Уровни IL-10, IL-12 и IL-18 в жидкости десневой борозды у пациентов с пародонтитом и у здоровых людей

Интерлейкин-10 (ИЛ-10) является одним из наиболее сильнодействующих противовоспалительных цитокинов, поскольку он вызывает анергию Т-клеток (невосприимчивость к антигену) и снижает выработку некоторых провоспалительных цитокинов. Однако измененная экспрессия IL-10, генетическая предрасположенность и наличие специфических пародонтальных бактерий могут способствовать нарушению баланса Th1/Th2 и развитию агрессивного периодонтита.

Интерлейкин-12 (ИЛ-12) представляет собой гетеродимер, состоящий из субъединиц р35 и р40, которые образуют биоактивный ИЛ-12 (р70). IL-12 является важным медиатором раннего врожденного иммунного ответа и ключевым индуктором клеточного иммунитета. Его наиболее важной задачей является стимуляция Т-клеток и продукции интерферона-γ (IFN-γ) естественными клетками-киллерами, тем самым стимулируя ответы Th1. Значение IL-12 не ограничивается инициированием иммунного ответа, он может способствовать поддержанию иммунитета. Потому что в отсутствие IL-12 ответы Th1 быстро теряются.

Интерлейкин-18 (ИЛ-18) представляет собой провоспалительный цитокин, принадлежащий к семейству цитокинов ИЛ-1. Этот цитокин первоначально был идентифицирован как естественный киллер и цитокин, который индуцирует IFN-γ, продуцируемый Т-клетками. IL-18 действует синергически с IL-12, поддерживая продукцию IFN-γ и рост клеток Th1, но его активность не зависит от IL-12.

Когда эта информация собрана воедино, целью нашего исследования стала оценка влияния концентраций IL-10, IL-12 и IL-18 в жидкости десневой борозды на заболевание пародонта вместе с клиническими параметрами.

Планируется включить 30 пародонтологически здоровых лиц с пародонтитом III-IV стадии B-C в соответствии с Классификацией пародонтальных и периимплантатных заболеваний и состояний 2017 года, которые обратились в отделение пародонтологии стоматологического факультета Стамбульского университета после клинических и рентгенологических оценок. Все лица, которые будут включены, будут проинформированы о цели и методе исследования, и будет получено их согласие.

Перед исследованием необходимо убедиться, что состояние полости рта человека не вызвано каким-либо другим фактором (неизвестное системное заболевание, заболевание крови и т. д.). лица, включенные в исследование; системный и устный анамнез, статус курения, статус системного заболевания будут зарегистрированы, и будут сделаны следующие клинические измерения.

Образцы жидкости десневой борозды (GCF) будут взяты у лиц, подходящих для модели исследования, и будут записаны пародонтальные индексы. Уровни IL-10, IL-12 и IL-18 будут определяться в взятых образцах GCF. Исследователь не будет включать лиц, которые были включены в другие исследования, которые прошли или будут одобрены комитетом по этике, и не будет включать лиц, которые будут включены в это исследование, обязуется не включать его в свою работу.

Клинические измерения включают индекс зубного налета (PI), индекс десны (GI), кровоточивость при зондировании (BOP), глубину зондирования (PD), свободный край десны (FGM), измерение уровня клинического прикрепления (CAL), параметры подвижности. Измерения проводились одним и тем же исследователем в шести различных точках всех зубов: мезио-щечной, среднещечной, дистально-щечной, мезио-язычной/небной, срединно-язычной/небной, дистально-язычной/небной. Он будет измерен и зарегистрирован одним человеком с помощью пародонтального зонда типа Williams (Hu-Friedy, США). Эти измерения являются неинвазивными и позволяют определить состояние пародонта. После клинического осмотра и измерений пациентов, которые соответствовали критериям включения и подписали форму добровольного согласия, образцы жидкости из десневой борозды, которые должны быть взяты у пациентов, будут проанализированы, и результаты будут оценены. Образцы будут выделены из десневой борозды с помощью впитывающих бумажных полосок (Periopaper®, Proflow Inc., Amitiyville, NY, USA), и в образцах, полученных методом ELISA, будут проведены биохимические анализы в соответствии с протоколами, включенными в набор. Биохимические анализы будут проводиться в Стамбульском университете, Стамбульском медицинском факультете, на кафедре медицинской биохимии.

Методы клинической оценки, которые планируется применить в исследовании, перечислены ниже:

1. Индекс зубного налета
2. Глубина зондирования
3. Кровотечение при зондировании
4. Клиническое измерение уровня привязанности
5. Свободная десневая маржа
6. Десневой индекс
7. Подвижность Образцы бумажных полосок (Periopaper®, Proflow Inc., Amitiyville, NY, USA), помещенных в десневой желобок, будут помещены в пробирки eppendorf для лабораторного исследования во время сеанса через 1 неделю после определения точного состояния пародонта путем пародонтальных измерений. Пробы будут браться из участков с наиболее вероятной глубиной кармана. При получении образцов жидкости десневой борозды область изолируют ватными дисками, микробный зубной налет на зубе удаляют ватными тампонами, а затем проводят кратковременный процесс сушки освежителем воздуха с расстояния 20 см на прямой угол. Затем стандартные абсорбирующие бумажные полоски размером 2x8 мм помещают от апроксимальных областей до входа в канавку с небольшим сопротивлением, и после ожидания в течение 30 секунд каждую бумажную полоску помещают в пробирку Эппендорф и хранят при -80°C. (Сверхнизкотемпературный морозильник New Brunswick Scientific). Образцы будут взяты из 6 зубов у каждого пациента.

В случае кровотечения из десневой бороздки во время взятия образца образец из этой области браться не будет.

Образцы GCF, взятые и хранящиеся при температуре -80°C, будут проанализированы в Стамбульском университете, Стамбульский медицинский факультет, кафедра медицинской биохимии. Уровни IL-10, IL-12 и IL-18 в образцах GCF будут определять методом ELISA.

В свете полученных данных будут сравниваться клинические состояния и биохимические анализы пациентов и выясняться взаимосвязь между ними.

В соответствии с Классификацией пародонтальных и периимплантатных заболеваний и состояний 2017 г., средняя разница в 11 единиц между результатами, полученными по биомаркерам интерлейкинов, в группе лиц с пародонтитом III-IV стадий B-C и у здоровых лиц, а также минимальная выборка для найти оценочный значимый размер стандартного отклонения из 15 единиц (при условии, что ошибка типа I составляет 5%, ошибка типа II составляет 20%, при условии мощности 0,80): 30 человек для каждой группы. С учетом неправильных проб в каждую группу будет взято по 30+30 человек (30 здоровых контрольных, 30 больных пародонтитом). Наше исследование будет проведено на системно здоровых пациентах в возрасте 18-65 лет с диагнозом пародонтит III-IV степени B-C. в соответствии с Классификацией пародонтальных и периимплантационных заболеваний и состояний 2017 года в пародонтологической клинике стоматологического факультета Стамбульского университета.

После клинического осмотра и измерений пациентов, которые соответствовали критериям включения и подписали форму добровольного согласия, образцы жидкости десневой борозды, взятые у пациентов, будут проанализированы, и результаты будут оценены. Образцы будут изолированы от десневой борозды с помощью впитывающей перио-бумаги и подвергнуты биохимическому анализу с помощью наборов ELISA.

Группа пародонтита:

• 18-65 лет
• Отсутствие каких-либо системных заболеваний (заболевания, не влияющие на состояние пародонта)
• Некурящий
• Не получали лечение антибиотиками и/или не принимали иммунодепрессанты в течение последних 6 месяцев.
• Не получали лечения пародонта в течение последних 6 месяцев.
• Отсутствие беременности и лактации
• Не использовать какие-либо лекарства регулярно
• Наличие не менее 20 зубов
• Заболевание пародонта III-IV стадии B-C согласно Классификации пародонтальных и периимплантатных заболеваний и состояний 2017 г.

Здоровая группа:

Среди пациентов, обратившихся на факультет стоматологии Стамбульского университета, кафедра пародонтологии, в исследование будут включены здоровые пародонтологи, не соответствующие вышеуказанным критериям заболевания, не имеющие в анамнезе пародонтита. Включали лиц с клинически здоровой десной на интактном периодонте, у которых показатель BOP был менее 10% и PD≤3 мм, не было выявлено потери прикрепления или рентгенологической потери кости.