Níveis de IL-10, IL-12 e IL-18 no fluido crevicular gengival de pacientes com periodontite e controles saudáveis

A interleucina-10 (IL-10) é uma das citocinas anti-inflamatórias mais potentes, pois induz a anergia das células T (não responsividade a um antígeno) e reduz a produção de algumas citocinas pró-inflamatórias. A expressão alterada de IL-10, no entanto, a predisposição genética e a presença de bactérias periodontais específicas podem contribuir para a ruptura do equilíbrio Th1/Th2 e o desenvolvimento de periodontite agressiva.

A interleucina-12 (IL-12) é um heterodímero formado pelas subunidades p35 e p40, que formam a bioativa IL-12 (p70). A IL-12 é um mediador essencial da resposta imune inata precoce e um indutor chave da imunidade celular. Sua tarefa mais importante é estimular a produção de células T e interferon-γ (IFN-γ) pelas células natural killer, promovendo assim respostas Th1. A importância da IL-12 não se limita a iniciar uma resposta imune, ela pode contribuir para a manutenção da imunidade. Porque na ausência de IL-12, as respostas Th1 são rapidamente perdidas.

A interleucina-18 (IL-18) é uma citocina pró-inflamatória pertencente à família de citocinas IL-1. Esta citocina foi originalmente identificada como um assassino natural e uma citocina que induz o IFN-γ produzido pelas células T. A IL-18 atua sinergicamente com a IL-12 para apoiar a produção de IFN-γ e o crescimento de células Th1, mas não depende da IL-12 para sua atividade.

Quando essas informações são reunidas, a avaliação dos efeitos das concentrações de IL-10, IL-12 e IL-18 no fluido crevicular gengival sobre a doença periodontal, juntamente com parâmetros clínicos, tem sido o objetivo de nosso estudo.

Está planejado incluir 30 indivíduos periodontalmente saudáveis ​​com periodontite grau B-C estágio III-IV de acordo com a Classificação de Doenças e Condições Periodontais e Peri-implantares de 2017, que se inscreveram no Departamento de Periodontologia da Faculdade de Odontologia da Universidade de Istambul, após avaliações clínicas e radiográficas. Todos os indivíduos a serem incluídos serão informados sobre o objetivo e método do estudo e seu consentimento será obtido.

Antes do estudo, será assegurado que a condição bucal do indivíduo não seja causada por nenhum outro fator (doença sistêmica desconhecida, doença sanguínea, etc.). Os indivíduos incluídos no estudo; anamnese sistêmica e oral, tabagismo, estado de doença sistêmica serão registrados e as seguintes medições clínicas serão feitas.

Amostras de fluido crevicular gengival (GCF) serão coletadas de indivíduos adequados para o modelo de estudo e os índices periodontais serão registrados. Os níveis de IL-10, IL-12 e IL-18 serão determinados nas amostras GCF coletadas. A pesquisadora não incluirá indivíduos que tenham sido incluídos em outros estudos que tenham sido aprovados ou venham a ser aprovados pelo comitê de ética, assim como não incluirá indivíduos que venham a ser incluídos neste estudo, compromete-se a não incluí-lo em seus trabalhos.

As medições clínicas incluem Índice de Placa (PI), Índice Gengival (GI), Sangramento à Sondagem (BOP), Profundidade de Sondagem (PD), Margem Gengival Livre (FGM), Medição do Nível de Inserção Clínica (CAL), parâmetros de Mobilidade. As medidas foram feitas pelo mesmo pesquisador em seis pontos diferentes de todos os dentes: mésio-vestibular, meio-vestibular, disto-vestibular, mésio-lingual/palatina, meio-lingual/palatina, disto-lingual/palatina. Será medido e registrado por uma única pessoa com a sonda periodontal tipo Williams (Hu-Friedy, EUA). Essas medições não são invasivas e nos permitirão determinar o estado periodontal. Após o exame clínico e as medidas dos pacientes que preencheram os critérios de inclusão e assinaram o termo de consentimento voluntário, as amostras de fluido crevicular gengival a serem coletadas dos pacientes serão analisadas e os resultados serão avaliados. Amostras serão isoladas do sulco gengival com auxílio de tiras de papel absorvente (Periopaper®, Proflow Inc., Amitiyville, NY, USA) e análises bioquímicas serão feitas nas amostras obtidas pelo método ELISA de acordo com os protocolos incluídos no kit. As análises bioquímicas serão realizadas na Universidade de Istambul, Faculdade de Medicina de Istambul, Departamento de Bioquímica Médica.

Os métodos de avaliação clínica planejados para serem aplicados no estudo estão listados abaixo:

1. Índice de placa
2. Profundidade de Sondagem
3. Sangramento à Sondagem
4. Medição do Nível de Apego Clínico
5. Margem Gengival Livre
6. Índice gengival
7. Mobilidade Amostras de tiras de papel (Periopaper®, Proflow Inc., Amitiyville, NY, EUA) colocadas no sulco gengival serão colocadas em tubos eppendorf para exame laboratorial na sessão 1 semana após o estado periodontal exato ser determinado por medições periodontais. As amostras serão retiradas de áreas com a maior profundidade provável do bolsão. Ao obter amostras de fluido crevicular gengival, a área será isolada com chumaços de algodão e a placa microbiana no dente será removida com bolinhas de algodão e, em seguida, um processo de secagem de curto prazo será feito com purificador de ar a uma distância de 20 cm a um ângulo reto. Em seguida, tiras de papel absorvente padrão 2x8 mm serão colocadas desde as regiões proximais até a entrada do sulco com leve resistência e após aguardar 30 segundos, cada tira de papel será colocada em um tubo eppendorf e armazenada a -80°C. (Congelador de temperatura ultrabaixa da New Brunswick Scientific). Amostras serão retiradas de 6 dentes em cada paciente.

Em caso de sangramento do sulco gengival durante a coleta da amostra, a amostra não será retirada dessa área.

Amostras GCF coletadas e armazenadas a -80°C serão analisadas na Universidade de Istambul, Faculdade de Medicina de Istambul, Departamento de Bioquímica Médica. Os níveis de IL-10, IL-12 e IL-18 das amostras de GCF serão determinados pelo método ELISA.

À luz dos dados, as condições clínicas e análises bioquímicas dos pacientes serão comparadas e a relação entre elas será examinada.

De acordo com a Classificação de Doenças e Condições Periodontais e Peri-implantares de 2017, uma diferença média de 11 unidades entre os resultados obtidos dos biomarcadores de interleucina no grupo de indivíduos com periodontite grau B-C estágio III-IV e indivíduos saudáveis, e uma amostra mínima para encontre o tamanho significativo do desvio padrão estimado de 15 unidades (assumindo erro Tipo I 5%, erro Tipo II 20% assumindo Poder 0,80): 30 pessoas para cada grupo. Considerando as amostras erradas, 30+30 pessoas serão incluídas em cada grupo (30 controles saudáveis, 30 casos de periodontite). de acordo com a Classificação de Doenças e Condições Periodontais e Peri-implantares de 2017 na Clínica de Periodontologia da Faculdade de Odontologia da Universidade de Istambul.

Após o exame clínico e as medidas dos pacientes que atenderam aos critérios de inclusão e assinaram o termo de consentimento voluntário, as amostras de fluido crevicular gengival coletadas dos pacientes serão analisadas e os resultados serão avaliados. As amostras serão isoladas do sulco gengival com auxílio de papel absorvente e analisadas bioquimicamente com kits de ELISA.

Grupo Periodontite:

• 18-65 anos
• Não ter nenhuma doença sistêmica (doenças que não afetam o estado periodontal)
• Não fumante
• Não ter recebido tratamento antibiótico e/ou usado medicação imunossupressora nos últimos 6 meses
• Não ter recebido nenhum tratamento periodontal nos últimos 6 meses
• Sem gravidez e lactação
• Não usar nenhum medicamento regularmente
• Ter pelo menos 20 dentes
• Doença periodontal Grau B-C estágio III-IV de acordo com a Classificação de Doenças e Condições Periodontais e Peri-implantares de 2017

Grupo Saudável:

Em pacientes que se inscreveram na Faculdade de Odontologia da Universidade de Istambul, Departamento de Periodontologia, indivíduos com saúde periodontal que não atendam aos critérios de doença acima, que não tenham histórico de periodontite de qualquer forma, serão incluídos no estudo. Consiste em indivíduos com gengiva clinicamente saudável em um periodonto intacto que tiveram uma pontuação BOP inferior a 10% e PD≤3mm, não apresentaram perda de inserção ou perda óssea radiográfica.