Niechirurgiczne leczenie przyzębia i poziomy periostyny

Prospektywne badanie obserwacyjne miało na celu scharakteryzowanie zmian w okostnej w czasie po niechirurgicznym leczeniu periodontologicznym w surowicy i GCF w Zakładzie Periodontologii na Wydziale Stomatologii Uniwersytetu Hatay Mustafa Kemal, Hatay, Turcja. Protokół badania został zatwierdzony przez Komisję Etyki ds. Wykorzystania Ludzi w Badaniach Uniwersytetu Hatay Mustafa Kemal (Protokół nr: 2019/118). Badanie zostało przeprowadzone zgodnie z założeniami Deklaracji Helsińskiej i przeprowadzone w wytycznych CONSORT (Schulz, Altman i Moher, 2010). Ten projekt badawczy był wspierany finansowo przez koordynatora projektów badań naukowych Hatay Mustafa Kemal University (19M051).

Osoby zostały włączone do badania od grudnia 2019 do sierpnia 2021. Pisemną świadomą zgodę uzyskano od każdego uczestnika przed klinicznym badaniem periodontologicznym.

Badana populacja

Do badania włączono czterdzieści osiem dorosłych osób. Uczestnicy zostali zrekrutowani do 2 grup dobranych pod względem płci, po 24 uczestników w każdej: grupa zdrowych przyzębia (PH) i grupa z zapaleniem przyzębia (P). Zgodnie ze zmiennymi demograficznymi pacjentów włączonych do grupy P, uwzględniono pacjentów z grup PH.

Parametry przyzębia

Parametry kliniczne periodontologiczne były rejestrowane przez jednego wykalibrowanego egzaminatora (k = 0,95) (autor AS). Zgoda międzyegzaminacyjna została ustalona dla CAL. Odtwarzalność wewnątrz egzaminatora została określona poprzez powtarzane badania 10 osób z jednogodzinną przerwą. Kliniczne pomiary periodontologiczne oceniano za pomocą następujących pomiarów periodontologicznych do diagnostyki periodontologicznej w obu grupach, a także w 1. i 3. miesiącu po niechirurgicznym leczeniu przyzębia w grupie z zapaleniem przyzębia.

Pomiary przeprowadzono za pomocą sondy periodontologicznej Williamsa (Hu-Friedy, Chicago, IL, USA) i obejmowały głębokość kieszonek (PPD), poziom przyczepu klinicznego (CAL), wskaźnik płytki nazębnej (PI) (Silness & Loe, 1964), indeks (GI) (Loe i Silness, 1963) oraz odsetek krwawień podczas sondowania (BOP) (Ainamo i Bay, 1975) w sześciu miejscach na ząb (mezjalno-policzkowy, policzkowy, dystalno-policzkowy, mezjalno-językowy, językowy i dystalny językowe) na każdym zębie.

Diagnozę chorób i schorzeń przyzębia prowadzono zgodnie z radiograficznymi i klinicznymi kryteriami diagnostycznymi zaproponowanymi przez World Workshop on Classification of Periodontal and Peri-implant Diseases and Conditions 2017 (Caton i in., 2018). Osoby z BOP < 10% bez utraty przyczepu i radiologicznej utraty kości uznano za zdrowe przyzębia (Tonetti i Sanz, 2019). Kryteria zapalenia przyzębia obejmowały pacjentów z CAL ≥ 5 mm w dwóch lub więcej miejscach międzyzębowych i PPD ≥ 6 mm w jednym lub więcej miejscach międzyzębowych. W niniejszym badaniu uwzględniono tylko zapalenie przyzębia w stadium III-IV (ciężkie) (Tonetti, Greenwell i Kornman, 2018).

Interwencja periodontologiczna

Pacjentów z zapaleniem przyzębia leczono jednoetapową pełną dezynfekcją jamy ustnej. Dezynfekcja całej jamy ustnej obejmowała skaling całej jamy ustnej i procedury planowania korzeni w ciągu 24 godzin w dwóch sesjach. Każdą sesję ćwiczono przez 60 minut przez dwa kolejne dni. Irygację poddziąsłową i szczotkowanie języka wykonano 1% żelem CHX przez 1 min. Płukanki z 0,12% CHX wykonywano przez 30 sekund na początku i na końcu każdej sesji oraz dwa razy dziennie przez 2 tygodnie (Quirynen i in., 1995).

Pobieranie próbek GCF

Próbki GCF pobierano po 8 godzinach nocnego postu i tydzień po klinicznych pomiarach przyzębia na początku badania w dwóch grupach, a następnie w 24., 48., 14. dniu 1. miesiąca, 3. miesiąca po niechirurgicznym leczeniu przyzębia (Akalin, , Alver i Karabulut, 2007). Próbki pobierano od strony zębów z PPD ≥6 mm oraz BOP dodatnim u pacjentów z zapaleniem przyzębia. Na uczestnika pobrano sześć próbek GCF. Próbki pobrano z obszaru mezjalnego i dystalnego każdego z trzech zębów (siekaczy, przedtrzonowców i trzonowców). Zanieczyszczeniu śliną zapobiegano poprzez izolację za pomocą wacików i delikatne suszenie powietrzem obszaru pobierania próbek. Próbki zanieczyszczone śliną lub krwią nie zostały uwzględnione. Płytka została delikatnie usunięta z obszaru pobierania próbek za pomocą kirety periodontologicznej. Próbki zebrano w ciągu 30 sekund za pomocą standardowych pasków papieru (Periopaper; Oraflow Inc., Plainview, NY) metodą kryzową. (Rudin, Overdiek i Rateitschak, 1970) Objętości mierzono na wstępnie skalibrowanym elektronicznym urządzeniu do pomiaru płynu dziąsłowego (Oraflow Inc., Plainview, NY)|| (Chapple, Landini, Griffiths, Patel i Ward, 1999). Wartości urządzenia elektronicznego odniesiono do krzywej wzorcowej i przeliczono na rzeczywistą objętość (µl). Wszystkie paski papieru Perio połączono w plastikowych probówkach do mikrowirówki Eppendorf. Przechowywano je w temperaturze -80°C do czasu analizy biochemicznej.

Wszystkie próbki rozmrożono i do probówek eppendorf zawierających paski próbek dodano 375 μl soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (pH: 7,00, 10 mM Na2PO4, 137 mM NaCl i 2,7 mM KCl). Następnie próbki eluowano przez 30 minut w temperaturze pokojowej i (Chapple i in., 1997) wirowano przy 11000 x g przez 15 minut w temperaturze 4°C. Oznaczono poziom periostyny, IL-1β i FGF.

Pobieranie próbek surowicy

Od pacjentów pobrano próbki krwi żylnej obwodowej. Surowicę oddzielono od komórek przez wirowanie przy 2000 obr./min przez 10 min, po czym przechowywano ją w temperaturze -80°C do czasu wykonania analizy biochemicznej.

Analizy laboratoryjne

Poziomy periostyny, IL-1β i FGF mierzono za pomocą testu immunoenzymatycznego (ELISA) przy użyciu dostępnych w handlu zestawów przy długości fali 450 nm w czytniku ELISA (Thermo Fisher Scientific Multiscan Go-Finland).

Pomiar poziomu periostyny ​​w próbkach GCF

Poziomy periostyny ​​mierzono za pomocą ELABSCIENCE Human POSTN/OSF-2 (zestaw nr kat.: E-EL-H6113). Zakresy testów dla periostyny ​​wynosiły 3,13-200 ng/ml; czułość, 1,88 ng/ml, współczynniki wariancji wewnątrz i między testami (CV%) wynosiły < 10%.

Pomiar poziomów IL-1β w próbkach GCF

Poziomy IL-1β mierzono za pomocą ELABSCIENCE Human IL-1β (zestaw nr kat.: E-EL-H0149). Zakresy testów dla IL-1β wynosiły 7,81-500 pg/ml; czułość, 4,69 pg/ml, współczynniki wariancji wewnątrz i między testami (CV%) wynosiły < 10%.

Pomiar poziomów FGF w próbkach GCF

Poziomy FGF mierzono za pomocą ELABSCIENCE Human FGF21 (zestaw nr kat.: E-EL-H0074). Zakresy testów dla FGF wynosiły 31,25-2000 pg/ml; czułość, 18,75 pg/ml, współczynniki wariancji wewnątrz i między testami (CV%) wynosiły < 10%.

Analiza statystyczna

Normalność rozkładu zmiennych ciągłych badano testem Shapiro-Wilka. Statystyki opisowe przedstawiono jako średnią i odchylenie standardowe (średnia±sd) dla parametrycznych zmiennych o rozkładzie oraz medianę (rozstęp międzykwartylowy) dla nieparametrycznych zmiennych o rozkładzie.

Do analizy powiązań między zmiennymi kategorialnymi zastosowano test chi-kwadrat. Test t Studenta dla zmiennych numerycznych o rozkładzie normalnym i test u Manna Whitneya dla zmiennych numerycznych o rozkładzie innym niż normalny przeprowadzono w celu porównania 2 niezależnych grup dla danych liczbowych. Test Freidmana przeprowadzono dla różnych punktów czasowych ze zmiennymi nieparametrycznymi. Testy wielokrotnych porównań Dunna przeprowadzono dla analiz wielokrotnych porównań parami post hoc.

Analizę statystyczną przeprowadzono za pomocą SPSS dla Windows w wersji 24.0, a wartość P <0,05 uznano za istotną statystycznie.