Livelli di IL-10, IL-12 e IL-18 nel fluido crevicolare gengivale di pazienti con parodontite e controlli sani

L'interleuchina-10 (IL-10) è una delle più potenti citochine antinfiammatorie, in quanto induce anergia delle cellule T (non reattività a un antigene) e riduce la produzione di alcune citochine proinfiammatorie. L'espressione alterata di IL-10, tuttavia, la predisposizione genetica e la presenza di specifici batteri parodontali possono contribuire alla rottura dell'equilibrio Th1/Th2 e allo sviluppo di parodontite aggressiva.

L'interleuchina-12 (IL-12) è un eterodimero composto da subunità p35 e p40, che formano l'IL-12 bioattiva (p70). IL-12 è un mediatore essenziale della risposta immunitaria innata precoce e un induttore chiave dell'immunità cellulare. Il suo compito più importante è stimolare le cellule T e la produzione di interferone-γ (IFN-γ) da parte delle cellule natural killer, promuovendo così le risposte Th1. L'importanza dell'IL-12 non si limita all'avvio di una risposta immunitaria, ma può contribuire al mantenimento dell'immunità. Perché in assenza di IL-12, le risposte Th1 si perdono rapidamente.

L'interleuchina-18 (IL-18) è una citochina pro-infiammatoria appartenente alla famiglia delle citochine IL-1. Questa citochina è stata originariamente identificata come un killer naturale e una citochina che induce l'IFN-γ prodotto dalle cellule T. IL-18 agisce in sinergia con IL-12 per supportare la produzione di IFN-γ e la crescita delle cellule Th1, ma non dipende da IL-12 per la sua attività.

Quando queste informazioni vengono riunite, la valutazione degli effetti delle concentrazioni di IL-10, IL-12 e IL-18 nel fluido crevicolare gengivale sulla malattia parodontale insieme ai parametri clinici è stato il punto del nostro studio.

Si prevede di includere 30 individui parodontalmente sani con parodontite di stadio III-IV di grado B-C secondo la classificazione 2017 delle malattie e delle condizioni parodontali e perimplantari, che hanno presentato domanda al Dipartimento di parodontologia della Facoltà di odontoiatria dell'Università di Istanbul, dopo valutazioni cliniche e radiografiche. Tutte le persone da includere saranno informate sullo scopo e sul metodo dello studio e sarà ottenuto il loro consenso.

Prima dello studio, si assicurerà che la condizione orale dell'individuo non sia causata da nessun altro fattore (malattia sistemica sconosciuta, malattia del sangue, ecc.). Le persone incluse nello studio; verranno registrati l'anamnesi sistemica e orale, lo stato di fumo, lo stato di malattia sistemica e verranno effettuate le seguenti misurazioni cliniche.

Verranno prelevati campioni di fluido crevicolare gengivale (GCF) da individui adatti al modello di studio e verranno registrati gli indici parodontali. I livelli di IL-10, IL-12 e IL-18 saranno determinati nei campioni di GCF prelevati. Il ricercatore non includerà persone che sono state incluse in altri studi che hanno superato o saranno approvati dal comitato etico, e non includerà persone che saranno incluse in questo studio, si impegna a non includerlo nel suo lavoro.

Le misurazioni cliniche includono l'indice di placca (PI), l'indice gengivale (GI), il sanguinamento al sondaggio (BOP), la profondità di sondaggio (PD), il margine gengivale libero (FGM), la misurazione del livello di attacco clinico (CAL), i parametri di mobilità. Le misurazioni sono state effettuate dallo stesso ricercatore da sei diversi punti di tutti i denti: mesio-buccale, medio-buccale, disto-buccale, mesio-linguale/palatinale, medio-linguale/palatinale, disto-linguale/palatinale. Sarà misurato e registrato da una singola persona con la sonda parodontale di tipo Williams (Hu-Friedy, USA). Queste misurazioni non sono invasive e ci permetteranno di determinare lo stato parodontale. Dopo l'esame clinico e le misurazioni dei pazienti che hanno soddisfatto i criteri di inclusione e firmato il modulo di consenso volontario, verranno analizzati i campioni di fluido crevicolare gengivale da prelevare dai pazienti e verranno valutati i risultati. I campioni saranno isolati dal solco gengivale con l'ausilio di strisce di carta assorbente (Periopaper®, Proflow Inc., Amitiyville, NY, USA) e le analisi biochimiche saranno effettuate nei campioni ottenuti con il metodo ELISA secondo i protocolli inclusi nel kit. Le analisi biochimiche saranno condotte presso l'Università di Istanbul, Facoltà di Medicina di Istanbul, Dipartimento di Biochimica Medica.

I metodi di valutazione clinica previsti per essere applicati nello studio sono elencati di seguito:

1. Indice di placca
2. Profondità di sondaggio
3. Sanguinamento al sondaggio
4. Misurazione del livello di attaccamento clinico
5. Margine gengivale libero
6. Indice gengivale
7. Mobilità Campioni di strisce di carta (Periopaper®, Proflow Inc., Amitiyville, NY, USA) posizionati nel solco gengivale verranno inseriti in tubi eppendorf per l'esame di laboratorio nella sessione 1 settimana dopo che l'esatto stato parodontale è stato determinato dalle misurazioni parodontali. I campioni saranno prelevati dalle aree con la profondità probabile della tasca più profonda. Durante l'ottenimento di campioni di fluido crevicolare gengivale, l'area verrà isolata con tamponi di cotone e la placca dentale microbica sul dente verrà rimossa con pellet di cotone, quindi verrà eseguito un processo di asciugatura a breve termine con deodorante per ambienti da una distanza di 20 cm a un angolo retto. Quindi, strisce di carta assorbente standard da 2x8 mm verranno posizionate dalle regioni approssimali all'ingresso del solco con una leggera resistenza e dopo aver atteso 30 secondi, ciascuna striscia di carta verrà posizionata in un tubo eppendorf e conservata a -80°C. (Congelatore a temperatura ultra bassa New Brunswick Scientific). I campioni saranno prelevati da 6 denti in ciascun paziente.

In caso di sanguinamento dal solco gengivale durante il prelievo del campione, il campione non verrà prelevato da quella zona.

I campioni di GCF prelevati e conservati a -80°C saranno analizzati presso l'Università di Istanbul, Facoltà di Medicina di Istanbul, Dipartimento di Biochimica Medica. I livelli di IL-10, IL-12 e IL-18 dei campioni GCF saranno determinati mediante metodo ELISA.

Alla luce dei dati si confronteranno le condizioni cliniche e le analisi biochimiche dei pazienti e si esaminerà la relazione tra di esse.

Secondo la Classificazione delle malattie e delle condizioni parodontali e perimplantari del 2017, una differenza media di 11 unità tra i risultati ottenuti dai biomarcatori dell'interleuchina nel gruppo di individui con parodontite di stadio III-IV di grado B-C e individui sani, e un campione minimo da trova la dimensione significativa della deviazione standard stimata di 15 unità (assumendo un errore di tipo I del 5%, errore di tipo II del 20% assumendo una potenza di 0,80): 30 persone per ogni gruppo. Considerando i campioni sbagliati, verranno prese 30+30 persone in ciascun gruppo (30 controlli sani, 30 casi di parodontite) Il nostro studio sarà condotto su pazienti sistemicamente sani di età compresa tra 18 e 65 anni a cui è stata diagnosticata una parodontite di grado B-C stadio III-IV secondo la classificazione 2017 delle malattie e delle condizioni parodontali e perimplantari nella clinica di parodontologia della Facoltà di odontoiatria dell'Università di Istanbul.

Dopo l'esame clinico e le misurazioni dei pazienti che hanno soddisfatto i criteri di inclusione e firmato il modulo di consenso volontario, verranno analizzati i campioni di fluido crevicolare gengivale prelevati dai pazienti e verranno valutati i risultati. I campioni saranno isolati dal crevicolo gengivale con l'ausilio della periocarta assorbente e analizzati biochimicamente con kit ELISA.

Gruppo parodontite:

• 18-65 anni
• Non avere alcuna malattia sistemica (malattie che non influenzano lo stato parodontale)
• Non fumatore
• Non ha ricevuto cure antibiotiche e/o non ha usato farmaci immunosoppressori negli ultimi 6 mesi
• Non aver ricevuto alcun trattamento parodontale negli ultimi 6 mesi
• Niente gravidanza e allattamento
• Non usare regolarmente alcun farmaco
• Avere almeno 20 denti
• Malattia parodontale di grado B-C stadio III-IV secondo la Classificazione 2017 delle malattie e condizioni parodontali e perimplantari

Gruppo sano:

Nei pazienti che hanno presentato domanda alla Facoltà di Odontoiatria, Dipartimento di Parodontologia dell'Università di Istanbul, verranno inclusi nello studio individui parodontalmente sani che non soddisfano i criteri di malattia di cui sopra, che non hanno in alcun modo una storia di parodontite. Consisteva in individui con gengiva clinicamente sana su un parodonto intatto che avevano un punteggio BOP inferiore al 10% e PD≤3 mm, non mostravano perdita di attacco o perdita ossea radiografica.