat voivat lopulta osoittautua terapeuttisiksi. Kuten aiemmin on kuitenkin kerrottu, edistyneemmälle vaiheen 3 COVID-19-taudille on ominaista ARDS-komponentti, ja sytokiinimyrsky sellaisenaan COVID-19-viruksen aiheuttaman keuhkokuumeen hoitoon tulisi optimaalisesti sisällyttää sekä tulehdusta estävä aine että kudossuoja/kudosten korjauselementti.

Vaiheen 3 COVID-19:n arviolta 30 päivän kuolleisuus on yli 50 % huolimatta teho-osaston käytöstä, koneellisesta ventilaatiosta ja tukihoidosta ARDS:n ja monielinten vajaatoiminnan hoitamiseksi. Kapeavaikutteiset kohdistetut anti-inflammatoriset lähestymistavat, kuten anti-IL-6-terapiat, eivät ole olleet erityisen tehokkaita vaiheessa 3 COVID-19, ja kortikosteroidihoidon laaja anti-inflammatorinen farmaseuttinen lähestymistapa on joissakin tutkimuksissa vain lieventänyt vaiheen 3 sairautta. Soluterapiaa arvioidaan myös vaiheessa 3 COVID-19, erityisesti mesenkymaaliset stroomasolut (MSC) ja nyt nykyisellä RAPA-501-ALLO-protokollalla sääteleviä T (TREG) soluja. TREG-hoidolla on toimintamekanismi, joka sisältää monitahoisen tulehdusta estävän vaikutuksen, mikä asettaa TREG-hoidon tulevaisuuden parantavan hoidon eturintamaan monenlaisissa autoimmuuni- ja neurodegeneratiivisissa sairauksissa sekä siirtokomplikaatioissa, kuten siirrännäinen vastaan ​​isäntä. sairaus (GVHD) ja siirteen hylkiminen. Lisäksi TREG-hoito voi tarjota kudosta regeneroivan vaikutuksen, mikä asettaa TREG-soluterapian johtoasemaan uusissa regeneratiivisen lääketieteen pyrkimyksissä korjata lukemattomia kudosperäisiä sairauksia, kuten ihon, lihasten, keuhkojen, maksan, suoliston sairauksia, sydän (sydäninfarkti) ja aivot (halvaus). RAPA-501-ALLO:n valmissoluterapia tarjoaa tämän mahdollisen kaksinkertaisen uhan vaikutusmekanismin, joka sisältää sekä anti-inflammatorisia että kudosten korjaavia vaikutuksia COVID-19:n ja useiden tappavien tilojen tehokkaaseen hoitoon.

RAPA-501-ALLO-solut tuotetaan terveistä vapaaehtoisista, kylmäsäilytetään, säilytetään, ja ne ovat sitten saatavilla hyllystä valmistukseen milloin tahansa. Valmistuksen aikana T-solut "ohjelmoidaan uudelleen" ex vivo käyttämällä uutta, patentoitua 7-päiväistä kaksivaiheista prosessia, joka sisältää T-solujen erilaistumisen ja sitä seuraavan uudelleen erilaistumisen kohti kahta keskeistä anti-inflammatorista ohjelmaa, TREG- ja Th2-reittejä, näin luodaan "hybridi" tuote. Hybridifenotyyppi estää COVID-19:ssä toimivia tulehdusreittejä, mukaan lukien useiden sytokiinien ja kemokiinien modulointia, jotka houkuttelevat tulehdussoluja kudokseen useiden elinvaurioiden käynnistämiseksi. RAPA-501-ALLO-solujen hybridi-TREG- ja Th2-fenotyyppi säätelee ristiin Th1- ja Th17-populaatioita, jotka käynnistävät COVID-19:n hypertulehduksen. RAPA-501-immuunimodulaatio tapahtuu T-solureseptorista riippumattomalla tavalla, mikä mahdollistaa valmiin soluhoidon. Lopuksi viruksen keuhkokuumeen ja ARDS:n kokeellisissa malleissa TREG-solut välittävät suojaavan vaikutuksen keuhkojen alveolaarisessa kudoksessa. Tämän ainutlaatuisen, sekä tulehdusta estäviä että kudosta suojaavia vaikutuksia sisältävän vaikutusmekanismin ansiosta allogeeninen RAPA-501 T-solutuote soveltuu erityisen hyvin arvioitavaksi vaiheen 3 COVID-19:ään liittyvän ARDS:n yhteydessä.

Yleensä klassista autoimmuunisairautta, hermostoa rappeuttavaa sairautta ja viruksen aiheuttamaa tulehdussairautta ohjaavat Th1/Th17-tyyppisten vasteiden vallitsevuus ja vastasäätelyn immuunisuppressiivisten Th2- ja TREG-alaryhmien suhteellinen riittämättömyys. TREG-soluja, jotka määritellään osittain niiden FOXP3-transkriptiotekijän ilmentymisen perusteella, on tutkittu laajasti kokeellisissa malleissa niiden kyvyn suhteen moduloida autoimmuunisairautta, hermostoa rappeuttavaa sairautta ja transplantaatiokomplikaatioita, mukaan lukien graft-versus-host -tauti (GVHD) ja siirrännäinen. hylkääminen. Tärkeää on, että IL-2:n tai eksogeenisen IL-2:n antaminen T-soluissa ajaa keuhkojen tulehdusta kokeellisen virusinfektion aikana; siksi, kun otetaan huomioon TREG-solujen tunnettu rooli IL-2:n kuluttajina, on olemassa vahva mekaaninen peruste TREG-solujen hyödylliselle osuudelle virusperäisen keuhkotulehduksen aikana. Lisäksi kokeellisissa hiirimalleissa viruksen aiheuttamasta keuhkotulehduksesta ja keuhkovauriosta interventiot, jotka lisäsivät TREG-solujen määrää ja toimintaa, nopeuttavat keuhkovaurion korjaamista. Ja Th2-solut, jotka määritellään osittain niiden GATA3-transkriptiotekijän ilmentymisen perusteella, kuvattiin kolmekymmentä vuotta sitten tehokkaaksi vastasäätelypopulaatioksi estämään Th1-solujen vallitsevan osuuden. On tärkeää huomata, että kliiniset tiedot osoittavat, että toimet, jotka lisäävät immuunivastetta heikentäviä solupopulaatioita, mukaan lukien TREG-solut, voivat vähentää vakavia tulehduksellisia sairauksia, kuten graft-versus-host -sairautta heikentämättä virusten vastaista immuniteettia. Lisäksi sekä kokeellisissa malleissa että kliinisissä tutkimuksissa sopiva TREG-solujen määrä voi johtaa yleiseen parantumiseen keuhkotulehduksessa viruskeuhkoputkentulehduksen aikana. Yhdessä nämä havainnot osoittavat, että T-solut, jotka ilmentävät yhdistettyä TREG/Th2-fenotyyppiä, tuottaisivat ennustettavasti edullisia vaikutuksia viruksen aiheuttaman keuhkotulehduksen ja vakavaan vaiheen 3 COVID-19-tautiin liittyvän vamman yhteydessä.

Kliinisissä kokeissa on arvioitu sekä TREG- että Th2-tyyppisiä soluja eri sairauksien varalta, joista merkittävimmät ovat transplantaatiokomplikaatiot. Yleensä kateenkorvasta johdettujen luonnollisten (n)TREG-solujen uskotaan ilmentävän stabiilimpaa fenotyyppiä kuin kateenkorvan jälkeisten indusoitujen (i)TREG-solujen; verrattuna iTREG-solut voivat välittää tehokkaampaa suppressiota. Siitä huolimatta sekä nTREG- että iTREG-solut ovat herkkiä erilaistumisplastisuudelle, mikä aiheuttaa huolta siitä, että mahdollisesti terapeuttinen TREG-populaatio saattaa muuttua patogeenisiksi Th1/Th17-fenotyypeiksi in vivo. Ex vivo -laajentuneet (n)TREG-solut arvioitiin allogeenisen hematopoieettisen solunsiirron (HCT) yhteydessä käyttämällä napanuoraveren luovuttajia; äskettäin sama tutkimusryhmä on kehittänyt ex vivo laajennetun (i)TREG-soluhoidon rajoittaakseen siirtokomplikaatioita. Lisäksi ex vivo -laajentuneita nTREG-soluja on arvioitu tyypin I diabetes mellituksen yhteydessä; Tässä kliinisessä tutkimuksessa havaittiin, että TREG-hoito oli turvallista ja ainakin ohimenevästi tehokas sairauden hallinnan parantamisessa. Lisäksi, kun kyseessä on amyotrofinen lateraaliskleroosi (ALS), joka on vakavan Th1-peräisen perifeerisen ja keskushermoston tulehdusvasteen leviämä sairaus, kliinisessä nTREG-solujen adoptiivisesta siirrosta tehdyssä tutkimuksessa todettiin, että interventio oli turvallinen ja osoitti lupaavaa. ALS-taudin paraneminen. Lopuksi rapamysiiniresistentin Th2-soluterapian vaiheen II tutkimuksessa matalan intensiteetin allogeenisen HCT:n yhteydessä adoptiivinen Th2-solunsiirto oli turvallista ja se liittyi siirtymiseen kohti Th2-polarisaatiota in vivo, luovuttajan siirron säilymiseen, sekakimerismin stabilointiin. , alhainen GVHD:n määrä ja voimakkaat kasvainten vastaiset vaikutukset potilailla, joilla on refraktaarinen hematologinen pahanlaatuisuus. Nämä kliinisen kokeen tulokset osoittavat yhdessä, että TREG- ja Th2-tyyppisten populaatioiden adoptiivinen siirto voidaan antaa turvallisesti, jopa allogeenisessa HCT-ympäristössä, ja se voi välittää tulehdustilojen hyödyllistä modulaatiota.

Ex vivo -valmistusta voidaan käyttää indusoitujen (i)TREG-solujen tuottamiseksi perifeeristen T-solujen kateenkorvan jälkeisestä poolista. Nykyisessä protokollassa valmistusmenetelmä keskittyy mTOR-estoon, joka on vakiintunut interventio, joka edistää TREG-solujen induktiota. Yhdessä mTOR-estämisen kanssa käytetty viljelyjärjestelmä sisältää sytokiinejä, jotka edistävät sekä Th2- että TREG-fenotyyppiä, nimittäin IL-4, TGF-beeta ja IL-2. Lopuksi protokolla sisältää TREG/Th2-solutuotteen, joka koostuu sekä CD4+- että CD8+-T-solujen alajoukoista, koska nämä vastasäätelevät T-solujen alajoukot ilmentävät differentiaalisia T-solureseptorivalikoimaa (TCR) ja erilaisia ​​efektorimekanismeja, jotka voivat mahdollisesti parantaa anti-inflammatorinen vaikutus. RAPA-501:n valmistusta varten perifeerisen veren mononukleaarisolut kerätään vakaan tilan afereesista ja niille suoritetaan seuraava kaksivaiheinen viljelyinterventio: Vaiheessa 1 vakava nälkävaihe johtaa T-solujen erilaistumiseen, joka toteutuu molemmilla tavoilla. selektiivinen väliaineen käyttö ja FDA:n hyväksymien farmaseuttisten aineiden lisääminen, jotka estävät tehokkaasti mTOR-signalointia; ja vaiheessa 2 T-solujen uudelleen erilaistuminen tapahtuu käyttämällä yhteisstimulaatioaineita ja Th2- ja TREG-tyyppisiä polarisoivia sytokiinejä. 6 päivän viljelyn jälkeen tuloksena oleva TREG/Th2-populaatio kylmäsäilytetään kertakäyttöisissä erissä protokollaohjatuilla terapeuttisilla annoksilla. Tyypin II sytokiinifenotyypin T-soluille on tunnusomaista osittain niiden transkriptiotekijän GATA3 ilmentyminen, kun taas säätelevät T-solupopulaatiot tunnistetaan osittain niiden FOXP3-transkriptiotekijän ilmentymisen perusteella. Viljelyn alussa erittäin alhainen T-solujen esiintymistiheys ilmentää joko GATA3:a tai FOXP3:a. Sitä vastoin TREG/Th2-viljelyolosuhteissa valmistettu RAPA-501-solutuote ilmentää suuren taajuuden T-soluja, jotka ovat joko yksi-positiivisia GATA3:lle, yksipositiivisia FOXP3:lle tai kaksoispositiivisia sekä GATA3:lle että FOXP3:lle. Tärkeää on, että tämä transkriptiotekijäprofiili ilmentyy sekä valmistetuissa CD4+- että CD8+-T-soluissa. On tärkeää huomata, että sekä CD4+- että CD8+ T-solupopulaatiot, joilla on TREG-toiminto, on määritelty, mukaan lukien CD8+ TREG-populaatio, joka tehokkaasti suppressoi GVHD:tä; on potentiaalisesti edullista, että molemmat alajoukot ovat edustettuina terapeuttisessa tuotteessa, koska CD4+- ja CD8+-TREG-solut käyttävät differentiaalisia efektorimekanismeja.

Säätelevät T-solupopulaatiot voivat suppressoida patogeenisiä efektori-T-solupopulaatioita useilla määritellyillä mekanismeilla, mukaan lukien ekspressoimalla CD39- ja CD73-ektonukleotidaasimolekyylejä, jotka toimivat tulehdusta edistävien ATP:n hydrolysoimiseksi immuunivastetta suppressoivaa adenosiinisubstraattia kohti. Todellakin, TREG-soluilla, jotka ilmentävät CD39:ää, on lisääntynyt suppressiivinen toiminta, ja ne on yhdistetty tulehduksellisen suolistosairauden paranemiseen. Lisäksi CD73 välittää osittain ihmisen TREG-solujen suppressoivaa toimintaa. TREG/Th2-viljelyolosuhteissa valmistetuilla T-soluilla on lisääntynyt TREG:iin liittyvien efektorimolekyylien, CD39:n ja CD73:n, ilmentyminen. CD39/CD73-ektonukleotidaasien lisäksi TREG-solujen toiminta on myös korreloitu CD103:n ilmentymiseen, joka on integriini, joka määrää epiteelin lymfosyyttien lokalisoinnin. Todellakin, CD103- ja IL-2-reseptorisignalointi toimivat yhteistyössä ylläpitääkseen immuunitoleranssia suolen limakalvossa; lisäksi CD103:a ilmentävät TREG-solut ovat kriittisiä kokeellisen kroonisen GVHD:n parantamiseksi. TREG/Th2-viljelyolosuhteissa valmistetuilla T-soluilla on lisääntynyt TREG-efektorimolekyylin CD103 ilmentyminen.

Kokeellisissa malleissa adoptiivisen T-soluhoidon tehokkuus riippuu onnistuneesta siirrosta ja in vivo T-solujen pysyvyydestä. Tärkeää on, että T-solujen erilaistumistila auttaa sanelemaan pysyvyyttä in vivo, jolloin vähemmän erilaistuneilla soluilla on lisääntynyt pysyvyys. Hiiren rapamysiiniresistenttejä T-soluja, jotka ilmensivät T-keskusmuistin (TCM) fenotyyppiä, oli lisääntynyt in vivo -siirtopotentiaali verrattuna kontrolli-T-soluihin. Lisäksi ihmisen rapamysiiniresistenteillä T-soluilla oli myös lisääntynyt istutus ksenogeenisen siirrännäis-isäntä-sairauden ihmis-hiiri-mallissa. T-solut, joiden erilaistuminen on vähentynyt suhteessa T-effektorimuistipopulaatioon (TEM), ovat lisänneet in vivo -pysyvyyttä ja välittävät lisääntyneitä in vivo -vaikutuksia, mukaan lukien TCM-alaryhmä, naiivi T-solujen alajoukko ja viime aikoina T-stem cell memory (TSCM) -kantasolumuisti. osajoukko. Tämä T-solujen erilaistumistilan ja in vivo T-solutoiminnan välinen suhde on merkityksellinen TREG-soluille, koska: (1) TCM-fenotyypin TREG-solut olivat tehokkaampia vähentämään kokeellista GVHD:tä verrattuna TEM-fenotyypin TREG-soluihin; ja (2) TREG-solut, jotka ilmensivät kantasolumarkkeria CD150, olivat erittäin tehokkaita kantasolusiirteen hylkimisen estämisessä. TREG/Th2-viljelyolosuhteissa valmistetut T-solut on rikastettu soluilla, joilla on alentunut erilaistumistila, joka on yhdenmukainen T-kantasolujen alajoukon kanssa, mukaan lukien CD150-markkerin ilmentyminen.

On myös tärkeää arvioida valmistettujen RAPA-501-solujen sytokiinieritysprofiili. Ensinnäkin on kriittistä, että solutuote kykenee erittämään IL-4:ää, joka on myöhemmän Th2-erilaistumisen ohjaaja sytokiini. Toiseksi on toivottavaa, että adoptiivisesti siirretty T-solupopulaatio kykenee erittämään IL-2:ta, koska tämä kapasiteetti osoittaa progenitoritoimintoa, joka sallii T-solujen laajenemisen helpommin in vivo ilman, että tarvitaan eksogeenistä IL-2:ta. Lopuksi on tärkeää, että RAPA-501-solupopulaatiolla on vähentynyt Th1- tai Th17-tyypin sytokiinien IFN-gamma, TNF-alfa, IL-17 ja GM-CSF eritys. Valmistettu RAPA-501-solutuote erittää IL-4:ää ja IL-2:ta minimaalisella Th1- tai Th17-tyypin sytokiinien erityksellä.

Säätelevät T-solut voidaan myös määritellä osittain niiden kyvyn perusteella suppressoida efektori-T-solujen proliferaatiota tai toimintaa. Tärkeää on, että valmistetut TREG/Th2-solut estävät tehokkaasti useiden tulehduksellisten sytokiinien Th1/Tc1-solueritystä, mukaan lukien IFN-gamma, GM-CSF ja TNF-alfa. Suppression mekanismin arvioimiseksi suoritettiin kokeita käyttämällä transwell-määritystä, jossa efektori-T-solut ja RAPA-501-solut erotetaan suodattimella, joka estää solujen välisen kosketuksen, mutta sallii solujen välisen viestinnän pienten liukoisten välittäjien, kuten sytokiinien, avulla. RAPA-501-solut toimivat TCR:stä riippumattomasti suppressoivat efektori-T-solujen sytokiinien erityskykyä. Koska RAPA-501-soluja sisältävään transwell-kammioon ei annettu yhteisstimulaatiota, RAPA-501-solut eivät tarvinneet yhteisstimulaatiota tulehduksellisten sytokiinien, mukaan lukien IL-2, IFN-gamma, GM-CSF ja TNF-alfa, säätelemiseksi. . Seuraavat sytokiinit ja kemokiinit vähensivät RAPA-501-solut tässä transwell-määrityksessä suhteellisen tasaisella suppressiolla RAPA-501-solujen CD4+- ja CD8+-alajoukoilla: CCL1, CCL2, CCL7, CCL11, CCL13, CCL17, CCL20, CCL262 , CXCL1, CXCL10, CXCL11, CXCL12, IL-6, IFN-gamma, GM-CSF ja IL-10. TREG-solujen kyky kuluttaa IL-2:ta on yleisesti kuvattu ilmiö, vaikka aikaisemmat tutkimukset osoittivat solujen välisen kosketuksen vaatimuksen IL-2:n kulutukseen. Sellaisenaan RAPA-501-solut kykenevät ainutlaatuisella tavalla moduloimaan useiden tulehduksellisten sytokiinien tasoa kontaktista riippumattomalla tavalla. Nämä tulokset viittaavat siihen, että RAPA-501-solut edustavat sopivaa ehdokasta useiden sytokiinien ja kemokiinien neutralointiin, jotka liittyvät erilaisiin sairauksiin, mukaan lukien viruksen aiheuttama keuhkotulehdus. Kun otetaan huomioon tämä RAPA-501-solutuotteen kyky tukahduttaa T-soluvälitteistä tulehdusta TCR-riippumattomalla tavalla, RAPA-501-hoito on erittäin sopiva allogeenisiin, valmiisiin hoitosovelluksiin.

Lisäkokeita suoritettiin sen arvioimiseksi, voisiko RAPA-501-solutuote säädellä myös ihmisen keskushermoston mikrogliasoluja, jotka ovat myeloidista peräisin olevia soluja, jotka ovat analogisia perifeerisen monosyyttipopulaation kanssa. Sen arvioimiseksi, voisiko RAPA-501-solutuote moduloida tulehdusta edistäviä mikrogliasoluja kosketuksesta riippumattomalla tavalla, RAPA-501-solujen kykyä vähentää mikrogliasolulinjan HMC3 tulehdustilaa testattiin transwell-määrityksessä. RAPA-501-solut vähensivät proinflammatoristen sytokiinien IL-6 ja IFN-gamma ja proinflammatorisen kemokiinin IP-10 HMC3-solueritystä suhteellisen alhaisella RAPA-501-solujen ja mikrogliasolujen suhteella 1:40. Nämä tulokset osoittavat, että RAPA-501-tuote kykenee estämään sytokiinien ja kemokiinien erittymistä myeloidiperäisistä populaatioista kontaktista ja TCR:stä riippumattomalla tavalla, mikä tarjoaa lisäperusteluja RAPA-proteiinin allogeeniselle, valmiiksi hyllylle käytölle. 501 tuote.

RAPA-501-solutuotteen T-solufenotyypin stabiilisuus arvioitiin myös. Toisin sanoen on määritetty, että TREG-soluterapian rajoittava tekijä voi olla esimerkiksi erilaistumisplastisuus, jolloin tulehdukselliset sytokiinit voivat vaikuttaa TREG-soluihin menettämään TREG-ominaisuudet ja omaksumaan Th1-tyypin tulehdustilan, mikä voi sitten edistää. taudin patogeneesi. Tämän mahdollisuuden käsittelemiseksi RAPA-501-solujen kyky moduloida T-solujen erilaistumistranskriptiotekijöitä pidennetyn viljelyvälin jälkeen, joka sisälsi T-solujen yhteisstimulaation, mTOR-estäjien puuttumisen ja polarisoivien tulehduksellisten sytokiinien IFN-alfa ja IL läsnäolon. -6 tutkittiin. Nämä kokeet osoittivat, että RAPA-501-solutuotteella oli huomattava erilaistumisstabiilius (FOXP3:n ja GATA3:n jatkuva ilmentyminen CD4+- ja CD8+-alaryhmissä; TBET:n lisäsäätelyn puute).

Yhteenvetona voidaan todeta, että RAPA-501-solut ilmentävät fenotyyppiä, joka on yhdenmukainen säätelevän T-solupopulaation kanssa, mukaan lukien: TREG- ja Th2-transkriptiotekijöiden FOXP3 ja GATA3 vakaa ilmentyminen; TREG-funktionaalisten molekyylien CD39, CD73 ja CD103 ekspressio; T-solujen erilaistumisen vähentyneen tilan ilmentyminen, mukaan lukien kantasolumarkkerin CD150 ekspressio; sytokiinien Th2-kuvion erittäminen minimaalisella Th1/Th17-tyypin sytokiinien erityksellä; toiminnallinen suppressiokyky sekä efektori Th1/Tc1-soluja että proinflammatorisia myeloidisoluja vastaan, mukaan lukien useiden tulehduksellisten sytokiinien ja kemokiinien vähentyneet tasot; ja kyky estää tulehduksellisia efektoreita kontaktista ja TCR:stä riippumattomalla tavalla. Yhdessä nämä RAPA-501-tuotteen ominaisuudet ennustavat, että tämä hoito on uusi ja lupaava ehdokas COVID-19:ään liittyvän ARDS:n hoitoon.

Tämä on ensimmäinen ihmisiin kohdistuva vaihe 1/2b -tutkimus, jossa arvioidaan allogeenistä RAPA-501-soluterapiaa osallistujilla, joilla on COVID-19:ään liittyvä ARDS. Arvioidaan kaksi vaiheen 1 kohorttia, nimittäin pieniannoksinen kohortti 1 (40 x 10^6 solua/infuusio) ja suuriannoksinen kohortti 2 (160 x 10^6 solua/infuusio); tämä vaiheen 1 komponentti käyttää annosta rajoittavaa toksisuutta (DLT) ensisijaisena päätetapahtumana. Edellyttäen, että turvallisuus osoitetaan vaiheen 1 tutkimuskomponentissa, jokainen RAPA-501-annoskohortti voidaan arvioida satunnaistetussa vaiheen 2b komponentissa. Vaiheen 2b komponentissa potilaat satunnaistetaan saamaan RAPA-501-soluja (n=19) tai lumelääkettä (n=19) kullekin turvalliseksi määritellylle RAPA-501-annostasolle. Joko RAPA-501-solujen tai lumelääkkeen infuusion jälkeen nämä satunnaistetut kohortit jatkavat tavanomaista hoitoa (ei protokollapohjaista). Vaiheen 2b tutkimuksen ensisijainen päätetapahtuma on 30 päivän kuolleisuus, ja tilastollisena tavoitteena on vähentää RAPA-501-saajien kuolleisuutta verrattuna satunnaistettuun lumelääkekontrollikohorttiin.

Tutkimukseen osallistuvien on oltava sairaalahoidossa potilaita, joilla on COVID-19:ään liittyvä ARDS, erityisesti: SARS-CoV-2-infektio RT-PCR:llä tai vastaavalla testillä määritettynä; keuhkojen infiltraatti radiologisessa tutkimuksessa; ja ARDS-diagnoosi, joka vaatii intensiivistä hengitystukea, mukaan lukien ei-invasiivinen ventilaatio, kuten korkeavirtaus nenäkanyyli tai mekaaninen ventilaatio. Tutkimus koostuu: (1) tutkimukseen ilmoittautumisvaiheesta (seulonta); ja (2) kun kelpoisuus on vahvistettu, suoritetaan RAPA-501-solujen infuusio. Kohortissa 1 RAPA-501-solujen infuusio on annoksena 40 x 10^6 solua/infuusio; kolme osallistujaa hoidetaan aluksi, ja tämän vaiheen 1 komponentin osallistujat erotetaan viikolla DLT:n arvioimiseksi, mikä määritellään RAPA-501-soluista johtuvaksi 3. asteen tai sitä korkeammaksi toksisuudeksi 7 päivän kuluessa infuusion jälkeen. Aina kun kohortin 1 hoidon katsotaan olevan turvallinen (joko 0/3 tai 1/6, jolla on DLT), kohortin 1 RAPA-501-hoito voidaan arvioida satunnaistetussa vaiheen 2b tutkimuskomponentissa ensisijaisen tutkimuksen tavoitteen saavuttamiseksi. 30 päivän kuolleisuuteen. Milloin tahansa kohortin 1 hoidon katsotaan olevan turvallinen, voidaan aloittaa hoito kohortissa 2, joka arvioi RAPA-501-solujen infuusion annoksella 160 x 10^6 solua/infuusio. Samalla tavalla kuin kohortti 1, jos kohortin 2 hoito katsotaan turvalliseksi, kohortin 2 RAPA-501-hoito voidaan arvioida satunnaistetussa 2b-vaiheen tutkimuskomponentissa ensisijaisen tutkimuksen tavoitteen saavuttamiseksi, joka liittyy 30 päivän kuolleisuuteen. Tutkimus muodostuu kolmesta päävaiheesta: (1) edellä kuvattu 30 päivän väli, joka liittyy tutkimuksen päätavoitteisiin; (2) pidennetty, yhteensä 90 päivän aikaväli mahdollisten tehokkuuden ja turvallisuuden päätepisteiden suhteellisen intensiivisen kliinisen seurannan jatkamiseksi; ja (3) pidennetty, yhteensä 6 kuukauden väli, jotta voidaan tarjota pitkäaikaista kliinistä seurantaa ja jatkaa immuuni- ja viruspäätepisteisiin liittyvien laboratorioparametrien seurantaa.