Nechirurgická léčba parodontu a hladiny periostinu

Observační prospektivní studie byla navržena tak, aby charakterizovala změny periostinu v čase po nechirurgické parodontální léčbě v séru a GCF na klinice parodontologie na Fakultě zubního lékařství Hatay Mustafa Kemal University, Hatay, Turecko. Protokol studie byl schválen Etickou komisí pro využití lidských subjektů ve výzkumu Hatay Mustafa Kemal University (č. protokolu: 2019/118). Studie byla provedena v souladu s principy Helsinské deklarace a provedena podle pokynů CONSORT (Schulz, Altman, & Moher, 2010). Tento studijní projekt byl finančně podpořen koordinátorem vědeckých výzkumných projektů univerzity Hatay Mustafa Kemal (19M051).

Jednotlivci byli do studie zahrnuti od prosince 2019 do srpna 2021. Před klinickým parodontologickým vyšetřením byl od každého účastníka získán písemný informovaný souhlas.

Studijní populace

Do studie bylo zařazeno 48 dospělých jedinců. Účastníci byli rekrutováni do 2 skupin podle pohlaví s 24 účastníky v každé: skupina s periodontálně zdravými (PH) a periodontitis (P). V souladu s demografickými proměnnými pacientů zařazených do skupiny P byli zařazeni pacienti do skupin PH.

Parametry parodontu

Klinické parametry parodontu byly zaznamenávány jedním kalibrovaným vyšetřujícím (k = 0,95) (autor AS). Pro CAL byla stanovena dohoda mezi zkoušejícím. Reprodukovatelnost uvnitř vyšetřovatele byla stanovena opakovaným vyšetřením 10 subjektů s jednohodinovým intervalem. Klinická měření parodontu byla hodnocena pomocí následujících měření parodontu pro diagnostiku parodontu v obou skupinách a také v 1. měsíci, 3. měsíci po nechirurgickém parodontologickém ošetření ve skupině s parodontitidou.

Měření byla provedena pomocí Williamsovy periodontální sondy (Hu-Friedy, Chicago, IL, USA) a zahrnovala sondování hloubky kapsy (PPD), úroveň klinického připojení (CAL), index plaku (PI) (Silness & Loe, 1964), gingivální index (GI) (Loe & Silness, 1963) a procento krvácení při sondování (BOP) (Ainamo & Bay, 1975) na šesti místech na zub (mezio-bukální, bukální, disto-bukální, meziolingvální, lingvální a disto -lingvální) na každém zubu.

Diagnóza onemocnění a stavů parodontu byla provedena podle radiografických a klinických diagnostických kritérií navržených v roce 2017 World Workshop on Classification of Periodontal and peri-implant Diseases and Conditions (Caton et al., 2018). Jedinci s BOP < 10 % bez ztráty přilnutí a rentgenové ztráty kosti byli považováni za osoby s periodontálním zdravím (Tonetti & Sanz, 2019). Kritéria pro parodontitidu zahrnovala pacienty s CAL ≥ 5 mm na dvou nebo více interproximálních místech a PPD ≥ 6 mm na jednom nebo více interproximálních místech. Do této studie byla zahrnuta pouze fáze III-IV (těžká) parodontitida (Tonetti, Greenwell, & Kornman, 2018).

Parodontální intervence

Pacienti s paradentózou byli léčeni jednostupňovou celoústní dezinfekcí. Dezinfekce celých úst zahrnovala odlupování v celých ústech a procedury plánování kořenů během 24 hodin ve dvou sezeních. Každé sezení bylo praktikováno 60 minut ve dvou po sobě jdoucích dnech. Subgingivální výplach a čištění jazyka byly provedeny pomocí 1% CHX gelu po dobu 1 minuty. Ústní vody s 0,12 % CHX byly prováděny po dobu 30 s na začátku a na konci každého sezení a dvakrát denně po dobu 2 týdnů (Quirynen et al., 1995).

Sbírka vzorků GCF

Vzorky GCF byly odebrány po 8 hodinách nočního hladovění a jeden týden po klinickém měření parodontu na začátku ve dvou skupinách a poté 24. h, 48. h, 14. den 1. měsíce, 3. měsíc po nechirurgické parodontální léčbě (Akalin, Baltacioglu , Alver a Karabulut, 2007). Vzorky byly odebrány ze strany zubů s PPD ≥6 mm a BOP pozitivní u pacientů s parodontitidou. Každému účastníkovi bylo odebráno šest vzorků GCF. Vzorky byly odebrány z meziálního a distálního místa na každém ze tří zubů (řezáky, premoláry a moláry). Kontaminaci slinami bylo zabráněno izolací pomocí bavlněných smotků a jemným sušením oblasti odběru na vzduchu. Vzorky kontaminované slinami nebo krví nebyly zahrnuty. Plak byl jemně odstraněn z oblasti odběru parodontální kyretou. Vzorky byly odebírány během 30 sekund pomocí standardizovaných papírových proužků (Periopaper; Oraflow Inc., Plainview, NY) otvorovou metodou. (Rudin, Overdiek, & Rateitschak, 1970) Objemy byly měřeny na předem kalibrovaném elektronickém zařízení pro měření gingiválních tekutin (Oraflow Inc., Plainview, NY)|| (Capple, Landini, Griffiths, Patel a Ward, 1999). Hodnoty elektronického zařízení byly vztaženy ke standardní křivce a převedeny na skutečný objem (ul). Všechny proužky Periopaper byly spojeny v plastových Eppendorfových mikrocentrifugačních zkumavkách. Do biochemické analýzy byly skladovány při -80 °C.

Všechny vzorky byly rozmraženy a do eppendorfových zkumavek obsahujících vzorkové proužky bylo přidáno 375 ul fosfátem pufrovaného fyziologického roztoku (pH: 7,00, 10 mM Na2P04, 137 mM NaCl a 2,7 mM KCI). Následně byly vzorky eluovány po dobu 30 minut při teplotě místnosti a (Capple et al., 1997) centrifugovány při 11 000 x g po dobu 15 minut při 4 °C. Bylo testováno měření hladin periostinu, IL-lp a FGF.

Odběr vzorků séra

Pacientům byly odebrány vzorky periferní žilní krve. Sérum bylo odděleno od buněk centrifugací při 2000 ot./min po dobu 10 minut, poté bylo skladováno při -80 °C, dokud nebyla provedena biochemická analýza.

Laboratorní rozbory

Hladiny periostinu, IL-lp a FGF byly měřeny enzymatickou imunoanalýzou (ELISA) za použití komerčně dostupných souprav při vlnové délce 450 nm v ELISA Readeru (Thermo Fisher Scientific Multiscan Go-Finland).

Měření hladin periostinu ve vzorcích GCF

Hladiny periostinu byly měřeny pomocí ELABSCIENCE Human POSTN/OSF-2 (Kit kat. č.: E-EL-H6113). Rozsahy testu pro periostin byly 3,13-200 ng/ml; citlivost, 1,88 ng/ml, koeficienty variance intra a intertest (CV %) byly < 10 %.

Měření hladin IL-1p ve vzorcích GCF

Hladiny IL-lp byly měřeny pomocí ELABSCIENCE Human IL-lp (Kit kat. č.: E-EL-H0149). Rozsahy testu pro IL-lp byly 7,81-500 pg/ml; citlivost, 4,69 pg/ml, koeficienty variance intra a intertest (CV %) byly < 10 %.

Měření hladin FGF ve vzorcích GCF

Hladiny FGF byly měřeny pomocí ELABSCIENCE Human FGF21 (Kit kat. č.: E-EL-H0074). Rozsahy testu pro FGF byly 31,25-2000 pg/ml; citlivost, 18,75 pg/ml, koeficienty variance v rámci testu a mezi testy (CV %) byly < 10 %.

Statistická analýza

Normalita distribuce spojitých proměnných byla testována Shapiro-Wilkovým testem. Popisné statistiky byly prezentovány jako průměr a směrodatná odchylka (průměr±sd) pro parametrické distribuované proměnné a medián (interkvartilní rozmezí) pro neparametrické distribuované proměnné.

K analýze asociací mezi kategorickými proměnnými byl použit chí-kvadrát test. Studentův t-test pro normálně rozdělené numerické proměnné a Mann Whitney u test pro nenormálně rozdělené numerické proměnné byly provedeny pro porovnání 2 nezávislých skupin pro numerická data. Freidmanův test byl proveden pro různé časové body s neparametrickými proměnnými. Pro post hoc párové vícenásobné srovnávací analýzy byly provedeny Dunnovy vícenásobné srovnávací testy.

Statistická analýza byla provedena pomocí SPSS pro Windows verze 24.0 a hodnota P <0,05 byla přijata jako statisticky významná.