RAPA-501-Alloterapia di COVID-19-ARDS

Il primo componente dello studio di Fase 1 sull'uomo valuterà due livelli di dose di cellule standard RAPA-501-ALLO in pazienti con ARDS correlata a COVID-19, con endpoint chiave di sicurezza, biologici e potenziali effetti di modifica della malattia. Il componente dello studio di fase 2b randomizzato, in doppio cieco, controllato con placebo valuterà l'infusione di RAPA-501 ALLO off the shelf cells o un'infusione di controllo, con l'endpoint primario che valuta se le cellule RAPA-501 riducono la mortalità a 30 giorni.

La pandemia di COVID-19 è un disastro che si manifesta con morbilità e mortalità progressive. Al 6 aprile 2021, si stima che 132,1 milioni di persone abbiano contratto il virus e 2.866.000 morti siano risultate a livello globale. Gli Stati Uniti hanno i totali più alti con una stima di 30,8 milioni di persone diagnosticate e 556.000 morti. Gli Stati Uniti hanno i totali più alti con una stima di 22,4 milioni di persone diagnosticate e 375.000 morti. Nelle fasi 1 e 2 di COVID-19, la propagazione virale all'interno del paziente è predominante. Pertanto, gli interventi terapeutici si concentrano su molecole immunitarie (siero di convalescenza, anticorpi monoclonali) e farmaci antivirali (remdesivir). In netto contrasto, la forma più grave e mortale di COVID-19, lo stadio 3, non è guidata dalla propagazione virale, ma da una risposta immunitaria fuori controllo (iperinfiammazione) causata dall'aumento delle molecole immunitarie note come citochine e chemochine. Pertanto, gli interventi terapeutici per la malattia in stadio 3 si concentrano su farmaci antinfiammatori come la terapia anti-citochinica (farmaci anti-IL-6) o la terapia con corticosteroidi. Sfortunatamente, tali interventi non affrontano la patogenesi completa della fase 3 COVID-19, che include l'iperinfiammazione dovuta a "tempesta di citochine" e "tempesta di chemochine", danno tissutale, ipercoagulazione e insufficienza multiorgano (inclusi polmoni, cuore, reni e cervello). La componente polmonare della malattia in stadio 3 comprende la sindrome da distress respiratorio acuto (ARDS), che è un percorso finale comune di morte del paziente a causa di una miriade di condizioni, tra cui polmonite, sepsi e traumi. C'è un disperato bisogno di nuovi trattamenti cellulari in grado di fornire sia un effetto di modulazione immunitaria su vasta scala sia un effetto rigenerativo dei tessuti, come le cellule TREG/Th2 ibride allogeniche standard RAPA-501-ALLO.

Il meccanismo della polmonite fatale nell'infezione sperimentale da coronavirus murino è mediato dall'attivazione innata dell'inflammasoma, una conseguente robusta infiltrazione di monociti e macrofagi infiammatori e un conseguente aumento di più citochine e chemochine pro-infiammatorie. È importante sottolineare che la risposta delle cellule T adattive CD4 + e CD8 + all'infezione sperimentale da coronavirus può essere curativa o propagante la malattia. L'infiammazione polmonare indotta da virus è stata valutata anche in modelli di primati non umani, che hanno confermato che l'attivazione immunitaria disregolata durante la polmonite virale comporta uno squilibrio del sottogruppo di cellule T, una cascata infiammatoria derivata da monociti a valle e la conseguente lesione delle cellule epiteliali. Negli esseri umani, la gravità dell'infezione del tratto respiratorio inferiore indotta da virus è correlata all'aumento del numero di cellule T CD8+ di memoria effettrici nelle vie aeree. Come recentemente esaminato, l'infezione da coronavirus umano rappresenta una battaglia in corso tra virus e ospite, con la natura della risposta che detta la cura della malattia o, in alternativa, la malattia polmonare aggravata. Esistono prove che il sistema immunitario adattativo contribuisce all'infiammazione polmonare durante la malattia da Coronavirus (SARS-CoV) associata alla SARS: ovvero, il liquido broncoalveolare di tali soggetti presentava un aumento del numero di cellule T e un aumento delle molecole associate a Th1 IL-12, IFN-gamma, e IP-10. Questa risposta infiammatoria mediata dalle cellule T adattative a valle è guidata in parte dalla viroporina 3a della proteina SARS-Co-V. Nello specifico, le molecole di viroporina attivano l'inflammasoma NLRP3 che collega le risposte infiammatorie innate ad adattative. Inoltre, sia SARS-CoV che SARS-CoV-2 esprimono una molecola ORF3a open-reading-frame, che attiva anche l'inflammasoma NLRP3.

Recentemente è stata segnalata la natura dell'immunità durante la risoluzione dell'infezione sintomatica da COVID-19, vale a dire: comparsa di cellule che secernono anticorpi e cellule helper follicolari T CD4+; aumento delle cellule T CD8+ che esprimono perforina e granzima; e relativa mancanza di aumento delle citochine e delle chemochine pro-infiammatorie. In netto contrasto, i pazienti con grave malattia COVID-19 avevano livelli plasmatici notevolmente aumentati di citochine (incluse IL-2 e TNF-alfa) e chemochine (incluse IP-10 e MIP-1-alfa) (Huang et al., Lancet, 2020). Collettivamente, questi risultati indicano che le risposte pro-infiammatorie di citochine e chemochine che si verificano nel COVID-19 grave sono dannose e che approcci antinfiammatori efficaci possono infine rivelarsi terapeutici. Tuttavia, come precedentemente dettagliato, la malattia COVID-19 allo stadio 3 più avanzata è caratterizzata da una componente ARDS e tempesta di citochine, in quanto tale, i nuovi approcci per il trattamento della polmonite virale COVID-19 dovrebbero incorporare in modo ottimale sia un elemento antinfiammatorio che un elemento di protezione/riparazione dei tessuti.

La fase 3 COVID-19 comporta una mortalità stimata a 30 giorni di oltre il 50% nonostante l'utilizzo della terapia intensiva, la ventilazione meccanica e le terapie di supporto per gestire l'ARDS e l'insufficienza multiorgano. Approcci antinfiammatori mirati ad azione ristretta come le terapie anti-IL-6 non sono stati particolarmente efficaci nella fase 3 COVID-19 e l'ampio approccio farmaceutico antinfiammatorio della terapia con corticosteroidi, in alcuni studi ha solo moderatamente temperato la malattia in fase 3. La terapia cellulare viene valutata anche nella fase 3 COVID-19, in particolare, cellule stromali mesenchimali (MSC) e ora, con l'attuale protocollo RAPA-501-ALLO, cellule T regolatorie (TREG). La terapia TREG ha un meccanismo d'azione che include un effetto antinfiammatorio multiforme, che pone la terapia TREG in prima linea nella futura terapia curativa di un'ampia gamma di malattie autoimmuni e neurodegenerative, oltre a complicanze del trapianto, come il trapianto contro l'ospite malattia (GVHD) e rigetto del trapianto. Inoltre, la terapia TREG può fornire un effetto rigenerativo sui tessuti, che pone la terapia cellulare TREG alla guida di nuovi sforzi di medicina rigenerativa per riparare una miriade di malattie a base tissutale, come malattie della pelle, dei muscoli, dei polmoni, del fegato, dell'intestino, cuore (infarto del miocardio) e cervello (ictus). La terapia cellulare pronta all'uso RAPA-501-ALLO offre questo potenziale meccanismo d'azione a doppia minaccia che incorpora sia effetti antinfiammatori che di riparazione dei tessuti per un trattamento efficace di COVID-19 e molteplici condizioni letali.

Le cellule RAPA-501-ALLO sono generate da volontari sani, crioconservate, conservate in banca e sono quindi disponibili per la terapia standard in qualsiasi momento. Durante la produzione, le cellule T vengono "riprogrammate" ex vivo utilizzando un nuovo processo brevettato in due fasi di 7 giorni che prevede la de-differenziazione delle cellule T e la successiva ri-differenziazione verso i due programmi antinfiammatori chiave, i percorsi TREG e Th2, creando così un prodotto "ibrido". Il fenotipo ibrido inibisce le vie infiammatorie operative in COVID-19, inclusa la modulazione di più citochine e chemochine, che attirano le cellule infiammatorie nel tessuto per l'inizio del danno multiorgano. Il fenotipo ibrido TREG e Th2 delle cellule RAPA-501-ALLO regola in modo incrociato le popolazioni Th1 e Th17 che danno inizio all'iperinfiammazione di COVID-19. La modulazione immunitaria di RAPA-501 avviene in modo indipendente dal recettore delle cellule T, consentendo così una terapia cellulare pronta all'uso. Infine, in modelli sperimentali di polmonite virale e ARDS, le cellule TREG mediano un effetto protettivo sul tessuto alveolare polmonare. A causa di questo meccanismo d'azione unico che coinvolge sia gli effetti antinfiammatori che quelli protettivi dei tessuti, il prodotto a cellule T allogeniche RAPA-501 è particolarmente adatto per la valutazione nel contesto dell'ARDS correlato a COVID-19 allo stadio 3.

In generale, la malattia autoimmune classica, la malattia neurodegenerativa e la malattia infiammatoria indotta da virus sono guidate dalla predominanza delle risposte di tipo Th1/Th17 con una relativa insufficienza dei sottoinsiemi Th2 e TREG immunosoppressivi controregolatori. Le cellule TREG, che sono definite in parte dalla loro espressione del fattore di trascrizione FOXP3, sono state ampiamente studiate in modelli sperimentali per la loro capacità di modulare le malattie autoimmuni, le malattie neurodegenerative e le complicanze del trapianto, tra cui la malattia del trapianto contro l'ospite (GVHD) e il trapianto rifiuto. È importante sottolineare che la produzione di cellule T di IL-2 o la somministrazione esogena di IL-2 guida l'infiammazione polmonare durante l'infezione virale sperimentale; pertanto, dato il ruolo noto delle cellule TREG come consumatore di IL-2, esiste una forte logica meccanicistica per un contributo benefico delle cellule TREG durante l'infiammazione polmonare guidata da virus. Inoltre, in un modello murino sperimentale di infiammazione polmonare e lesioni polmonari indotte da virus, gli interventi che hanno aumentato il numero e la funzione delle cellule TREG hanno accelerato la riparazione delle lesioni polmonari. E le cellule Th2, che sono definite in parte dalla loro espressione del fattore di trascrizione GATA3, sono state descritte trent'anni fa come una potente popolazione controregolatoria per prevenire la predominanza delle cellule Th1. È importante notare che i dati clinici indicano che le manovre che aumentano le popolazioni di cellule immunosoppressive, comprese le cellule TREG, possono ridurre gravi malattie infiammatorie come la malattia del trapianto contro l'ospite senza compromettere l'immunità antivirale. Inoltre, sia nei modelli sperimentali che negli studi clinici, un livello appropriato di cellule TREG può determinare un miglioramento complessivo dell'infiammazione polmonare durante la bronchiolite virale. Collettivamente, questi risultati indicano che le cellule T che esprimono un fenotipo combinato TREG/Th2 produrrebbero prevedibilmente effetti benefici nel contesto dell'infiammazione polmonare indotta da virus e lesioni associate alla grave malattia COVID-19 in stadio 3.

Gli studi clinici hanno valutato le cellule di tipo TREG e Th2 per varie condizioni, in particolare le complicanze del trapianto. In generale, si ritiene che le cellule (n)TREG naturali derivate dal timo esprimano un fenotipo più stabile rispetto alle cellule (i)TREG indotte post-timiche; in confronto, le cellule iTREG possono mediare una soppressione più potente. Tuttavia, sia le cellule nTREG che quelle iTREG sono suscettibili alla plasticità della differenziazione, il che crea preoccupazione che una popolazione di TREG potenzialmente terapeutica possa convertirsi in fenotipi patogeni Th1/Th17 in vivo. Le cellule TREG espanse ex vivo (n) sono state valutate nell'ambito del trapianto allogenico di cellule ematopoietiche (HCT) utilizzando donatori di sangue del cordone ombelicale; più recentemente, lo stesso gruppo di ricerca ha sviluppato ex vivo una terapia cellulare espansa (i)TREG per limitare le complicanze del trapianto. Inoltre, le cellule nTREG espanse ex vivo sono state valutate nel contesto del diabete mellito di tipo I; questo studio clinico ha scoperto che la terapia con TREG era sicura e almeno transitoriamente efficace nel migliorare il controllo della malattia. Inoltre, nel contesto della sclerosi laterale amiotrofica (SLA), che è una malattia propagata da una grave risposta infiammatoria periferica e centrale guidata da Th1, uno studio clinico sul trasferimento adottivo di cellule nTREG ha identificato che l'intervento era sicuro e ha mostrato risultati promettenti in termini di Miglioramento della malattia di SLA. Infine, in uno studio di fase II sulla terapia cellulare Th2 resistente alla rapamicina nel contesto di HCT allogenico a bassa intensità, il trasferimento adottivo di cellule Th2 era sicuro e associato a uno spostamento verso la polarizzazione Th2 in vivo, la conservazione dell'attecchimento del donatore, la stabilizzazione del chimerismo misto , un basso tasso di GVHD e potenti effetti antitumorali in pazienti con neoplasie ematologiche refrattarie. Collettivamente, questi risultati della sperimentazione clinica indicano che il trasferimento adottivo di popolazioni di tipo TREG e Th2 può essere somministrato in modo sicuro, anche nell'impostazione HCT allogenica, e può mediare la modulazione benefica delle condizioni infiammatorie.

La produzione ex vivo può essere utilizzata per generare cellule (i)TREG indotte dal pool post-timico di cellule T periferiche. Nel protocollo attuale, il metodo di produzione si concentrerà sull'inibizione di mTOR, che è un intervento consolidato che promuove l'induzione delle cellule TREG. In combinazione con l'inibizione di mTOR, il sistema di coltura utilizzato incorpora citochine che promuovono sia un fenotipo Th2 che un fenotipo TREG, vale a dire IL-4, TGF-beta e IL-2. Infine, il protocollo includerà un prodotto di cellule TREG/Th2 composto da entrambi i sottoinsiemi di cellule T CD4+ e CD8+, in quanto questi sottoinsiemi di cellule T controregolatori esprimono repertori di recettori differenziali delle cellule T (TCR) e una varietà di meccanismi effettori che possono potenzialmente migliorare un effetto antinfiammatorio. Per la produzione di RAPA-501, le cellule mononucleate del sangue periferico vengono raccolte da un'aferesi allo stato stazionario e sottoposte al seguente intervento di coltura in due fasi: nella fase 1, una grave fase di fame provoca la de-differenziazione delle cellule T, che si realizza attraverso entrambi utilizzo selettivo dei media e aggiunta di agenti farmaceutici approvati dalla FDA che inibiscono potentemente la segnalazione mTOR; e nella fase 2, la ri-differenziazione delle cellule T avviene utilizzando agenti di costimolazione e citochine polarizzanti di tipo Th2 e TREG. Dopo 6 giorni di coltura, la risultante popolazione TREG/Th2 viene crioconservata in aliquote monouso a dosi terapeutiche guidate dal protocollo. Le cellule T del fenotipo delle citochine di tipo II sono caratterizzate in parte dalla loro espressione del fattore di trascrizione GATA3, mentre le popolazioni di cellule T regolatorie sono identificate in parte dalla loro espressione del fattore di trascrizione FOXP3. All'inizio della coltura, una frequenza molto bassa di cellule T esprime GATA3 o FOXP3. Al contrario, il prodotto cellulare RAPA-501 fabbricato nelle condizioni di coltura TREG/Th2 esprime un'alta frequenza di cellule T che sono o singolo positivo per GATA3, singolo positivo per FOXP3 o doppio positivo sia per GATA3 che per FOXP3. È importante sottolineare che questo profilo del fattore di trascrizione è espresso sia nelle cellule T CD4+ che CD8+ prodotte. È importante notare che sono state definite entrambe le popolazioni di cellule T CD4+ e CD8+ con funzione TREG, inclusa una popolazione TREG CD8+ che sopprime potentemente la GVHD; è potenzialmente vantaggioso avere entrambi i sottoinsiemi rappresentati in un prodotto terapeutico poiché le cellule TREG CD4+ e CD8+ utilizzano meccanismi effettori differenziali.

Le popolazioni di cellule T regolatorie possono sopprimere le popolazioni di cellule T effettrici patogene mediante diversi meccanismi definiti, inclusa l'espressione di molecole di ectonucleotidasi CD39 e CD73, che agiscono per idrolizzare l'ATP pro-infiammatorio verso il substrato di adenosina immunosoppressivo . Infatti, le cellule TREG che esprimono CD39 possiedono una maggiore funzione soppressiva e sono state associate alla risoluzione della malattia infiammatoria intestinale. Inoltre, la funzione soppressiva delle cellule TREG umane è mediata in parte dal CD73. Le cellule T prodotte nella condizione di coltura TREG/Th2 hanno un aumento nell'espressione delle molecole effettrici associate a TREG, CD39 e CD73. Oltre alle ectonucleotidasi CD39/CD73, la funzione delle cellule TREG è stata anche correlata con l'espressione di CD103, che è un'integrina che determina la localizzazione dei linfociti epiteliali. Infatti, la segnalazione del recettore CD103 e IL-2 coopera per mantenere la tolleranza immunitaria nella mucosa intestinale; inoltre, le cellule TREG che esprimono CD103 sono fondamentali per il miglioramento della GVHD cronica sperimentale . Le cellule T prodotte nella condizione di coltura TREG/Th2 hanno una maggiore espressione della molecola effettrice TREG CD103.

Nei modelli sperimentali, l'efficacia della terapia con cellule T adottive dipende dal successo dell'attecchimento e dalla persistenza delle cellule T in vivo. È importante sottolineare che lo stato di differenziazione delle cellule T aiuta a dettare la persistenza in vivo, con cellule meno differenziate che hanno una maggiore persistenza. Le cellule T murine resistenti alla rapamicina, che esprimevano un fenotipo di memoria centrale T (TCM), avevano aumentato il potenziale di attecchimento in vivo rispetto alle cellule T di controllo. Inoltre, le cellule T umane resistenti alla rapamicina avevano anche un aumento dell'attecchimento in un modello da umano a murino di malattia del trapianto contro l'ospite xenogenico. Le cellule T con differenziazione ridotta rispetto alla popolazione della memoria effettrice T (TEM) hanno aumentato la persistenza in vivo e mediano un aumento degli effetti in vivo, tra cui il sottoinsieme TCM, il sottoinsieme di cellule T naïve e, più recentemente, la memoria delle cellule staminali T (TSCM) sottoinsieme. Questa relazione tra lo stato di differenziazione delle cellule T e la funzione delle cellule T in vivo è rilevante per le cellule TREG, in quanto: (1) le cellule TREG del fenotipo TCM erano più efficaci nel ridurre la GVHD sperimentale rispetto alle cellule TREG del fenotipo TEM; e (2) le cellule TREG che esprimevano il marcatore di cellule staminali CD150 erano altamente efficaci per la prevenzione del rigetto del trapianto di cellule staminali. Le cellule T prodotte nella condizione di coltura TREG/Th2 sono arricchite per le cellule aventi uno stato di differenziazione ridotto coerente con un sottogruppo di cellule staminali T, inclusa l'espressione del marcatore CD150.

È anche importante valutare il profilo di secrezione di citochine delle cellule RAPA-501 prodotte. Innanzitutto, è fondamentale che il prodotto cellulare sia in grado di secrere IL-4, che è la citochina pilota per la successiva differenziazione Th2. In secondo luogo, è auspicabile che una popolazione di cellule T trasferite in modo adottivo sia in grado di secernere IL-2, poiché questa capacità indica una funzione progenitrice che consente alle cellule T di espandersi più facilmente in vivo senza la necessità di IL-2 esogena. Infine, è importante che la popolazione cellulare RAPA-501 abbia una ridotta secrezione delle citochine di tipo Th1 o Th17 IFN-gamma, TNF-alfa, IL-17 e GM-CSF. Il prodotto cellulare RAPA-501 fabbricato secerne IL-4 e IL-2 con una secrezione minima di citochine di tipo Th1 o Th17.

Le cellule T regolatrici possono anche essere definite in parte dalla loro capacità di sopprimere la proliferazione o la funzione delle cellule T effettrici. È importante sottolineare che le cellule TREG/Th2 prodotte sopprimono potentemente la secrezione delle cellule Th1/Tc1 di più citochine infiammatorie, tra cui IFN-gamma, GM-CSF e TNF-alfa. Per valutare il meccanismo di soppressione, sono stati eseguiti esperimenti utilizzando il saggio transwell, per cui le cellule T effettrici e le cellule RAPA-501 sono separate da un filtro che impedisce il contatto cellula-cellula ma consente la comunicazione cellulare da parte di piccoli mediatori solubili come le citochine. Le cellule RAPA-501 hanno agito in modo indipendente dal TCR per sopprimere la capacità di secrezione di citochine delle cellule T effettrici. Poiché non è stata fornita alcuna co-stimolazione alla camera transwell contenente cellule RAPA-501, le cellule RAPA-501 non hanno richiesto la co-stimolazione per modulare i livelli di citochine infiammatorie, inclusi IL-2, IFN-gamma, GM-CSF e TNF-alfa . Le seguenti citochine e chemochine sono state ridotte dalle cellule RAPA-501 in questo test transwell, con una soppressione relativamente uguale mediata dai sottoinsiemi CD4+ e CD8+ delle cellule RAPA-501: CCL1, CCL2, CCL7, CCL11, CCL13, CCL17, CCL20, CCL22, CCL26 , CXCL1, CXCL10, CXCL11, CXCL12, IL-6, IFN-gamma, GM-CSF e IL-10. La capacità delle cellule TREG di consumare IL-2 è un fenomeno comunemente descritto, sebbene studi precedenti abbiano identificato il requisito del contatto cellula-cellula per il consumo di IL-2. In quanto tali, le cellule RAPA-501 sono unicamente in grado di modulare il livello di più citochine infiammatorie in modo indipendente dal contatto. Questi risultati suggeriscono che le cellule RAPA-501 rappresentano un candidato adatto per la neutralizzazione di più citochine e chemochine associate a varie malattie, inclusa l'infiammazione polmonare indotta da virus. Alla luce di questa capacità del prodotto cellulare RAPA-501 di sopprimere l'infiammazione mediata dalle cellule T in modo indipendente dal TCR, la terapia RAPA-501 è altamente adatta per applicazioni di trattamento allogenico e standard.

Sono stati condotti ulteriori esperimenti per valutare se il prodotto cellulare RAPA-501 potesse anche regolare le cellule microgliali del SNC umano, che sono cellule di derivazione mieloide analoghe alla popolazione di monociti periferici. Per valutare se il prodotto cellulare RAPA-501 potesse modulare le cellule microgliali pro-infiammatorie in modo indipendente dal contatto, la capacità delle cellule RAPA-501 di ridurre lo stato infiammatorio della linea cellulare microgliale HMC3 è stata testata in un test transwell. Le cellule RAPA-501 hanno ridotto la secrezione cellulare HMC3 delle citochine pro-infiammatorie IL-6 e IFN-gamma e della chemochina pro-infiammatoria IP-10 con un rapporto relativamente basso tra cellule RAPA-501 e cellule microgliali di 1:40. Questi risultati dimostrano che il prodotto RAPA-501 è in grado di inibire la secrezione di citochine e chemochine da popolazioni di derivazione mieloide in modo indipendente dal contatto e dal TCR, fornendo così un'ulteriore motivazione per l'utilizzo allogenico e standardizzato del RAPA- 501 prodotto.

È stato valutato anche il prodotto cellulare RAPA-501 per la stabilità del fenotipo delle cellule T. Cioè, è stato determinato che un fattore limitante della terapia cellulare TREG può essere la plasticità della differenziazione, per esempio, per cui le cellule TREG possono essere influenzate dalle citochine infiammatorie per perdere le loro caratteristiche TREG e adottare uno stato infiammatorio di tipo Th1, che può quindi promuovere patogenesi della malattia. Per affrontare questa possibilità, la capacità delle cellule RAPA-501 di modulare i fattori di trascrizione della differenziazione delle cellule T dopo un intervallo di coltura esteso che ha coinvolto la co-stimolazione delle cellule T, l'assenza di inibitori di mTOR e la presenza delle citochine infiammatorie polarizzanti IFN-alfa e IL -6 è stato studiato. Questi esperimenti hanno dimostrato che il prodotto cellulare RAPA-501 aveva una notevole stabilità di differenziazione (espressione continua di FOXP3 e GATA3 nei sottoinsiemi CD4+ e CD8+; mancanza di up-regulation di TBET).

In sintesi, le cellule RAPA-501 esprimono un fenotipo coerente con una popolazione di cellule T regolatorie, tra cui: espressione stabile dei fattori di trascrizione TREG e Th2 FOXP3 e GATA3; espressione delle molecole funzionali TREG CD39, CD73 e CD103; espressione di uno stato ridotto di differenziazione delle cellule T, inclusa l'espressione del marcatore di cellule staminali CD150; secrezione di un modello Th2 di citochine con minima secrezione di citochine di tipo Th1/Th17; capacità soppressiva funzionale contro le cellule effettrici Th1/Tc1 e le cellule mieloidi pro-infiammatorie, inclusi livelli ridotti di più citochine infiammatorie e chemochine; e una capacità di inibire gli effettori infiammatori in modo indipendente dal contatto e dal TCR. Collettivamente, queste caratteristiche del prodotto RAPA-501 prevedono che questa terapia rappresenti un candidato nuovo e promettente per il trattamento dell'ARDS correlata a COVID-19.

Questo è un primo studio di fase 1/fase 2b sull'uomo che valuta la terapia cellulare RAPA-501 allogenica nei partecipanti con ARDS correlata a COVID-19. Saranno valutate due coorti di fase 1, vale a dire una coorte 1 a basso dosaggio (40 x 10^6 cellule/infusione) e una coorte 2 ad alto dosaggio (160 x 10^6 cellule/infusione); questo componente di fase 1 utilizzerà la tossicità dose-limitante (DLT) come endpoint primario. A condizione che la sicurezza sia dimostrata nella componente dello studio di fase 1, ciascuna coorte di dose RAPA-501 può essere valutata nella componente randomizzata di fase 2b. Nella componente di fase 2b, per ogni livello di dose di RAPA-501 ritenuto sicuro, i pazienti saranno randomizzati a ricevere cellule RAPA-501 (n=19) o placebo (n=19). Dopo l'infusione di cellule RAPA-501 o placebo, queste coorti randomizzate continueranno con la terapia standard (non guidata dal protocollo). L'endpoint primario dello studio di fase 2b è la mortalità a 30 giorni, con l'obiettivo statistico di ridurre la mortalità nei destinatari di RAPA-501 rispetto alla coorte randomizzata di controllo con placebo.

I partecipanti allo studio devono essere pazienti ospedalizzati con ARDS correlata a COVID-19, in particolare: infezione da SARS-CoV-2, determinata mediante RT-PCR o test equivalente; infiltrato polmonare all'esame radiologico; e una diagnosi di ARDS che richiede un supporto respiratorio intensivo inclusa la ventilazione non invasiva come la cannula nasale ad alto flusso o la ventilazione meccanica. Lo studio consiste in: (1) una fase di iscrizione allo studio (screening); e (2) dopo la conferma dell'idoneità, verrà eseguita l'infusione di cellule RAPA-501. Nella coorte 1, l'infusione di cellule RAPA-501 sarà alla dose di 40 x 10^6 cellule/infusione; tre partecipanti saranno inizialmente trattati, con una settimana che separa i partecipanti in questo componente di fase 1 da valutare per DLT, che sarà definito come tossicità di grado 3 o superiore attribuibile alle cellule RAPA-501 entro 7 giorni dall'infusione. In qualsiasi momento in cui la terapia della coorte 1 è ritenuta sicura (0/3 o 1/6 con DLT), allora la terapia RAPA-501 della coorte 1 può essere valutata nella componente randomizzata dello studio di fase 2b per raggiungere l'obiettivo primario dello studio relativo alla mortalità a 30 giorni. In qualsiasi momento in cui la terapia della coorte 1 è ritenuta sicura, può essere avviato il trattamento della coorte 2, che valuterà l'infusione di cellule RAPA-501 a una dose di 160 x 10^6 cellule/infusione. Allo stesso modo della coorte 1, se la terapia della coorte 2 è ritenuta sicura, la terapia RAPA-501 della coorte 2 può essere valutata nella componente dello studio randomizzato di fase 2b per affrontare l'obiettivo primario dello studio relativo alla mortalità a 30 giorni. Lo studio comprenderà tre fasi principali: (1) l'intervallo di 30 giorni sopra dettagliato relativo agli obiettivi primari dello studio; (2) un intervallo esteso e totale di 90 giorni per continuare il monitoraggio clinico relativamente intenso dei potenziali endpoint di efficacia e sicurezza; e (3) un intervallo totale esteso di 6 mesi per fornire un follow-up clinico a lungo termine e per continuare a monitorare i parametri di laboratorio relativi agli endpoint immunitari e virali.