RAPA-501-Allo Terapia COVID-19-ARDS

Pierwszy komponent badania fazy 1 z udziałem ludzi oceni dwa poziomy dawek RAPA-501-ALLO z gotowych komórek u pacjentów z ARDS związanym z COVID-19, z kluczowymi punktami końcowymi dotyczącymi bezpieczeństwa, efektów biologicznych i potencjalnych efektów modyfikujących przebieg choroby. Randomizowany, podwójnie zaślepiony, kontrolowany placebo komponent badania fazy 2b oceni infuzję RAPA-501 ALLO z gotowych komórek lub infuzję kontrolną, przy czym pierwszorzędowym punktem końcowym będzie ocena, czy komórki RAPA-501 zmniejszają 30-dniową śmiertelność.

Pandemia COVID-19 to katastrofa, w której występuje postępująca zachorowalność i śmiertelność. Szacuje się, że na dzień 6 kwietnia 2021 r. wirusem zaraziło się 132,1 mln osób, a na całym świecie zginęło 2 866 000 osób. Stany Zjednoczone mają najwyższe sumy z szacunkową liczbą 30,8 miliona zdiagnozowanych osób i 556 000 zgonów. Stany Zjednoczone mają najwyższe sumy z szacunkową liczbą 22,4 miliona zdiagnozowanych osób i 375 000 zgonów. W stadiach 1 i 2 COVID-19 dominuje propagacja wirusa w organizmie pacjenta. W związku z tym interwencje terapeutyczne koncentrują się na cząsteczkach immunologicznych (surowica ozdrowieńców, przeciwciała monoklonalne) i lekach przeciwwirusowych (remdesivir). W przeciwieństwie do tego najcięższa i śmiertelna postać COVID-19, stadium 3, nie jest napędzana przez namnażanie się wirusa, ale przez niekontrolowaną odpowiedź immunologiczną (hiperzapalenie) spowodowaną wzrostem cząsteczek odpornościowych znanych jako cytokiny i chemokiny. W związku z tym interwencje terapeutyczne w przypadku choroby w stadium 3 koncentrują się na lekach przeciwzapalnych, takich jak terapia antycytokinowa (leki anty-IL-6) lub terapia kortykosteroidami. Niestety, takie interwencje nie obejmują pełnej patogenezy COVID-19 w stadium 3, która obejmuje hiperzapalenie spowodowane „burzą cytokinową” i „burzą chemokinową”, uszkodzeniem tkanek, nadkrzepliwością i niewydolnością wielonarządową (w tym płuc, serca, nerek i mózg). Komponent płucny choroby w stadium 3 obejmuje zespół ostrej niewydolności oddechowej (ARDS), który jest ostateczną wspólną drogą śmierci pacjenta z powodu niezliczonych stanów, w tym zapalenia płuc, posocznicy i urazu. Istnieje ogromne zapotrzebowanie na nowe terapie komórkowe, które mogą zapewnić zarówno szeroko zakrojony efekt modulacji immunologicznej, jak i efekt regeneracji tkanek, takie jak gotowe allogeniczne hybrydowe komórki TREG / Th2 RAPA-501-ALLO.

W mechanizmie śmiertelnego zapalenia płuc w eksperymentalnym zakażeniu mysim koronawirusem pośredniczy wrodzona aktywacja inflammasomu, wynikająca z tego silna infiltracja zapalnych monocytów i makrofagów, a następnie wzrost wielu prozapalnych cytokin i chemokin. Co ważne, adaptacyjna odpowiedź limfocytów T CD4+ i CD8+ na eksperymentalną infekcję koronawirusem może prowadzić do wyleczenia lub propagacji choroby. Zapalenie płuc wywołane przez wirusy zostało również ocenione na modelach naczelnych innych niż człowiek, które potwierdziły, że rozregulowana aktywacja immunologiczna podczas wirusowego zapalenia płuc obejmuje nierównowagę podzbioru komórek T, kaskadę zapalną pochodzącą z monocytów i wynikające z tego uszkodzenie komórek nabłonkowych. U ludzi nasilenie wywołanej wirusem infekcji dolnych dróg oddechowych koreluje ze zwiększoną liczbą efektorowych limfocytów T CD8 + pamięci w drogach oddechowych. Jak niedawno omówiono, infekcja ludzkim koronawirusem stanowi ciągłą walkę między wirusem a gospodarzem, a natura odpowiedzi dyktuje wyleczenie choroby lub, alternatywnie, zaostrzenie choroby płuc. Istnieją dowody na to, że adaptacyjny układ odpornościowy przyczynia się do zapalenia płuc podczas choroby związanej z koronawirusem SARS (SARS-CoV): to znaczy płyn oskrzelowo-pęcherzykowy od takich osób miał zwiększoną liczbę komórek T i zwiększone cząsteczki związane z Th1 IL-12, IFN-gamma, i IP-10. Ta adaptacyjna odpowiedź zapalna, w której pośredniczą limfocyty T, jest częściowo napędzana przez białko SARS-Co-V wiroporynę 3a. W szczególności cząsteczki wiroporyny aktywują inflammasom NLRP3, który łączy wrodzone i adaptacyjne reakcje zapalne. Co więcej, zarówno SARS-CoV, jak i SARS-CoV-2 wyrażają cząsteczkę ORF3a z otwartą ramką odczytu, która również aktywuje inflamasom NLRP3.

Niedawno opisano charakter odporności podczas ustępowania objawowej infekcji COVID-19, a mianowicie: pojawienie się komórek wydzielających przeciwciała i komórek pomocniczych pęcherzyków T CD4+; wzrost liczby komórek T CD8+ wykazujących ekspresję perforyny i granzymu; oraz względny brak wzrostu cytokin prozapalnych i chemokin. W wyraźnym przeciwieństwie, pacjenci z ciężką chorobą COVID-19 mieli znacznie zwiększone poziomy cytokin w osoczu (w tym IL-2 i TNF-alfa) i chemokin (w tym IP-10 i MIP-1-alfa) (Huang i wsp., Lancet, 2020). Podsumowując, wyniki te wskazują, że prozapalne odpowiedzi cytokin i chemokin, które występują w ciężkim przebiegu COVID-19, są szkodliwe i że skuteczne podejścia przeciwzapalne mogą ostatecznie okazać się terapeutyczne. Jednak, jak opisano wcześniej, bardziej zaawansowana choroba COVID-19 w stadium 3 charakteryzuje się składową ARDS, a burza cytokin jako taka, nowe podejścia do leczenia wirusowego zapalenia płuc COVID-19 powinny optymalnie obejmować zarówno element przeciwzapalny, jak i element ochrony tkanek/naprawy tkanek.

COVID-19 w stadium 3 niesie szacunkową 30-dniową śmiertelność na ponad 50% pomimo wykorzystania OIOM, wentylacji mechanicznej i terapii podtrzymujących w celu leczenia ARDS i niewydolności wielonarządowej. Wąsko działające ukierunkowane podejścia przeciwzapalne, takie jak leki anty-IL-6, nie były szczególnie skuteczne w 3. stadium COVID-19, a szeroko zakrojone przeciwzapalne podejście farmaceutyczne terapii kortykosteroidami, w niektórych badaniach tylko nieznacznie złagodziło chorobę w 3. stadium. Terapia komórkowa jest również oceniana w stadium 3 COVID-19, w szczególności mezenchymalnych komórek zrębowych (MSC), a teraz, przy obecnym protokole RAPA-501-ALLO, regulatorowych komórek T (TREG). Terapia TREG ma mechanizm działania, który obejmuje wieloaspektowe działanie przeciwzapalne, co stawia terapię TREG na czele przyszłej terapii leczniczej szerokiego zakresu chorób autoimmunologicznych i neurodegeneracyjnych, a także powikłań po przeszczepach, takich jak przeszczep przeciwko gospodarzowi choroba (GVHD) i odrzucenie przeszczepu. Ponadto terapia TREG może zapewnić efekt regeneracji tkanek, co plasuje terapię komórkową TREG na czele nowatorskich wysiłków medycyny regeneracyjnej w leczeniu niezliczonych chorób tkankowych, takich jak choroby skóry, mięśni, płuc, wątroby, jelit, serca (zawał mięśnia sercowego) i mózgu (udar). Gotowa terapia komórkowa RAPA-501-ALLO oferuje ten potencjalnie podwójny mechanizm działania, który obejmuje zarówno działanie przeciwzapalne, jak i naprawcze tkanki, w celu skutecznego leczenia COVID-19 i wielu śmiertelnych chorób.

Komórki RAPA-501-ALLO są generowane od zdrowych ochotników, konserwowane kriokonserwacją, bankowane, a następnie są dostępne do natychmiastowej terapii w dowolnym momencie. Podczas produkcji komórki T są „przeprogramowywane” ex vivo przy użyciu nowego, opatentowanego 7-dniowego dwuetapowego procesu, który obejmuje odróżnicowanie komórek T, a następnie ponowne różnicowanie w kierunku dwóch kluczowych programów przeciwzapalnych, szlaków TREG i Th2, tworząc w ten sposób produkt „hybrydowy”. Fenotyp hybrydowy hamuje szlaki zapalne działające w COVID-19, w tym modulację wielu cytokin i chemokin, które przyciągają komórki zapalne do tkanki w celu zainicjowania uszkodzenia wielu narządów. Hybrydowy fenotyp TREG i Th2 komórek RAPA-501-ALLO reguluje krzyżowo populacje Th1 i Th17, które inicjują hiperzapalenie COVID-19. Modulacja immunologiczna RAPA-501 zachodzi w sposób niezależny od receptora komórek T, umożliwiając w ten sposób gotową terapię komórkową. Wreszcie, w eksperymentalnych modelach wirusowego zapalenia płuc i ARDS, komórki TREG pośredniczą w działaniu ochronnym na tkankę pęcherzyków płucnych. Ze względu na ten unikalny mechanizm działania, który obejmuje zarówno działanie przeciwzapalne, jak i ochronne dla tkanek, produkt allogenicznych komórek T RAPA-501 jest szczególnie odpowiedni do oceny w przypadku ARDS w stadium 3. związanego z COVID-19.

Ogólnie rzecz biorąc, klasyczna choroba autoimmunologiczna, choroba neurodegeneracyjna i choroba zapalna wywołana przez wirusy są spowodowane przewagą odpowiedzi typu Th1/Th17 ze względną niewydolnością podzbiorów Th2 i TREG przeciwregulacyjnych immunosupresyjnych. Komórki TREG, które są częściowo zdefiniowane przez ekspresję czynnika transkrypcyjnego FOXP3, były szeroko badane w modelach eksperymentalnych pod kątem ich zdolności do modulowania chorób autoimmunologicznych, chorób neurodegeneracyjnych i powikłań przeszczepów, w tym choroby przeszczep przeciw gospodarzowi (GVHD) i przeszczep odmowa. Co ważne, wytwarzanie przez limfocyty T IL-2 lub podawanie egzogennej IL-2 napędza zapalenie płuc podczas eksperymentalnej infekcji wirusowej; w związku z tym, biorąc pod uwagę znaną rolę komórek TREG jako konsumentów IL-2, istnieje silne mechanistyczne uzasadnienie dla korzystnego udziału komórek TREG podczas wirusowego zapalenia płuc. Co więcej, w eksperymentalnych mysich modelach wywołanego wirusem zapalenia płuc i uszkodzenia płuc, interwencje zwiększające liczbę i funkcję komórek TREG przyspieszyły naprawę uszkodzenia płuc. Komórki Th2, które są częściowo zdefiniowane przez ekspresję czynnika transkrypcyjnego GATA3, zostały opisane trzydzieści lat temu jako potężna populacja kontrregulacyjna zapobiegająca dominacji komórek Th1. Należy zauważyć, że dane kliniczne wskazują, że manewry, które zwiększają populacje komórek immunosupresyjnych, w tym komórek TREG, mogą zmniejszyć ciężką chorobę zapalną, taką jak choroba przeszczep przeciw gospodarzowi, bez osłabiania odporności przeciwwirusowej. Ponadto, zarówno w modelach eksperymentalnych, jak i badaniach klinicznych, odpowiedni poziom komórek TREG może skutkować ogólną poprawą stanu zapalnego płuc podczas wirusowego zapalenia oskrzelików. Podsumowując, odkrycia te wskazują, że komórki T wyrażające połączony fenotyp TREG / Th2 przyniosłyby przewidywalne korzystne efekty w przypadku wywołanego przez wirusy zapalenia płuc i urazu związanego z ciężką chorobą COVID-19 w stadium 3.

W badaniach klinicznych oceniono zarówno komórki typu TREG, jak i Th2 pod kątem różnych stanów, w szczególności powikłań po przeszczepach. Ogólnie uważa się, że naturalne komórki (n)TREG pochodzące z grasicy wykazują bardziej stabilny fenotyp niż indukowane po grasicy komórki (i)TREG; dla porównania, komórki iTREG mogą pośredniczyć w silniejszej supresji. Niemniej jednak zarówno komórki nTREG, jak i iTREG są podatne na plastyczność różnicowania, co budzi obawy, że potencjalnie terapeutyczna populacja TREG może przekształcić się w patogenne fenotypy Th1 / Th17 in vivo. Ekspandowane ex vivo komórki (n)TREG oceniano w warunkach allogenicznego przeszczepu komórek krwiotwórczych (HCT) przy użyciu dawców krwi pępowinowej; ostatnio ta sama grupa badawcza opracowała ex vivo rozszerzoną terapię komórkową (i)TREG w celu ograniczenia powikłań przeszczepu. Ponadto komórki nTREG ekspandowane ex vivo oceniano w warunkach cukrzycy typu I; to badanie kliniczne wykazało, że terapia TREG była bezpieczna i przynajmniej przejściowo skuteczna w poprawie kontroli choroby. Ponadto, w przypadku stwardnienia zanikowego bocznego (ALS), które jest chorobą propagowaną przez ciężką obwodową i ośrodkową reakcję zapalną kierowaną przez Th1, badanie kliniczne adopcyjnego transferu komórek nTREG wykazało, że interwencja była bezpieczna i obiecująca pod względem Złagodzenie choroby ALS. Wreszcie, w badaniu II fazy terapii komórkami Th2 opornymi na rapamycynę w warunkach allogenicznego HCT o niskiej intensywności, adopcyjny transfer komórek Th2 był bezpieczny i związany z przesunięciem w kierunku polaryzacji Th2 in vivo, zachowaniem wszczepienia dawcy, stabilizacją mieszanego chimeryzmu , niski wskaźnik GVHD i silne działanie przeciwnowotworowe u pacjentów z opornym nowotworem hematologicznym. Podsumowując, te wyniki badań klinicznych wskazują, że adopcyjny transfer populacji typu TREG i Th2 może być bezpiecznie podawany, nawet w warunkach allogenicznego HCT, i może pośredniczyć w korzystnej modulacji stanów zapalnych.

Wytwarzanie ex vivo można wykorzystać do wytworzenia indukowanych komórek (i)TREG z postgrasicy puli obwodowych komórek T. W obecnym protokole metoda wytwarzania skupi się na hamowaniu mTOR, co jest ustaloną interwencją promującą indukcję komórek TREG. W połączeniu z hamowaniem mTOR, wykorzystywany system hodowlany zawiera cytokiny, które promują zarówno fenotyp Th2, jak i TREG, mianowicie IL-4, TGF-beta i IL-2. Na koniec protokół będzie obejmował produkt komórek TREG/Th2 składający się z podzbiorów komórek T zarówno CD4+, jak i CD8+, ponieważ te podzbiory limfocytów T kontrregulacyjnych wyrażają zróżnicowane repertuary receptorów komórek T (TCR) i różnorodność mechanizmów efektorowych, które mogą potencjalnie wzmacniać działanie przeciwzapalne. W celu wytworzenia RAPA-501 komórki jednojądrzaste krwi obwodowej są pobierane z aferezy w stanie stacjonarnym i poddawane następującej dwuetapowej interwencji hodowlanej: w etapie 1 etap ciężkiego głodu skutkuje odróżnicowaniem komórek T, co jest realizowane przez oba selektywne wykorzystanie pożywek i dodanie środków farmaceutycznych zatwierdzonych przez FDA, które silnie hamują sygnalizację mTOR; aw etapie 2 następuje ponowne różnicowanie komórek T przy użyciu czynników kostymulujących i cytokin polaryzujących typu Th2 i TREG. Po 6 dniach hodowli uzyskaną populację TREG/Th2 poddaje się kriokonserwacji w porcjach jednorazowego użytku w dawkach terapeutycznych zgodnych z protokołem. Limfocyty T o fenotypie cytokin typu II charakteryzują się częściowo ekspresją czynnika transkrypcyjnego GATA3, podczas gdy populacje regulatorowych komórek T są częściowo identyfikowane przez ekspresję czynnika transkrypcyjnego FOXP3. Na początku hodowli bardzo niska częstotliwość limfocytów T wyraża GATA3 lub FOXP3. W przeciwieństwie do tego, produkt komórkowy RAPA-501 wytworzony w warunkach hodowli TREG/Th2 wykazuje ekspresję komórek T z wysoką częstotliwością, które są albo pojedynczo dodatnie dla GATA3, pojedyncze dodatnie dla FOXP3, albo podwójnie dodatnie zarówno dla GATA3, jak i FOXP3. Co ważne, ten profil czynnika transkrypcyjnego ulega ekspresji zarówno w wyprodukowanych komórkach T CD4+, jak i CD8+. Należy zauważyć, że zdefiniowano zarówno populacje komórek T CD4+, jak i CD8+ z funkcją TREG, w tym populację CD8+ TREG, która silnie hamuje GVHD; potencjalnie korzystne jest reprezentowanie obu podzbiorów w produkcie terapeutycznym, ponieważ komórki TREG CD4+ i CD8+ wykorzystują zróżnicowane mechanizmy efektorowe.

Populacje regulatorowych komórek T mogą tłumić patogenne populacje efektorowych komórek T za pomocą kilku określonych mechanizmów, w tym poprzez ekspresję cząsteczek ektonukleotydazy CD39 i CD73, które działają hydrolizując prozapalny ATP w kierunku immunosupresyjnego substratu adenozynowego. Rzeczywiście, komórki TREG, które wyrażają CD39, mają zwiększoną funkcję supresyjną i są związane z ustąpieniem choroby zapalnej jelit. Ponadto CD73 pośredniczy częściowo w funkcji supresyjnej ludzkich komórek TREG. Limfocyty T wytwarzane w warunkach hodowli TREG/Th2 wykazują zwiększoną ekspresję związanych z TREG cząsteczek efektorowych, CD39 i CD73. Oprócz ektonukleotydaz CD39/CD73, funkcję komórek TREG skorelowano również z ekspresją CD103, która jest integryną, która dyktuje lokalizację limfocytów nabłonkowych. Rzeczywiście, sygnalizacja receptora CD103 i IL-2 współpracuje, aby utrzymać tolerancję immunologiczną w błonie śluzowej jelita; ponadto komórki TREG wykazujące ekspresję CD103 mają kluczowe znaczenie dla poprawy doświadczalnej przewlekłej GVHD. Limfocyty T wytworzone w warunkach hodowli TREG/Th2 mają zwiększoną ekspresję cząsteczki efektorowej TREG CD103.

W modelach eksperymentalnych skuteczność terapii adoptywnej komórkami T zależy od pomyślnego wszczepienia i trwałości komórek T in vivo. Co ważne, stan różnicowania komórek T pomaga dyktować trwałość in vivo, przy czym mniej zróżnicowane komórki mają zwiększoną trwałość. Mysie komórki T oporne na rapamycynę, które wyrażały fenotyp centralnej pamięci T (TCM), miały zwiększony potencjał wszczepienia in vivo w stosunku do kontrolnych komórek T. Ponadto ludzkie limfocyty T oporne na rapamycynę miały również zwiększone wszczepienie w modelu człowieka do mysiego ksenogenicznej choroby przeszczep przeciwko gospodarzowi. Komórki T o zmniejszonym różnicowaniu w stosunku do populacji efektorowej pamięci T (TEM) zwiększyły trwałość in vivo i pośredniczą w zwiększonych efektach in vivo, w tym podzbiór TCM, podzbiór naiwnych komórek T, a ostatnio pamięć komórek macierzystych T (TSCM) podzbiór. Ten związek między stanem różnicowania komórek T a funkcją komórek T in vivo jest istotny dla komórek TREG, ponieważ: (1) komórki TREG o fenotypie TCM były bardziej skuteczne w zmniejszaniu eksperymentalnej GVHD w porównaniu z komórkami TREG o fenotypie TEM; oraz (2) Komórki TREG wykazujące ekspresję markera komórek macierzystych CD150 były wysoce skuteczne w zapobieganiu odrzuceniu przeszczepu komórek macierzystych. Limfocyty T wytwarzane w warunkach hodowli TREG/Th2 są wzbogacane w komórki mające stan zmniejszonego różnicowania zgodny z podzbiorem komórek macierzystych T, w tym ekspresję markera CD150.

Istotna jest również ocena profilu wydzielania cytokin przez wytworzone komórki RAPA-501. Po pierwsze, bardzo ważne jest, aby produkt komórkowy był zdolny do wydzielania IL-4, która jest cytokiną napędzającą późniejsze różnicowanie Th2. Po drugie, pożądane jest, aby adoptowana populacja komórek T była zdolna do wydzielania IL-2, ponieważ ta zdolność wskazuje na funkcję progenitorową, która pozwala komórkom T na łatwiejszą ekspansję in vivo bez potrzeby stosowania egzogennej IL-2. Na koniec ważne jest, że populacja komórek RAPA-501 ma zmniejszone wydzielanie cytokin typu Th1 lub Th17 IFN-gamma, TNF-alfa, IL-17 i GM-CSF. Wytworzony produkt komórkowy RAPA-501 wydziela IL-4 i IL-2 przy minimalnym wydzielaniu cytokin typu Th1 lub Th17.

Komórki T regulatorowe można również częściowo zdefiniować na podstawie ich zdolności do hamowania proliferacji lub funkcji efektorowych komórek T. Co ważne, wytworzone komórki TREG/Th2 silnie hamują wydzielanie przez komórki Th1/Tc1 wielu cytokin zapalnych, w tym IFN-gamma, GM-CSF i TNF-alfa. Aby ocenić mechanizm supresji, przeprowadzono eksperymenty z użyciem testu transwell, w którym komórki efektorowe T i komórki RAPA-501 są oddzielone przez filtr, który zapobiega kontaktowi między komórkami, ale umożliwia komunikację komórkową przez małe rozpuszczalne mediatory, takie jak cytokiny. Komórki RAPA-501 działały w sposób niezależny od TCR, hamując zdolność wydzielania cytokin przez efektorowe komórki T. Ponieważ do komory transwell zawierającej komórki RAPA-501 nie dostarczono kostymulacji, komórki RAPA-501 nie wymagały kostymulacji do modulowania poziomów cytokin zapalnych, w tym IL-2, IFN-gamma, GM-CSF i TNF-alfa . Następujące cytokiny i chemokiny zostały zredukowane przez komórki RAPA-501 w tym teście transwell, ze względnie równą supresją, w której pośredniczyły podzbiory CD4+ i CD8+ komórek RAPA-501: CCL1, CCL2, CCL7, CCL11, CCL13, CCL17, CCL20, CCL22, CCL26 , CXCL1, CXCL10, CXCL11, CXCL12, IL-6, IFN-gamma, GM-CSF i IL-10. Zdolność komórek TREG do zużywania IL-2 jest powszechnie opisywanym zjawiskiem, chociaż poprzednie badania zidentyfikowały wymóg kontaktu między komórkami w celu zużycia IL-2. Jako takie, komórki RAPA-501 są wyjątkowo zdolne do modulowania poziomu wielu cytokin zapalnych w sposób niezależny od kontaktu. Wyniki te sugerują, że komórki RAPA-501 stanowią odpowiedniego kandydata do neutralizacji wielu cytokin i chemokin związanych z różnymi chorobami, w tym wirusowym zapaleniem płuc. W świetle tej zdolności produktu komórkowego RAPA-501 do tłumienia zapalenia, w którym pośredniczą limfocyty T, w sposób niezależny od TCR, terapia RAPA-501 jest wysoce odpowiednia do allogenicznych, gotowych zastosowań terapeutycznych.

Przeprowadzono dalsze eksperymenty w celu oceny, czy produkt komórkowy RAPA-501 może również regulować ludzkie komórki mikrogleju OUN, które są komórkami pochodzenia szpikowego, które są analogiczne do populacji monocytów obwodowych. Aby ocenić, czy produkt komórkowy RAPA-501 może modulować prozapalne komórki mikrogleju w sposób niezależny od kontaktu, zbadano zdolność komórek RAPA-501 do zmniejszania stanu zapalnego linii komórek mikrogleju HMC3 w teście transwell. Komórki RAPA-501 zmniejszały wydzielanie przez komórki HMC3 prozapalnych cytokin IL-6 i IFN-gamma oraz prozapalnej chemokiny IP-10 przy stosunkowo niskim stosunku komórek RAPA-501 do komórek mikrogleju wynoszącym 1:40. Wyniki te pokazują, że produkt RAPA-501 jest zdolny do hamowania wydzielania cytokin i chemokin z populacji pochodzących ze szpiku w sposób niezależny od kontaktu i TCR, zapewniając w ten sposób dalsze uzasadnienie allogenicznego, gotowego wykorzystania RAPA- produkt 501.

Oceniano również produkt komórkowy RAPA-501 pod kątem stabilności fenotypu komórek T. Oznacza to, że ustalono, że czynnikiem ograniczającym terapię komórkową TREG może być na przykład plastyczność różnicowania, dzięki której cytokiny zapalne mogą wpływać na komórki TREG, aby utraciły swoje właściwości TREG i przyjęły stan zapalny typu Th1, który może następnie promować patogeneza choroby. Aby uwzględnić tę możliwość, zdolność komórek RAPA-501 do modulowania czynników transkrypcyjnych różnicowania komórek T po wydłużonym okresie hodowli, który obejmował kostymulację komórek T, brak inhibitorów mTOR i obecność polaryzujących cytokin zapalnych IFN-alfa i IL -6 było badane. Eksperymenty te wykazały, że produkt komórkowy RAPA-501 miał niezwykłą stabilność różnicowania (ciągła ekspresja FOXP3 i GATA3 w podzbiorach CD4+ i CD8+; brak regulacji w górę TBET).

Podsumowując, komórki RAPA-501 wykazują ekspresję fenotypu zgodnego z populacją regulatorowych komórek T, w tym: stabilną ekspresję czynników transkrypcyjnych TREG i Th2 FOXP3 i GATA3; ekspresja funkcjonalnych cząsteczek TREG CD39, CD73 i CD103; ekspresja obniżonego stanu różnicowania komórek T, w tym ekspresja markera komórek macierzystych CD150; wydzielanie cytokin typu Th2 z minimalnym wydzielaniem cytokin typu Th1/Th17; funkcjonalna zdolność supresyjna zarówno wobec komórek efektorowych Th1/Tc1, jak i prozapalnych komórek szpiku, w tym zmniejszone poziomy wielu zapalnych cytokin i chemokin; oraz zdolność do hamowania efektorów zapalnych w sposób niezależny od kontaktu i TCR. Łącznie te cechy produktu RAPA-501 przewidują, że terapia ta stanowi nowego i obiecującego kandydata do leczenia ARDS związanego z COVID-19.

Jest to pierwsze badanie fazy 1/fazy 2b przeprowadzone na ludziach oceniające terapię allogenicznymi komórkami RAPA-501 u uczestników z ARDS związanym z COVID-19. Ocenione zostaną dwie kohorty fazy 1, a mianowicie Kohorta 1 z niską dawką (40 x 10^6 komórek/wlew) i Kohorta 2 z dużą dawką (160 x 10^6 komórek/wlew); ten składnik fazy 1 będzie wykorzystywał toksyczność ograniczającą dawkę (DLT) jako pierwszorzędowy punkt końcowy. Pod warunkiem wykazania bezpieczeństwa w komponencie badania fazy 1, każdą kohortę dawki RAPA-501 można ocenić w randomizowanym komponencie fazy 2b. W fazie 2b, dla każdego poziomu dawki RAPA-501 określonego jako bezpieczny, pacjenci zostaną losowo przydzieleni do grupy otrzymującej komórki RAPA-501 (n=19) lub placebo (n=19). Po infuzji komórek RAPA-501 lub placebo, te randomizowane kohorty będą kontynuować terapię standardową (nie opartą na protokole). Pierwszorzędowym punktem końcowym badania fazy 2b jest śmiertelność w ciągu 30 dni, a celem statystycznym było zmniejszenie śmiertelności u biorców RAPA-501 w porównaniu z randomizowaną kohortą kontrolną otrzymującą placebo.

Uczestnicy badania muszą być hospitalizowanymi pacjentami z ARDS związanym z COVID-19, w szczególności: zakażeniem SARS-CoV-2, co określono za pomocą testu RT-PCR lub równoważnego; naciek płucny w badaniu radiologicznym; oraz diagnoza ARDS wymagająca intensywnego wspomagania oddechu, w tym wentylacji nieinwazyjnej, takiej jak wysokoprzepływowa kaniula nosowa lub wentylacja mechaniczna. Badanie składa się z: (1) etapu włączenia do badania (przesiewowego); oraz (2) po potwierdzeniu kwalifikowalności zostanie przeprowadzona infuzja komórek RAPA-501. W Kohorcie 1 infuzja komórek RAPA-501 będzie w dawce 40 x 10^6 komórek/infuzję; początkowo leczonych zostanie trzech uczestników, z tygodniową przerwą między uczestnikami tego składnika fazy 1 w celu oceny DLT, która zostanie zdefiniowana jako toksyczność stopnia 3 lub wyższego przypisywana komórkom RAPA-501 w ciągu 7 dni od infuzji. W dowolnym momencie, gdy terapia z Kohorty 1 zostanie uznana za bezpieczną (0/3 lub 1/6 z DLT), wówczas terapia RAPA-501 z Kohorty 1 może zostać oceniona w komponencie randomizowanego badania fazy 2b, aby odnieść się do głównego celu badania dotyczącego do 30-dniowej śmiertelności. W każdym momencie, w którym terapia Kohorty 1 zostanie uznana za bezpieczną, można rozpocząć leczenie Kohorty 2, która oceni infuzję komórek RAPA-501 w dawce 160 x 10^6 komórek/infuzję. W taki sam sposób jak w przypadku Kohorty 1, jeśli terapia Kohorty 2 zostanie uznana za bezpieczną, terapię RAPA-501 w Kohorcie 2 można ocenić w komponencie randomizowanego badania fazy 2b, aby odnieść się do głównego celu badania związanego z 30-dniową śmiertelnością. Badanie będzie składało się z trzech głównych etapów: (1) wyszczególniony powyżej 30-dniowy odstęp dotyczący głównych celów badania; (2) przedłużony, łącznie 90-dniowy odstęp w celu dalszego stosunkowo intensywnego monitorowania klinicznego potencjalnych punktów końcowych dotyczących skuteczności i bezpieczeństwa; oraz (3) wydłużony, łącznie 6-miesięczny okres w celu zapewnienia długoterminowej obserwacji klinicznej i dalszego monitorowania parametrów laboratoryjnych związanych z punktami końcowymi dotyczącymi odporności i wirusów.