Poziomy IL-10, IL-12 i IL-18 w płynie dziąsłowym pacjentów z zapaleniem przyzębia i zdrowych osób z grupy kontrolnej

Interleukina-10 (IL-10) jest jedną z najsilniejszych cytokin przeciwzapalnych, ponieważ indukuje anergię komórek T (brak odpowiedzi na antygen) i zmniejsza produkcję niektórych cytokin prozapalnych. Zmieniona ekspresja IL-10, jednak predyspozycje genetyczne i obecność specyficznych bakterii przyzębia mogą przyczynić się do zaburzenia równowagi Th1/Th2 i rozwoju agresywnego zapalenia przyzębia.

Interleukina-12 (IL-12) jest heterodimerem składającym się z podjednostek p35 i p40, które tworzą bioaktywną IL-12 (p70). IL-12 jest niezbędnym mediatorem wczesnej wrodzonej odpowiedzi immunologicznej i kluczowym induktorem odporności komórkowej. Jego najważniejszym zadaniem jest stymulowanie produkcji limfocytów T i interferonu-γ (IFN-γ) przez komórki NK, promując w ten sposób odpowiedź Th1. Znaczenie IL-12 nie ogranicza się do inicjowania odpowiedzi immunologicznej, może przyczyniać się do utrzymania odporności. Ponieważ przy braku IL-12, odpowiedzi Th1 są szybko tracone.

Interleukina-18 (IL-18) jest prozapalną cytokiną należącą do rodziny cytokin IL-1. Ta cytokina została pierwotnie zidentyfikowana jako naturalny zabójca i cytokina, która indukuje IFN-γ wytwarzany przez limfocyty T. IL-18 działa synergistycznie z IL-12, wspierając produkcję IFN-γ i wzrost komórek Th1, ale jej aktywność nie zależy od IL-12.

Po zebraniu tych informacji ocena wpływu stężeń IL-10, IL-12 i IL-18 w płynie dziąsłowym na choroby przyzębia wraz z parametrami klinicznymi była celem naszego badania.

Planuje się włączenie 30 zdrowych przyzębia osób z zapaleniem przyzębia stopnia B-C w stopniu III-IV według klasyfikacji chorób i schorzeń przyzębia i wokół implantów z 2017 r., którzy po ocenie klinicznej i radiologicznej zgłosili się do Zakładu Periodontologii Wydziału Stomatologii Uniwersytetu w Stambule. Wszystkie osoby, które mają zostać włączone, zostaną poinformowane o celu i sposobie badania oraz uzyskana zostanie ich zgoda.

Przed badaniem upewnimy się, że stan jamy ustnej danej osoby nie jest spowodowany jakimkolwiek innym czynnikiem (nieznana choroba ogólnoustrojowa, choroba krwi itp.). Osoby objęte badaniem; zostanie odnotowany wywiad ogólnoustrojowy i ustny, palenie tytoniu, stan choroby ogólnoustrojowej i zostaną wykonane następujące pomiary kliniczne.

Próbki płynu dziąsłowego (GCF) zostaną pobrane od osób odpowiednich do modelu badawczego i zostaną zarejestrowane wskaźniki periodontologiczne. Poziomy IL-10, IL-12 i IL-18 zostaną określone w pobranych próbkach GCF. Badacz nie będzie uwzględniał osób, które zostały uwzględnione w innych badaniach, które przeszły pomyślnie lub zostaną zatwierdzone przez komisję etyczną, oraz nie uwzględni osób, które zostaną uwzględnione w tym badaniu, zobowiązuje się nie włączać go do swojej pracy.

Pomiary kliniczne obejmują wskaźnik płytki nazębnej (PI), wskaźnik dziąseł (GI), krwawienie podczas sondowania (BOP), głębokość sondowania (PD), wolny brzeg dziąseł (FGM), kliniczny pomiar poziomu przyczepu (CAL), parametry ruchliwości. Pomiary zostały wykonane przez tego samego badacza w sześciu różnych punktach wszystkich zębów: mezjalno-policzkowej, środkowo-policzkowej, dystalno-policzkowej, mezjalno-językowej/podniebiennej, środkowo-językowej/podniebiennej, dystalno-językowej/podniebiennej. Zostanie zmierzona i zarejestrowana przez jedną osobę sondą periodontologiczną typu Williams (Hu-Friedy, USA). Pomiary te są nieinwazyjne i pozwolą określić stan przyzębia. Po badaniu klinicznym i pomiarach pacjentów, którzy spełnili kryteria włączenia i podpisali formularz dobrowolnej zgody, pobrane próbki płynu dziąsłowego zostaną poddane analizie i ocenie wyników. Próbki zostaną wyizolowane z rowka dziąsłowego za pomocą pasków bibuły chłonnej (Periopaper®, Proflow Inc., Amitiyville, NY, USA) oraz przeprowadzone zostaną analizy biochemiczne w próbkach uzyskanych metodą ELISA zgodnie z protokołami zawartymi w zestaw. Analizy biochemiczne zostaną przeprowadzone na Uniwersytecie w Stambule, na Wydziale Lekarskim w Stambule, na Wydziale Biochemii Medycznej.

Poniżej wymieniono metody oceny klinicznej planowane do zastosowania w badaniu:

1. Indeks płytki nazębnej
2. Głębokość sondowania
3. Krwawienie podczas sondowania
4. Kliniczny pomiar poziomu przywiązania
5. Wolny brzeg dziąsła
6. Indeks dziąseł
7. Mobilność Próbki pasków papieru (Periopaper®, Proflow Inc., Amitiyville, NY, USA) umieszczone w rowku dziąsłowym zostaną umieszczone w probówkach Eppendorfa do badań laboratoryjnych w sesji 1 tydzień po dokładnym określeniu stanu przyzębia na podstawie pomiarów periodontologicznych. Próbki będą pobierane z obszarów o najgłębszej prawdopodobnej głębokości kieszonek. Podczas pobierania próbek płynu dziąsłowego obszar zostanie odizolowany płatkami kosmetycznymi, a płytka bakteryjna zęba na zębie zostanie usunięta za pomocą płatków bawełnianych, a następnie zostanie przeprowadzony proces krótkotrwałego suszenia odświeżaczem powietrza z odległości 20 cm w kąt prosty. Następnie, z niewielkim oporem, od obszarów stycznych do wejścia rowka, umieszcza się standardowe chłonne paski bibuły 2x8 mm i po odczekaniu 30 sekund każdy pasek bibuły umieszcza się w probówce Eppendorfa i przechowuje w temperaturze -80°C. (zamrażarka New Brunswick Scientific do bardzo niskich temperatur). Próbki zostaną pobrane z 6 zębów każdego pacjenta.

W przypadku krwawienia z rowka dziąsłowego podczas pobierania próbki, próbka nie zostanie pobrana z tego obszaru.

Próbki GCF pobrane i przechowywane w temperaturze -80°C będą analizowane na Uniwersytecie w Stambule, na Wydziale Medycznym w Stambule, na Wydziale Biochemii Medycznej. Poziomy IL-10, IL-12 i IL-18 w próbkach GCF zostaną określone metodą ELISA.

W świetle uzyskanych danych porównane zostaną warunki kliniczne i analizy biochemiczne pacjentów oraz zbadana zostanie zależność między nimi.

Według Klasyfikacji Chorób i Schorzeń Przyzębia i Periimplantów z 2017 r. średnio 11 jednostek różnicy między wynikami uzyskanymi z biomarkerów interleukinowych w grupie osób z zapaleniem przyzębia stopnia B-C w stopniu III-IV i osobami zdrowymi oraz minimalną próbą do znaleźć szacunkową wielkość odchylenia standardowego wynoszącą 15 jednostek (przyjmując błąd I rodzaju 5%, błąd II rodzaju 20% przy założeniu potęgi 0,80): 30 osób w każdej grupie. Biorąc pod uwagę niewłaściwe próbki, do każdej grupy zostanie przydzielonych 30+30 osób (30 zdrowych osób kontrolnych, 30 przypadków zapalenia przyzębia) Nasze badanie zostanie przeprowadzone na zdrowych układowo pacjentach w wieku 18-65 lat, u których zdiagnozowano zapalenie przyzębia stopnia B-C stopnia III-IV zgodnie z klasyfikacją chorób i schorzeń przyzębia i okolic implantów z 2017 r. w Klinice Periodontologii Wydziału Stomatologii Uniwersytetu w Stambule.

Po badaniu klinicznym i pomiarach pacjentów, którzy spełnili kryteria włączenia i podpisali formularz dobrowolnej zgody, pobrane od pacjentów próbki płynu dziąsłowego zostaną poddane analizie i ocenie wyników. Próbki zostaną wyizolowane z kieszonki dziąsłowej za pomocą chłonnej periopapierki i poddane analizie biochemicznej za pomocą zestawów ELISA.

Grupa chorób przyzębia:

• 18-65 lat
• Brak jakiejkolwiek choroby ogólnoustrojowej (choroby, które nie wpływają na stan przyzębia)
• Niepalący
• W ciągu ostatnich 6 miesięcy nie otrzymywał antybiotyków i/lub nie stosował leków immunosupresyjnych
• Nie leczono periodontologicznie w ciągu ostatnich 6 miesięcy
• Brak ciąży i laktacji
• Niestosowanie regularnie żadnych leków
• Posiadanie co najmniej 20 zębów
• Stopień B-C stopień III-IV choroby przyzębia według Klasyfikacji Chorób i Schorzeń Przyzębia i Wokół Implantów z 2017 r.

Zdrowa grupa:

U pacjentów, którzy zgłosili się na Wydział Stomatologii Uniwersytetu w Stambule, Zakład Periodontologii, do badania zostaną włączone osoby zdrowe pod względem przyzębia, które nie spełniają powyższych kryteriów chorobowych, u których nie występowały żadne choroby przyzębia w wywiadzie. Badanie obejmowało osoby z klinicznie zdrowymi dziąsłami na nienaruszonym przyzębiu, u których wskaźnik BOP wynosił mniej niż 10% i PD≤3 mm, u których nie wykazano utraty przyczepu ani utraty kości na zdjęciu radiograficznym.