Hladiny IL-10, IL-12 a IL-18 v gingivální crevikulární tekutině pacientů s parodontitidou a zdravými kontrolami

Interleukin-10 (IL-10) je jedním z nejúčinnějších protizánětlivých cytokinů, protože vyvolává anergii T buněk (neodpovídá na antigen) a snižuje produkci některých prozánětlivých cytokinů. Změněná exprese IL-10, genetická predispozice a přítomnost specifických parodontálních bakterií však mohou přispět k narušení rovnováhy Th1/Th2 a rozvoji agresivní parodontitidy.

Interleukin-12 (IL-12) je heterodimer složený z podjednotek p35 a p40, které tvoří bioaktivní IL-12 (p70). IL-12 je základním mediátorem časné vrozené imunitní odpovědi a klíčovým induktorem buněčné imunity. Jeho nejdůležitějším úkolem je stimulovat produkci T lymfocytů a interferonu-γ (IFN-γ) přirozenými zabíječskými buňkami, a tím podporovat Th1 reakce. Význam IL-12 není omezen na iniciaci imunitní odpovědi, může přispívat k udržení imunity. Protože v nepřítomnosti IL-12 se Th1 odpovědi rychle ztrácejí.

Interleukin-18 (IL-18) je prozánětlivý cytokin patřící do rodiny cytokinů IL-1. Tento cytokin byl původně identifikován jako přirozený zabiják a cytokin, který indukuje IFN-y produkovaný T buňkami. IL-18 působí synergicky s IL-12 na podporu produkce IFN-y a růstu Th1 buněk, ale jeho aktivita nezávisí na IL-12.

Když se tyto informace spojí, cílem naší studie bylo hodnocení účinků koncentrací IL-10, IL-12 a IL-18 v gingivální štěrbinové tekutině na onemocnění parodontu spolu s klinickými parametry.

Plánováno je zařazení 30 parodontálně zdravých jedinců s parodontitidou stupně B-C stadia III-IV podle Klasifikace parodontálních a periimplantátových onemocnění a stavů z roku 2017, kteří se po klinických a radiografických vyšetřeních přihlásili na Stomatologickou parodontologickou kliniku Istanbulské univerzity. Všichni jednotlivci, kteří mají být zařazeni, budou informováni o účelu a způsobu studie a bude získán jejich souhlas.

Před studií bude zajištěno, že orální stav jedince není způsoben žádným jiným faktorem (neznámé systémové onemocnění, onemocnění krve apod.). Jednotlivci zahrnutí do studie; bude zaznamenána systémová a orální anamnéza, stav kouření, stav systémového onemocnění a budou provedena následující klinická měření.

Od jedinců vhodných pro model studie budou odebrány vzorky gingivální krevikulární tekutiny (GCF) a budou zaznamenány periodontální indexy. Hladiny IL-10, IL-12 a IL-18 budou stanoveny v odebraných vzorcích GCF. Řešitel nezahrne osoby, které byly zařazeny do jiných studií, které prošly nebo budou schváleny etickou komisí, a nezahrne osoby, které budou zařazeny do této studie, zavazuje se ji nezařadit do své práce.

Klinická měření zahrnují index plaku (PI), index gingivy (GI), krvácení při sondování (BOP), hloubku sondy (PD), volný okraj dásně (FGM), měření úrovně klinického připojení (CAL), parametry mobility. Měření byla provedena stejným výzkumníkem ze šesti různých bodů všech zubů: meziobukální, střední bukální, disto-bukální, meziolingvální/palatinální, střední jazyk/palatinální, disto-lingvální/palatinální. Bude měřen a zaznamenán jediným člověkem parodontální sondou typu Williams (Hu-Friedy, USA). Tato měření jsou neinvazivní a umožní nám určit stav parodontu. Po klinickém vyšetření a měření pacientů, kteří splnili kritéria pro zařazení a podepsali dobrovolný souhlas, budou analyzovány vzorky gingivální krevikulární tekutiny, které mají být pacientům odebrány, a výsledky budou vyhodnoceny. Vzorky budou izolovány z gingivální rýhy pomocí proužků absorpčního papíru (Periopaper®, Proflow Inc., Amitiyville, NY, USA) a ve vzorcích získaných metodou ELISA budou provedeny biochemické analýzy v souladu s protokoly obsaženými v souprava. Biochemické analýzy budou prováděny na Istanbulské univerzitě, Istanbulská lékařská fakulta, Ústav lékařské biochemie.

Metody klinického hodnocení, které se plánují použít ve studii, jsou uvedeny níže:

1. Index plaku
2. Hloubka sondování
3. Krvácení při sondování
4. Měření úrovně klinického připojení
5. Gingivální okraj zdarma
6. Gingivální index
7. Mobilita Vzorky papírových proužků (Periopaper®, Proflow Inc., Amitiyville, NY, USA) umístěné v gingiválním žlábku budou umístěny do eppendorfových zkumavek k laboratornímu vyšetření během sezení 1 týden poté, co se měřením parodontu určí přesný stav parodontu. Vzorky budou odebrány z oblastí s největší pravděpodobnou hloubkou kapsy. Při odběru vzorků gingivální štěrbinové tekutiny bude oblast izolována vatovými tampony a mikrobiální zubní plak na zubu bude odstraněn pomocí vatových pelet a poté bude provedeno krátkodobé sušení pomocí osvěžovače vzduchu ze vzdálenosti 20 cm. pravý úhel. Poté se od přibližných oblastí ke vstupu do drážky s mírným odporem umístí standardní absorpční papírové proužky 2x8 mm a po 30 sekundách čekání se každý papírový proužek vloží do eppendorfovy zkumavky a skladuje se při -80 °C. (New Brunswick Scientific Ultra Low Temperature Freezer). Každému pacientovi budou odebrány vzorky ze 6 zubů.

V případě krvácení z gingivální rýhy během odběru vzorku nebude vzorek z této oblasti odebrán.

Vzorky GCF odebrané a skladované při -80°C budou analyzovány na Istanbulské univerzitě, Istanbulská lékařská fakulta, Ústav lékařské biochemie. Hladiny IL-10, IL-12 a IL-18 vzorků GCF budou stanoveny metodou ELISA.

Na základě získaných dat bude porovnán klinický stav a biochemické analýzy pacientů a bude zkoumán vztah mezi nimi.

Podle Klasifikace onemocnění a stavů parodontu a periimplantátu z roku 2017 je průměrný rozdíl 11 jednotek mezi výsledky získanými z interleukinových biomarkerů ve skupině jedinců s parodontitidou stupně B-C stupně III-IV a zdravých jedinců a minimálním vzorkem k najděte odhadovanou 15-jednotkovou směrodatnou odchylku významné velikosti (za předpokladu chyby typu I 5 %, chyby typu II 20 % za předpokladu síly 0,80): 30 osob pro každou skupinu. S ohledem na nesprávné vzorky bude do každé skupiny odebráno 30+30 lidí (30 zdravých kontrol, 30 případů parodontitidy) Naše studie bude provedena na systémově zdravých pacientech ve věku 18-65 let, u kterých byla diagnostikována parodontitida stupně B-C stadia III-IV podle Klasifikace parodontálních a periimplantátových onemocnění a stavů z roku 2017 na parodontologické klinice Stomatologické fakulty Istanbulské univerzity.

Po klinickém vyšetření a měření pacientů, kteří splnili kritéria pro zařazení a podepsali dobrovolný souhlas, budou vzorky gingivální křevikální tekutiny pacientům analyzovány a výsledky vyhodnoceny. Vzorky budou izolovány z gingivální štěrbiny pomocí absorpčního periopaperu a biochemicky analyzovány soupravami ELISA.

Skupina paradentózy:

• 18-65 let
• Nemít žádné systémové onemocnění (onemocnění, která neovlivňují stav parodontu)
• Nekuřák
• Během posledních 6 měsíců jste neužívali antibiotika a/nebo neužívali imunosupresiva
• Během posledních 6 měsíců jsem nepodstoupil žádnou parodontologickou léčbu
• Žádné těhotenství a kojení
• Neužívat pravidelně žádné léky
• Mít alespoň 20 zubů
• Stupeň B-C stadium III-IV periodontální onemocnění podle Klasifikace parodontálních a periimplantátových onemocnění a stavů z roku 2017

Zdravá skupina:

U pacientů, kteří se přihlásili na Stomatologickou fakultu Istanbulské univerzity, Ústav parodontologie, budou do studie zařazeni parodontálně zdraví jedinci, kteří nesplňují výše uvedená kritéria onemocnění, kteří nemají v anamnéze žádným způsobem parodontitidu. Skládá se z jedinců s klinicky zdravou dásní na neporušeném parodontu, kteří měli skóre BOP méně než 10 % a PD≤3 mm, nevykazovali žádnou ztrátu vazby nebo rentgenovou ztrátu kosti.